Lần đo Thời gian lưu tR ( phút) Diện tích pic (mAU.s)
1 3,566 2402,2 2 3,573 2443,5 3 3,571 2465,2 4 3,567 2435,8 5 3,594 2484,4 6 3,589 2408,9 TB 3,577 2440,0 SD 0,012 28,961 RSD (%) 0,3 1,2
Kết quả cho thấy RSD (%) của thời gian lưu và diện tích pic đều nhỏ hơn 2%. Điều kiện HPLC cho độ lặp lại tốt về thời gian lưu và diện tích pic. Do đó, hệ thống sắc ký trên phù hợp với phép phân tích HPLC và có thể áp dụng trong định tính, định lượng DAP.PA trong viên nén.
3.1.1.2. Độ đặc hiệu
Tiến hành đo mẫu placebo, mẫu thử và mẫu chuẩn. Kết quả được trình bày ở sắc ký đồ hình phụ lục 1, phụ lục 2. Qua đó ta nhận thấy: Trên sắc ký đồ mẫu thử cho một pic có thời gian lưu tR =3,5 phút tương ứng với thời gian lưu của DAP.PA trên sắc ký đồ mẫu chuẩn. Trên sắc ký đồ mẫu placebo khơng cho pic nào có thời gian lưu tương tự ứng với thời gian lưu của DAP.PA. Thêm vào đó khi định lượng thử hịa tan lớp DAP.PA giải phóng ngay, trên sắc ký đồ phụ lục 3 ta thấy pic của DAP.PA tách hoàn toàn so với các pic tá dược. Ngoài ra khi định lượng thử hòa tan viên hai thành phần chứa MET.HCl và
DAP, trên sắc ký đồ phụ lục 4 ta thấy pic của MET(tR =1,2 phút) và DAP.PA (tR =3,5 phút) tách nhau hàn toàn. Kết quả trên đã chứng minh điều kiện sắc ký trên là hoàn toàn phù hợp để định lượng DAP.PA.
3.1.1.3. Độ tuyến tính
Chuẩn bị 05 dung dịch chuẩn có nồng độ lần lượt từ C1-C5: 10, 30, 50, 60, 100 µg/ml với dung môi pha mẫu là ACN:H2O (1:1), tiến hành chạy sắc ký các dung dịch chuẩn, ghi lại sắc ký đồ và xác định đáp ứng của pic. Khảo sát sự tương quan giữa y (diện tích pic) và x (nồng độ) bằng phương pháp bình phương tối thiểu:
Hình 3.1. Đồ thị biểu diễn mối tương quan giữa nồng độ và diện tích pic DAP.PA
Kết quả cho thấy giá trị R2 = 0,9999 ≥ 0,99 chứng tỏ trong khoảng nồng độ khảo sát có sự tương quan tuyến tính giữa nồng độ DAP.PA trong mẫu chuẩn với diện tích pic. Khoảng tuyến tính phù hợp để định lượng DAP.PA trong các mẫu thử.
Kết luận: Sau khi định lượng DAP.PA bằng HPLC cho thấy độ tin cậy của phương
pháp trên phương diện: tính phù hợp hệ thống, độ đặc hiệu, tính tuyến tính. Vậy có thể sử dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao để định lượng DAP.PA trong quá trình nghiên cứu.
3.1.2. Phương pháp định lượng metformin hydroclorid bằng đo quang phổ hấp thụ UV-VIS hấp thụ UV-VIS
3.1.2.1. Khảo sát sự ảnh hưởng của DAP.PA đến định lượng MET.HCl
Kết quả khảo sát sự ảnh hưởng của DAP.PA đến định lượng MET.HCl ở phụ lục 5 cho thấy, độ hấp thụ quang của mẫu đối chiếu (chỉ có MET.HCl) và mẫu thử (chứa cả MET.HCl và DAP.PA) khác nhau không đáng kể. Vậy nên ta có thể kết luận ở hàm lượng của viên bào chế, DAP.PA không làm ảnh hưởng đến định lượng MET.HCl bằng quang phổ hấp phụ UV-VIS. y = 46.635x + 54.359 R² = 0.9999 0 1000 2000 3000 4000 5000 0 20 40 60 80 100 120 Diện tích pic (m Au.s) Nồng độ DAP.PA (µg/ml)
3.1.2.2. Độ tuyến tính
Phương pháp quang phổ hấp thụ UV – VIS được sử dụng để định lượng Metformin.HCl từ các mẫu viên trong q trình nghiên cứu cơng thức và thử độ hịa tan dược chất từ các mẫu viên.
Tiến hành đo độ hấp thụ quang của dãy dung dịch chuẩn MET.HCl có nồng độ từ 1 – 10 µg/ml trong mơi trường dung dịch đệm phosphat pH 6,8, PH 1,2 với các bước sóng 232nm và 209nm. Xây dựng đồ thị thể hiện mối tương quan giữa nồng độ MET.HCl và độ hấp thụ quang. Kết quả được thể hiện ở bảng kết quả và hình dưới đây: