Nhận xét: Hình ảnh chụp SEM cho thấy các hạt nano SSD đang bám xung quanh các chuỗi polyme trong khi một số tiểu phân nano đứng riêng lẻ. KTTP của các hạt nano khoảng 300nm, kết quả này phù hợp với kết quả ghi nhận được qua đánh giá KTTP bằng máy phân tích kích thước tiểu phân Zetasizer Ultra. Nhìn chung, các tiểu phân nano phân bố đồng đều trong hệ gel và tránh hiện tượng kết tụ do cản trở về mặt không gian.
3.7. Kết quả đánh giá khả năng kháng khuẩn in-vitro
42
Bảng 3.21. Kết quả xác định giá trị MIC bằng phương pháp vi pha loãng
Tên mẫu Nồng độ (mg/L) S.aureus E.coli Kem thị trường 24 16 Gel nano 32 12 Hỗn dịch nano 24 12 Dung dịch dược chất 32 24
Nhận xét: Hỗn dịch nano làm tăng đáng kể hoạt tính kháng khuẩn so với dung dịch dược chất. MIC của dung dịch dược chất cao gấp 1,3 lần so với hỗn dịch nano đối với cả hai loại vi khuẩn. Tác dụng kháng khuẩn của các tiểu phân nano SSD có thể do kích thước nhỏ và diện tích bề mặt lớn, giúp cho việc liên kết với màng tế bào vi khuẩn hiệu quả hơn. Đối với chủng S.aureus, gel nano có MIC cao hơn 1,3 lần so với kem thị trường cịn đối với chủng E.coli, kem thị trường có MIC cao hơn 1,3 lần so với gel nano.
Xác định vịng vơ khuẩn bằng phương pháp khuếch tán trên đĩa thạch
Bảng 3.22. Kết quả xác định đường kính vịng vơ khuẩn (mm)
Tên mẫu Đĩa 512 Đĩa 256
S.aureus E.coli S.aureus E.coli
Kem thị trường 18,24 17,46 18,45 12,38
Gel nano 29,84 22,36 29,04 21,08
Hỗn dịch nano 25,5 22,62 26,3 20,20
Dung dịch dược chất 14,6 16,18 14,08 12,56
Nhận xét: Bảng 3.22 cho thấy hiệu quả kháng khuẩn của nano SSD tăng lên đáng kể so với dung dịch dược chất đối với cả 2 loại vi khuẩn. Bên cạnh đó, việc phối hợp vào gel cũng cho thấy tác dụng kháng khuẩn tốt hơn so với chế phẩm trên thị trường.
43
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Kết luận
Qua q trình thực nghiệm, khóa luận tốt nghiệp đã thu được một số kết quả sau: 1. Đã bào chế được hỗn dịch nano chứa sulfadiazin bạc và đánh giá một số tính chất
của hệ tiểu phân nano
Đã khảo sát các yếu tố thuộc về công thức và quy trình, lựa chọn cơng thức cuối cùng là: 1 cối Công thức F33.4 Sulfadiazin bạc (g) 1,8 HPMC E6 (w/v) 0,5% PVA (w/v) 1% GMS (w/v) 3% Lecithin (w/v) 0,5%
Nước tinh khiết (ml) 30
Thông số nghiền bi
Khối lượng bi Ziconium
5 mm 300 g
Tốc độ nghiền 500 rpm
Thời gian 5 giờ
Chu kỳ nghiền 1 giờ - nghỉ 10 phút
Đánh giá được một số đặc tính của tiểu phân nano SSD
- Hình thức: Hỗn dịch màu trắng đục, đồng nhất, khơng có các tiểu phân kích thước lớn quan sát được bằng mắt thường.
- Kích thước tiểu phân trung bình là 275 ± 6,59 nm; chỉ số đa phân tán (PDI) là 0,3 ± 0,03.
- Kết quả chụp phổ hồng ngoại FT-IR: chứng minh sự có mặt của SSD và các tá dược trong hệ tiểu phân nano
- Kết quả đo DSC: cần thêm cơng cụ để đánh giá về đặc tính vật lý của hệ tiểu phân nano SSD.
2. Bước đầu bào chế được gel chứa nano SSD (1%, kl/kl) và đánh giá một số tính chất của hệ gel
Khảo sát ảnh hưởng của các loại và nồng độ tá dược tạo gel đến khả năng giải phóng dược chất qua màng CA của hệ gel chứa nano SSD. Lựa chọn công thức:
44
Thành phần Khối lượng
Hỗn dịch nano tương ứng với 200mg SSD Vừa đủ
HEC 0,15 g
Nước Vừa đủ 10 g
Đánh giá được một số đặc tính của gel chứa nano SSD (1%, kl/kl)
- Hình thức: gel có thể chất mịn màng, màu trắng, bám dính tốt, đồng nhất và không phân lớp
- Khả năng giải phóng dược chất qua màng CA sau 24h là 82,11%
- Khả năng kháng khuẩn in-vitro: gel nano hiệu quả hơn kem thị trường trên cả hai loại vi khuẩn S.aureus và E.coli khi xác định đường kính vịng vơ khuẩn. Đối với vi khuẩn E.coli, gel nano có MIC thấp hơn so với kem thị trường. Ở các đánh giá, hỗn dịch nano cũng thể hiện hiệu quả kháng khuẩn tốt hơn so với dung dịch dược chất.
Kiến nghị
Để tiếp tục hồn thiện đề tài nghiên cứu, chúng tơi xin có đề xuất sau:
- Hồn thiện cơng thức gel nano và theo dõi độ ổn định hóa học của gel nano - Đánh giá khả năng giải phóng dược chất in-vitro trên da chuột đã được gây bỏng
của gel nano
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt
1. Bộ Y tế (2018), "Dược thư Quốc gia Việt Nam", Nhà xuất bản Y học, pp. 237- 238.
2. Bộ Y tế (2009), "Kỹ thuật sản xuất dược phẩm", Nhà xuất bản Y học, pp. 51-54. 3. Đỗ Thanh Quỳnh (2020), "Bước đầu nghiên cứu bào chế hệ tiểu phân nano lipid
chứa sulfadiazin bạc", Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ, Học viện Quân Y.
4. Doãn Thị Hồng Nhung (2021), "Tiếp tục nghiên cứu bào chế viên nén chứa tiểu phân nano Fenofibrat", Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ, Trường Đại học Dược Hà Nội.
5. Nguyễn Ngọc Chiến (2019), "Công nghệ nano và ứng dụng trong sản xuất thuốc", Bộ môn Công nghiệp dược, Trường Đại học Dược Hà Nội.
6. Nguyễn Thị Ánh (2020), "Nghiên cứu bào chế tiểu phân nano Fenofibrat bằng phương pháp nghiền bi, ứng dụng vào viên nén chứa pellet", Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ, Trường Đại học Dược Hà Nội.
7. Trường Đại học Dược Hà Nội (2016), "Một số q trình và thiết bị trong cơng nghệ dược phẩm", Nhà xuất bản Y học.
Tiếng Anh
8. Alipour Reza, Khorshidi Alireza, et al. (2019), "Silver Sulfadiazine-loaded PVA/CMC Nanofibers for the Treatment of Wounds Caused by Excision",
Fibers Polymers, 20(12), pp. 2461-2469.
9. Alkhatib Delia, Zelai Noha (2021), "Preparation, characterization and stability of silver sulfadiazine nanoliposomes", Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 20(4), pp. 665-671.
10. Argenziano Monica, Ansari Irfan Aamer, et al. (2022), "Lipid-Coated Nanocrystals as a Tool for Improving the Antioxidant Activity of Resveratrol",
Antioxidants, 11(5), pp. 1007.
11. Bult Auke, Plug Cees M (1984), "Silver sulfadiazine", Analytical Profiles of Drug Substances, Elsevier, 13, pp. 553-571.
12. Chen Shizhu, Yang Junsheng, et al., High-energy planetary ball milling apparatus and method for the preparation of nanometer-sized powders. 2000,
Google Patents.
13. Fox Jr Charles L, Modak Shanta M (1974), "Mechanism of silver sulfadiazine action on burn wound infections", Antimicrobial agents chemotherapy, 5(6), pp. 582-588.
14. Gao Lei, Gan Hui, et al. (2016), "Evaluation of genipin-crosslinked chitosan hydrogels as a potential carrier for silver sulfadiazine nanocrystals", Colloids and
Surfaces B: Biointerfaces 148, pp. 343-353.
15. Gupta Ram B, Kompella Uday B (2006), Nanoparticle technology for drug delivery, Taylor & Francis New York, pp. 25-28.
