Hòa tan 400,1g cao tổng bằng 1000 mL nước cất sau đó thêm 500 mL
n-hexane. Tiến hành chiết 3 lần mỗi lần 500 mL n-hexane, dịch nước còn lại tiếp
tục chiết phân lớp với các dung môi EtOAc. Cặn chiết phân đoạn ethyl acetate (Cặn EtOAc) được phân tách trên cột silicagel, giải hấp bằng dung môi CH2Cl2- MeOH (100:0→0:100) thu được 4 phân đoạn (GME1–GME4). Chạy sắc ký cột phân đoạn GME1 trên cột silicagel pha thường với hệ dung n-hexane: ethyl acetate (2:1) sau đó tiếp tục chạy trên cột silica gel pha đảo RP18 với hệ dung môi methanol: nước (2:0,5) thu được hai hợp chất GM5a (16,0 mg) và GM5b (20,0 mg). Lấy 1g phân đoạn GME2 (21,0 g) phân tách trên cột silica gel pha thường với hệ dung môi n-hexane : ethyl acetate (0,2:2) thu được ba hợp chất GM1 (70,0 mg),
GM2 (5,0mg) và GM3 (10,0mg). Phân đoạn GME3(2,6 g) được giải hấp trên cột silica gel pha đảo RP18 với hệ dung môi MeOH:H2O (2:0,5) thu được hai hợp chất GM6 (30,0 mg) và GM7 (70,0mg). Phân đoạn GME4 (2,7 g) được giải hấp trên cột silica gel pha đảo RP18 với hệ dung môi MeOH:H2O (2:0,7) thu được hai hợp chất GM9 (6,0 mg) và GM10 (9,0mg). Phần dịch nước sau khi chiết bằng các dung môi hữu cơ được chạy qua cột Diaion HP-20 sau đó dùng nước rửa giải hết các hợp chất vô cơ và đường tự do. Phần cao GMW1 đã được khảo sát bằng sắc ký bản mỏng tuy nhiên không thấy xuất hiện vệt chất. Sau đó tiếp tục được giải hấp với các hệ dung
79
môi methanol/H2O = 1/1 và methanol 100% sau đó cất loại dung mơi dưới áp suất thấp thu được các cao chiết tương ứng với khối lượng lần lượt là 25 g; 150 g.
3.3.2. Xác định cấu trúc của các chất tinh sạch phân lập được
Cấu trúc của các hợp chất được xác định bằng cách kết hợp các phương pháp phổ hiện đại như phổ hồng ngoại (FT-IR), phổ khối (ESI-MS, HR-ESI-MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân một chiều (1H-NMR, 13C-NMR, DEPT) và hai chiều (HSQC, HMBC, 1H-1H-COSY, NOESY…).
- Hợp chất 1 (GM1) α-mangostin: Chất 1 (GM1) được phân lập từ cặn chiết
ethyl acetate là chất rắn kết tinh hình kim, màu vàng. Dữ liệu phổ NMR của chất 1 (Phụ lục 1): 1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ: 6,68 (1H, s, H-5); 6,22 (1H, s, H-4); 5,24 (1H, m, H-2’); 5,24 (1H, m, H-2”); 4,07 (2H, d, J = 5,5 Hz, H-1”); 3,76 (3H, s, OCH3); 3,29 (2H, d, J = 6,0 Hz, H-1’); 1,83 (3H, s, H-4”); 1,79 (3H, d, J = 0,5 Hz, H-4’); 1,68 (3H, d, J = 1,0 Hz, H-5”); 1,67 (3H, d, J =1,0 Hz, H-5’). 13C NMR (125 MHz, CD3OD) δ: 183,1 (C-9); 163,5 (C-3); 161,5 (C-1); 157,8 (C-6); 156,6 (C-5a); 156,1 (C-4a); 144,7 (C-7); 138,4 (C-8); 131,7 (C-3”); 131,6 (C-3’); 125,1 (C-2”); 123,9 (C-2’); 112,2 (C-8a); 111,4 (C-2); 103,7 (C-9a); 102,7 (C-5); 93,1 (C-4); 61,3 (OCH3); 27,1 (C-1”); 26,0 (C-5”); 25,9 (C-5’); 22,2 (C-1’); 18,3 (C-4”); 17,9 (C-4’).
Từ phổ khối ion dương ESI-MS (m/z 411,5) [M+H]+ (Phụ lục 1.1), kết hợp với
các dữ liệu từ phổ NMR nêu trên (Phụ lục 1.2) xác định được công thức phân tử của chất 1 là C24H26O6 (Hình 3.14).
Hình 3.14. Cấu trúc phân tử của hợp chất 1 (α-mangostin, GM1)
Trên cơ sở phân tích các số liệu phổ NMR và so sánh với tài liệu tham khảo [33-35] cho thấy các vị trí có độ chuyển dịch phù hợp, cho phép kết luận cấu trúc hóa học của hợp chất (1) GM1 được xác định là α-mangostin có cơng thức phân tử là C24H26O6, cơng thức cấu trúc phân tử Hình 3.6, tonc = 180-182˚C. Hợp chất này có
khả năng làm tăng cường sự biểu hiện của 5-HT2A/2C, muscarinic, histamine và mRNA của thụ thể bradykinin điều này chứng tỏ hợp chất này có tác dụng đối
80
kháng. Những đặc tính dược lý có thể một phần giải thích lợi ích của việc sử dụng măng cụt trong điều trị viêm, đau và các triệu chứng thần kinh [34].
- Hợp chất 2 (GM2)- γ-mangostin: Chất 2 (GM2) được phân lập từ cặn chiết ethyl acetate là chất rắn dạng bột, màu vàng.
Dữ liệu phổ NMR của chất 2 (Phụ lục 2): 1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ: 6,69 (1H, s, H-5); 6,25 (1H, s, H-4); 5,27 (2H, m, H-2’); 5,27 (2H, m, H-2”); 4,14 (2H, d, J = 6,8 Hz, H-1”); 3,34 (2H, m, H- 1’); 1,86 (3H, s, H-4”); 1,80 (3H, s, H-4’); 1,68 (6H, s, H-5’ và H-5”). 13C NMR (125 MHz, CD3OD) δ: 183,6 (C-9); 163,4 (C-3); 161,5 (C-1); 156,3 (C-6); 154,0 (C-5a); 153,8 (C-4a); 142,1 (C-7); 131,7 (C-3”); 131,6 (C-3’); 129,5 (C-8); 124,8 (C-2”); 123,9 (C-2’); 112,1 (C-8a); 111,1 (C-2); 103,9 (C-9a); 100,9 (C-5); 92,9 (C-4); 26,6 (C-1”); 26,0 (C-5”); 25,9 (C-5’); 22,2 (C-1’); 18,3 (C-4”); 17,9 (C-4’).
Từ phổ khối ion dương ESI-MS (m/z 397,9) [M+H]+ (Phụ lục 2.1) kết hợp với các dữ liệu phổ NMR trên xác định công thức phân tử của chất 2 là C23H24O6 (Hình 3.15).
So sánh các dữ liệu phổ NMR của chất 2 (GM2) với tài liệu tham khảo cho
thấy các vị trí có độ chuyển dịch hóa học hồn toàn trùng khớp với hợp chất γ- mangostin[38]. Như vậy, có thể khẳng định hợp chất 2 (GM2) chính là γ- mangostin với công thức phân tử được xác định là C23H24O6, công thức cấu trúc phân tử (Hình 3.15), tonc = 200÷202˚C. Hợp chất γ-mangostin có thể làm tăng α-
tubulin acetyl hóa trong các tế bào ung thư vú MDA-MD-231 và MCF-7. Nó cũng có khả năng chống tăng sinh mạnh cả hai dịng tế bào. Ngồi ra, nó có thể gây ra sự phát triển nhanh chóng của neurite trong các tế bào N2a [171].
Hình 3.15. Cấu trúc phân tử của chất 2 (γ-mangostin, GM2)
- Hợp chất 3 (GM3) -Garcinone D: Chất 3 (GM3) được phân lập từ cặn
chiết ethyl acetate là chất rắn dạng bột, màu vàng . Các dữ liệu phổ NMR của chất 5 (Phụ lục 3):
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ: 6,70 (1H, s, H-5); 6,25 (1H, s, H-4); 5,24 (1H, m, H-11); 3,86 (3H, s, 7-OCH3); 3,40 (2H, m, H-15); 3,30 (2H, d, J = 6,0 Hz, H-10), 1,79 (3H, br s, H-13); 1,67 (3H, s, H-14); 1,75 (2H, m, H-16); 1,34 (3H, s, H-18); 1,34
81 (3H, s, H-19). 13C NMR (125 MHz, CD3OD) δ: 183,1 (C-9); 163,6 (C-3), 161,6 (C-1), 157.8 (C-6), 156,7 (C-4a); 156,2 (C-5a); 144,7 (C-7); 139,8 (C-8); 131,8 (C-12); 123,8 (C- 11); 112,2 (C-2); 111,4 (C-8a); 103,7 (C-9a); 102,7 (C-5); 93,1 (C-4); 71,9 (C-17), 61.5 (7-OCH3), 45,6 (C-16); 29,0 (C-18 và C-19); 25,9 (C-13); 23,5 (C-15); 22,2 (C-10); 17,9 (C-14).
Công thức phân tử C24H28O7 được xác định từ phổ khối ion âm ESI-MS (m/z 427,9) [M-H]- (Phụ lục 3.1) kết hợp với dữ liệu phổ NMR trên.
So sánh dữ liệu quang phổ 1H và 13C-NMR với các dữ liệu của hợp chất Garcinone D [5], cho thấy độ chuyển dịch của các vị trí hồn tồn phù hợp. Vì vậy, hợp chất 3 (GM3) được xác đinh chính là Garcinone D có cấu trúc phân tử mơ tả trên Hình 3.16, tonc = 150-154˚C. Hợp chất Garcinone D là một xanthon tự nhiên
được phân lập từ măng cụt có khả năng thúc đẩy sự tăng sinh của tế bào gốc thần kinh C17.2. Garcinone D làm tăng mức độ protein của chất chuyển đổi tín hiệu được phosphoryl hóa và chất kích hoạt phiên mã 3 (p-STAT3), Cyclin D1 và liên quan đến yếu tố hạt nhân erythroid 2 (Nrf2), heme oxygenase-1 (HO-1) phụ thuộc vào nồng độ và thời gian [172] .
Hình 3.16. Cấu trúc của chất 3 (Garcinone D, GM3) và 4 (Garcinone C, GM6)
- Hợp chất 4 (GM6) -Garcinone C: Hợp chất 4 (GM6) được phân lập từ cặn
chiết ethyl acetate là chất rắn dạng bột, màu vàng. Các dữ liệu phổ NMR của chất 4 (Phụ lục 4): 1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ: 6,67 (1H, s, H-5); 6,23 (1H, s, H-4); 5,23 (1H, m, H-11); 3,43 (2H, m, H-15); 3,30 (2H, m, H-10); 1,78 (3H, br s, H-13); 1,66 (3H, br s, H-14); 1,76-1,79 (2H, m, H-16); 1,32 (3H, s, H-18); 1,32 (3H, s, H-19). 13C NMR (125 MHz, CD3OD) δ: 183,5 (C-9); 163,4 (C-3); 161,5 (C-1); 156,3 (C-6); 154,2 (C-4a); 153,3 (C-5a); 141,9 (C-7); 131,6 (C-12); 131,0 (C-8); 123,9
82
(C-11); 112,2 (C-2); 111,2 (C-8a); 103,9 (C-9a); 101,0 (C-5); 92,9 (C-4); 72,1 (C- 17), 44,4 (C-16); 29,1 (C-18 và C-19); 25,9 (C-13); 23,0 (C-15); 22,2 (C-10); 17,9 (C-14).
Công thức phân tử C23H26O7 của chất 4 được xác định từ phổ khối ion dương ESI-MS (m/z 415.4) [M+H]+ (phụ lục 4.1) kết hợp với dữ liệu phổ NMR trên.
