CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. Phương pháp nghiên cứu
2.3.5. Phương pháp đánh giá viên nang chứa proliposome berberin
2.3.5.1. Hình thức
Thử bằng cảm quan.
2.3.5.2. Định lượng
Phương pháp thử: Phương pháp đo độ hấp thụ quang UV-Vis
Xây dựng đường chuẩn định lượng berberin tương tự mục 2.3.2.4.
Mẫu thử: Lấy 20 viên nang chứa PL BBR, tháo vỏ lấy hỗn hợp bột, trộn đều.
Cân một lượng hỗn hợp đóng nang tương ứng với 10,0 mg BBR, hòa tan trong 10ml methanol bằng siêu âm, ly tâm, lấy dịch trong lọc qua màng lọc kích thước lỗ lọc 0,45µm. Hút chính xác 1ml dịch lọc, cho vào bình định mức 100 ml, thêm ethanol 96%.
Mẫu trắng: cân các thành phần giống với hỗn hợp đóng nang nhưng khơng có
dược chất hịa tan trong methanol sau đó, pha lỗng bằng ethanol 96%.
Tiến hành đo quang các mẫu bằng phương pháp đo quang phổ UV- VIS ở bước sóng hấp thụ cực đại 350 nm. Nồng độ BBR trong mẫu thử được xác định dựa vào phương trình đường chuẩn.
2.3.5.3. Đánh giá khả năng giải phóng dược chất in vitro
Phương pháp thử: Phương pháp khuếch tán qua màng thẩm tích. Cách tiến hành: Chuẩn bị các dung dịch tương tự mục 2.3.2.5.
Mẫu thử: Cho 10ml mơi trường giải phóng vào túi thẩm tích 12 kDA đã ngâm
PL BBR vào túi rồi buộc túi thẩm tích vào cánh khuấy của máy thử độ hịa tan sao cho tồn bộ túi thẩm tích chìm trong mơi trường giải phóng.
Mẫu trắng: Tiến hành tương tự mẫu thử. Cho 1 vỏ nang rỗng vào túi thẩm tích.
Cho vào mỗi cốc của máy thử hịa tan 900 ml mơi trường thử giải phóng. Cài đặt nhiệt độ môi trường 37o
C, tốc độ cánh khuấy 50 vịng/phút. Dung dịch mơi trường giải phóng ở trong cốc mẫu thử và mẫu trắng được lấy ra 5 ml để định lượng dược chất giải phóng tại các thời điểm 1, 4, và 10 giờ bằng phương pháp quang phổ hấp thụ UV-Vis ở bước sóng 343 nm. Ngay sau khi rút mẫu ra, 5 ml mơi trường giải phóng mới ngay lập tức được đưa vào cốc thử.
Xác định nồng độ berberin trong mơi trường giải phóng tại thời điểm lấy mẫu từ phương trình hồi quy tuyến tính mơ tả mối tương quan giữa độ hấp thụ quang và nồng độ berberin. Phần trăm giải phóng được tính theo cơng thức:
𝑅𝑅(%) = 900 × 𝐶𝑛+ 5 × ∑ 𝐶𝑖
𝑛−1 𝑖=0
25 × 100
Trong đó Cn là nồng độ của BBR trong mơi trường giải phóng ở thời điểm n, 25 là hàm lượng berberin trong 1 viên nang.