16. Institute Clinical and Laboratory Standards (2018), "M100 Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing", (28th edition), pp. 54-62. 17. Jain Safal, Jain Sanjay, et al. (2010), "Design and development of solid lipid
nanoparticles for topical delivery of an anti-fungal agent", Drug delivery, 17(6), pp. 443-451.
18. Karki Khem Bahadur, Dhakal Neelam, et al. (2021), "Quality of Drug in Health Facilities: A Cross-sectional Study", Journal of Nepal Health Research Council, 18(4), pp. 644-648.
19. Kumar Neeraj, Goindi Shishu, et al. (2014), "Thermal characterization and compatibility studies of itraconazole and excipients for development of solid lipid nanoparticles", Journal of Thermal Analysis, 115(3), pp. 2375-2383.
20. Le Brun P, Froyen Ludo, et al. (1993), "The modelling of the mechanical alloying process in a planetary ball mill: comparison between theory and in-situ observations", Materials Science Engineering: A, 161(1), pp. 75-82.
21. Liu Xiaoya, Gan Hui, et al. (2019), "Silver sulfadiazine nanosuspension-loaded thermosensitive hydrogel as a topical antibacterial agent", International Journal
of Nanomedicine, 14, pp. 289.
22. Loh Zhi Hui, Samanta Asim Kumar, et al. (2015), "Overview of milling techniques for improving the solubility of poorly water-soluble drugs", Asian journal of pharmaceutical sciences, 10(4), pp. 255-274.
23. Malamatari Maria, Taylor Kevin MG, et al. (2018), "Pharmaceutical nanocrystals: production by wet milling and applications", Drug Discovery
Today, 23(3), pp. 534-547.
24. Mastiholimath Vinayak Shivamurthi, Valerie Coutinho Tracy Whitney, et al. (2020), "Formulation and evaluation of solid lipid nanoparticle containing silver sulfadiazine for second and third degree burn wounds and its suitable analytical method development and validation", Indian J Pharm Education Res, 54, pp. 31- 45.
25. Mishra Prabhat R, Al Shaal Loaye, et al. (2009), "Production and characterization of Hesperetin nanosuspensions for dermal delivery", International journal of pharmaceutics, 371(1-2), pp. 182-189.
26. Monafo William W, Freedman Bruce (1987), "Topical therapy for burns",
Surgical Clinics of North America, 67(1), pp. 133-145.
27. Nikam Sarika, Chavan Mayura, et al. (2014), "Solid lipid nanoparticles: A lipid based drug delivery", Nanotechnology, 1(3), pp. 5.
28. Oaks Rosemary J., Cindass Renford (2021), Silver Sulfadiazine, StatPearls
Publishing, Treasure Island (FL), pp.
29. Parmar Prashantkumar K, Wadhawan Jhanvi, et al. (2021), "Pharmaceutical nanocrystals: A promising approach for improved topical drug delivery", 26(10), pp. 2329-2349.
30. Patel Viral, Sharma Om Prakash, et al. (2018), "Nanocrystal: a novel approach to overcome skin barriers for improved topical drug delivery", Expert opinion on
drug delivery, 15(4), pp. 351-368.
31. Paul J. Sheskey Walter G. Cook, Colin G. Cable (2017), "Handbook of Pharmaceutical Excipients".
32. Peltonen Leena (2018), "Design space and QbD approach for production of drug nanocrystals by wet media milling techniques", Pharmaceutics, 10(3), pp. 104. 33. Peltonen Leena, Hirvonen Jouni (2010), "Pharmaceutical nanocrystals by
nanomilling: critical process parameters, particle fracturing and stabilization methods", Journal of pharmacy pharmacology, 62(11), pp. 1569-1579.
34. Sandri Giuseppina, Bonferoni Maria Cristina, et al. (2013), "Wound dressings based on silver sulfadiazine solid lipid nanoparticles for tissue repairing",
European Journal of Pharmaceutics Biopharmaceutics, 84(1), pp. 84-90.
35. Szegedi Ágnes, Popova Margarita, et al. (2014), "Silver-and sulfadiazine-loaded nanostructured silica materials as potential replacement of silver sulfadiazine",
Journal of Materials Chemistry B, 2(37), pp. 6283-6292.
36. Takatsuka Takayuki, Endo Tomoko, et al. (2009), "Nanosizing of poorly water soluble compounds using rotation/revolution mixer", Chemical Pharmaceutical
Bulletin, 57(10), pp. 1061-1067.