Phổ 1H-NMR và 13C-NMR của hợp chất 4 có các tín hiệu khá tương đồng với hợp chất 3 (GM3) điều này cho thấy hợp chất 4 (GM6) có cấu trúc khung tương tự như hợp chất 3 (GM3) tuy nhiên trên phổ 1H, 13C-NMR của hợp chất 4 (GM6) không thấy xuất hiện tín hiệu cộng hưởng của nhóm oxymethyl như phổ của hợp chất 3 (GM3) đồng thời chỉ có tín hiệu của hai carbon của C-7 và C-8 chuyển dịch về phía trường mạnh tại δC 141,9 (C-7); 131,0 (C-8). Trên cơ sở phân tích phổ 1H-,
13C-NMR, DEPT (Phụ lục 4) của hợp chất 4 (GM6) và so sánh với tài liệu tham khảo [173]chứng tỏ cấu trúc dự đốn của 4 (GM6) là chính xác, cấu trúc phân tử mơ tả trên Hình 3.16. Chất này có tên là Garcinone C, lần đầu tiên được phân lập từ lồi
Garcinia mangostana năm 1981, tonc=216÷ 218oC [8]. Garcinone C có khả năng ức chế sự tồn tại tế bào của các tế bào tiền thần kinh của con người phụ thuộc vào thời gian và liều lượng ở nồng độ từ 0 đến 20 µM [173].
- Hợp chất 5 (GM7) – Mangostanol: Hợp chất 5 (GM7) được phân lập từ cặn
chiết ethyl acetate là chất rắn dạng bột, màu vàng. Các dữ liệu phổ NMR của chất 5 (Phụ lục 5):
1H NMR (500 MHz, MeOD) δ: 6,66 (1H, s, H-10); 6,32 (1H, s, H-12); 5,30 (1H, m, H-2'); 4,06 (1H, m, H-1'); 3,80 (1H, qt, J = 4,5; 6,0 Hz, H-3); 3,75 (3H, s, 8-OCH3); 2,93 (1H, dd, J = 4,5; 14,0 Hz, H-4a); 2,57 (1H, dd, J = 6,0; 14,0 Hz, H- 4b); 1,83 (3H, s, H-4'); 1,68 (3H, s, H-5'); 1,47 (3H, s, H-13); 1,35 (3H, s, H-14).
13C NMR (125 MHz, MeOD) δ: 178,8 (C-6); 162,1 (C-12a); 158,3 (C-11a);
156,8 (C-10a); 156,1 (C-5); 155,6 (C-9); 144,7 (C-8); 138,2 (C-7); 131,3 (C-3'); 125,7 (C-2'); 114,8 (C-6a); 107,5 (C-5a); 105,3 (C-4a); 102,2 (C-10); 94,4 (C-12); 79,5 (C-2); 69,6 (C-3); 61,2 (OCH3); 27,0 (C-4); 27,0 (C-1'); 26,0 (C-5'); 25,6 (C-13); 20,6 (C-14), 18,3 (C-4').
Công thức phân tử C24H26O7 được xác định từ píc ion giả phân tử trên phổ khối ion âm ESI-MS (m/z 425,9) [M-H]- (Phụ lục 5.1) kết hợp với dữ liệu từ phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) phân tích trên.
Trên cơ sở phân tích số liệu phổ ESI-MS, phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR và so sánh với tài liệu tham khảo có thể xác định hợp chất 5 (GM7) chính là mangostanol với công thức phân tử C24H26O7 [42], công thức cấu tạo phân tử mơ tả ở Hình 3.17; tonc= 164÷166˚C; [α]28D = +16,3 (c 0.1, MeOH).
83
Chất này được phân lập lần đầu tiên năm 1996 từ vỏ lồi Măng cụt. Hợp chất Mangostanol có hoạt tính chống ung thư, nó cho thấy các hoạt động đáng kể chống lại dòng tế bào CEM-SS, với giá trị IC50 là 9,6 µg/ mL. Mangostanol là một chất ức chế chọn lọc acetylcholinesterase (AChE) với giá trị IC50 là 5,77 µM [174].