37. The United States Pharmacopeia 40 (2017), "Silver Sulfadiazine ", pp. 6256- 6258.
38. Trivedi Dahryn, Trivedi Mahendra Kumar, et al. (2018), "An Investigation of the Consciousness Energy Healing Therapy on Physicochemical and Thermal Properties of Silver Sulfadiazine", Global Journal of Pharmacy Pharmaceutical
Sciences,3(6).
39. Venkataraman Meenakshi, Nagarsenker Mangal (2013), "Silver sulfadiazine nanosystems for burn therapy", AAPS PharmSciTech, 14(1), pp. 254-264.
PHỤ LỤC
PHỤ LỤC 1: Kết quả thẩm định phương pháp định lượng sulfadiazin bạc
1.1. Thẩm định phương pháp định lượng SSD bằng UV-Vis a. Độ đặc hiệu:
Dung dịch chuẩn gốc, mẫu trắng được chuẩn bị như đã mô tả trong phương pháp đo quang (mục 2.3.2.1)
Dung dịch chuẩn: từ dung dịch chuẩn gốc pha lỗng thành dung dịch chuẩn có nồng độ chính xác khoảng 10 µg/ml.
Dung dịch thử: Tiến hành bào chế hệ tiểu phân nano SSD. Pha lỗng đến nồng độ khoảng 10µg/ml bằng dung dịch mẫu trắng.
Dung dịch placebo: tiến hành bào chế tương tự như quy trình bào chế mẫu thử,
nhưng khơng có dược chất. Cách pha lỗng tương tự như dung dịch thử.
Đo độ hấp thụ của mẫu chuẩn, mẫu thử và mẫu placebo tại bước sóng 244 nm với mẫu trắng là dung dịch amonia 2,8%.
PL1.1. Kết quả độ đặc hiệu Độ hấp thụ Chuẩn 0,634 Thử 0,646 Placebo 0,003 Ảnh hưởng tá dược (%) 0,46
Kết quả: Tại bước sóng 244 nm, xuất hiện pic của mẫu chuẩn và mẫu thử, mẫu placebo
có hấp thụ quang nhưng độ hấp thụ của mẫu placebo so với mẫu thử nhỏ hơn 2%. Như vậy, phương pháp đo quang đạt yêu cầu về độ đặc hiệu.
b. Độ tuyến tính
Dung dịch chuẩn gốc, mẫu trắng được chuẩn bị như đã mô tả trong phương pháp đo quang (mục 2.3.2.1)
Dung dịch chuẩn: Từ dung dịch chuẩn gốc pha loãng bằng dung dịch amonia 2,8%
thành các dung dịch chuẩn có nồng độ 4; 5; 8; 10; 12 µg/ml.
Đo độ hấp thụ của các mẫu tại bước sóng cực đại của SSD. Xây dựng đường chuẩn và phương trình biểu diễn mối quan hệ giữa độ hấp thụ quang và nồng độ dược chất.
Kết quả: Phương trình thể hiện mối liên hệ giữa độ hấp thụ quang với nồng độ SSD:
y = 0,0612x + 0,0124; R2 = 0,9994. Như vậy, có mối tương quan tuyến tính giữa độ hấp thụ quang với nồng độ SSD.
PL1.2. Đồ thị biểu diễn mối tương quan giữa độ hấp thụ quang và nồng độ sulfadiazin bạc trong dung dịch amonia 2,8%.
c. Độ lặp lại
Chuẩn bị 6 mẫu thử có nồng độ SSD khoảng 10 µg/ml và tiến hành đo độ hấp thụ ở bước sóng 244 nm. Xác định nồng độ dung dịch từ phương trình hồi quy tuyến tính.
PL1.3. Kết quả độ lặp lại các mẫu thử
STT Độ hấp thụ Nồng độ mẫu thử thực tế (µg/mL) 1 0,646 10,35 2 0,656 10,52 3 0,645 10,34 4 0,666 10,68 5 0,668 10,71 6 0.669 10,73 TB 10,55 SD 0,18 %RSD 1,7 Yêu cầu ≤ 2%
Kết quả: độ lặp lại khi đo 6 mẫu thử có RSD ≤ 2%. Vì vậy, phương pháp đạt yêu cầu
về độ lặp lại. d. Độ đúng
Dung dịch chuẩn gốc, dung dịch placebo được chuẩn bị như đã mô tả trong phương pháp đo quang định lượng dược chất (mục 2.3.2.1).
Dung dịch placebo thêm 90% chuẩn: hút 1 ml dung dịch placebo và 0,9 ml dung dịch chuẩn gốc, pha loãng thành 100ml bằng dung dịch mẫu trắng
y = 0.0612x + 0.0124 R² = 0.9994 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0 2 4 6 8 10 12 14 Nồng độ SSD (µg/mL) Độ hấ p thụ qua ng
Dung dịch placebo thêm 100% chuẩn: hút 1 ml dung dịch placebo và 1 ml dung dịch chuẩn gốc, pha loãng thành 100ml bằng dung dịch mẫu trắng
Dung dịch placebo thêm 110% chuẩn: hút 1 ml dung dịch placebo và 1,1 ml dung dịch chuẩn gốc, pha loãng thành 100ml bằng dung dịch mẫu trắng
Tiến hành đo độ hấp thụ tại bước sóng 244nm với mẫu trắng là dd amonia 2,8%
PL1.4. Kết quả độ đúng của các mẫu phân tích
% chuẩn
thêm vào Tên mẫu
Độ hấp
thụ % tìm lại Kết quả Đánh giá
90% 1 0,567 100,53 TB 100,35 Đạt 2 0,57 101,07 SD 0,83 3 0,561 99,44 %RSD 0,82 100% 1 0,632 101,08 TB 101,08 Đạt 2 0,629 100,59 SD 0,49 3 0,635 101,57 %RSD 0,48 110% 1 0,694 101,09 TB 101,04 Đạt 2 0,689 100,34 SD 0,67 3 0,698 101,68 %RSD 0,66
Kết quả: % tìm lại ở tất cả các dung dịch placebo thêm chuẩn đều nằm trong khoảng
97% – 103%, RSD ≤ 2%. Như vậy, phương pháp đạt yêu cầu về độ đúng.
Kết luận chung: Có thể sử dụng phương pháp đo quang để định lượng sulfadiazin bạc
1.2. Thẩm định phương pháp định lượng SSD bằng HPLC a. Tính tương thích hệ thống
Dung dịch chuẩn SSD được chuẩn bị như đã mô tả trong phương pháp HPLC (mục 2.3.2.2).
Tiến hành chạy sắc ký lặp lại 6 lần dung dịch chuẩn SSD có nồng độ 10 µg/ml.
PL1.5. Kết quả khảo sát tính tương thích hệ thống sắc ký
STT Thời gian lưu (phút) Diện tích pic (mAu.s) 1 9,289 185,1 2 9,287 183,7 3 9,291 184,2 4 9,290 185,4 5 9,292 182,5 6 9,257 185,8 TB 9,284 184,5
%RSD 0,15 0,67
Yêu cầu ≤ 1% ≤ 2%
Kết quả: Kết quả khảo sát cho thấy điều kiện sắc ký lựa chọn là phù hợp với hệ thống
sắc ký để định lượng sulfadiazin bạc với độ lệch chuẩn tương đối của thời gian lưu RSD ≤ 1% và của diện tích pic RSD ≤ 2%
b. Độ đặc hiệu
Các dung dịch chuẩn, dung dịch thử được chuẩn bị như đã mô tả trong phương pháp HPLC (mục 2.3.2.2).
Dung dịch trắng: dung môi pha động (ACN : acid phosphoric : nước = 99 : 1 : 900) Dung dịch placebo: tiến hành bào chế tương tự như quy trình bào chế mẫu thử, nhưng khơng có dược chất. Cách pha loãng tương tự như dung dịch thử.
Tiến hành chạy sắc ký dung dịch chuẩn, dung dịch thử, dung dịch placebo theo điều kiện sắc ký đã chọn.
PL1.6. Sắc ký đồ của mẫu placebo
PL1.8. Sắc ký đồ và thời gian lưu của mẫu chuẩn
Kết quả: Kết quả thẩm định độ đặc hiệu của phương pháp HPLC cho thấy: trên sắc ký
đồ, mẫu placebo khơng có pic tại thời gian lưu của pic chính sulfadiazin bạc trong dung dịch thử và dung dịch chuẩn.
c. Độ tuyến tính
Để khảo sát mức độ tương quan tuyến tính giữa diện tích pic và nồng độ SSD, các