Hình 3.17. Cấu trúc của hợp chất 5 (Mangostanol, GM7)
- Hợp chất 6 (GM9) Bannaxanthones A: Hợp chất 6 (GM9) được phân lập
từ cặn chiết ethyl acetate là chất rắn dạng bột, màu vàng. Các dữ liệu phổ NMR của chất 6 (Phụ lục 6): 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ: 6,68 (1H, s, H-5); 6,26 (1H, s, H-4); 5,29 (1H, m, H-2"); 4,14 (2H, d, J = 5,5 Hz, H-1"); 2,71 (2H, m, H-1'); 1,85 (3H, s, H- 5"); 1,70 (2H, m, H-2'); 1,67 (3H, s, H-4"); 1,29 (3H, s, H-4'); 1,29 (3H, m, H-5'). 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ: 183,5 (C-9); 163,3 (C-3); 161,5 (C-1); 156,3 (C-4a); 154,2 (C-5a); 153,9 (C-6); 142,2 (C-7); 131,7 (C-3"); 129,2 (C-8); 124,9 (C-2"); 111,9 (C-2); 111,8 (C-8a); 103,8 (C-9a); 100,9 (C-5); 92,9 (C-4); 71,8 (C-3'), 43,4 (C-2'); 29,0 (C-4'); 29,0 (C-5'); 26,6 (C-1"); 26,0 (C-4"); 18,4 (C-5"); 18,3 (C-1').
Công thức phân tử của chất 6 là C23H26O7 được xác định từ phổ khối ion dương ESI-MS (m/z 415.4) [M+H]+ (phụ lục 6.1) kết hợp với các dữ liệu từ phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) phân tích ở trên.
Hình 3.18. Cấu trúc của hợp chất 6 (Bannaxanthones A, GM9)
Trên cơ sở phân tích dữ liệu phổ khối ESI-MS, phổ NMR và kết hợp với tài liệu tham khảo hợp chất 6 (GM9) được xác định là Bannaxanthones A với công thức phân tử là C23H26O7 [43], công thức cấu tạo mơ tả trên hình 3.18.
84
- Hợp chất 7 (GM10): Hợp chất 7 (GM10) được phân lập từ cặn chiết ethyl
acetate là chất rắn dạng bột, màu vàng.
. Công thức phân tử của chất 10 là C24H26O8 được xác định từ pic ion giả phân tử trên phổ khối ion âm HR-ESI-MS (m/z 444,1773) [M+H]+
, (m/z 442,1619) [M- H]- (Phụ lục 10.1) kết hợp với phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR). Phổ 1H-NMR có sự hiện diện của hai tín hiệu proton singlet của vịng thơm tại δH 6,65 (1H, s, H- 5); 6,24 (1H, s, H-4). Phổ 1H; 13C-NMR và DEPT cũng xác nhận sự có mặt của một nhóm methoxy, 2 nhóm oxymethine, hai nhóm methyl lần lượt tại δH 3,76 (3H, s, OCH3/δC 61,1 (OCH3); một nhóm prenyl tại δH 4,09 (2H, m, H-15)/δC 27,0 (C-15); δH 5,31 (1H, m, H-16)/δC 125,9 (C-16); δC 131,1 (C-17); δH 1,83 (3H, s, H-18)/δC 18,3 (C-18) δH 1,69 (3H, s, H-19)/δC 25,9 (C-19); hai nhóm oxymethine tại δH 4,78 (1H, d, J = 6,0 Hz, H-10)/δC 69,4 (C-10); δH 3,70 (1H, d, J = 6,0 Hz, H-11)/δC 75,8 (C-11) và hai nhóm methyl tại δH 1,57 (3H, s, H-13)/δC 26,2 (C-13); δH 1,31 (3H, s, H-14)/δC 19,8 (C-14). Trên phổ HMBC xuất hiện các tương tác giữa proton của nhóm methoxy tương tác với C-7 tại δH 3,76 (3H, s, OCH3)/δC 145,0 (C-7) điều này chứng minh nhóm methoxy liên kết với carbon tại vị trí C-7. Bên cạnh đó cịn có các tương tác của H-4 với C-2; C-4a; C-9a tại δH 6,24 (1H, s, H-4)/δC 109,3 (C-2); 159,8 (C-4a); 106,0 (C-9a) và H-5 tương tác với C-6; C-7; C-5a, C-8a tại δH 6,65 (1H, s, H-5)/δC 155,7 (C-6); 145,0 (C-7); 157,5 (C-5a); 114,4 (C-8a) các số liệu này gợi ý hợp chất GM10 có cấu trúc khung dạng xanthon. Ngoài ra vị trí của nhóm prenyl cũng được xác nhận liên kết với carbon tại vị trí C-8 bởi tương tác giữa H-15 với C-7; C-8 tại δH 4,09 (2H, m, H-15)/δC145,0 (C-7); 138,0 (C-8). Các tương tác của H-10 với C-1; C-2; C-11 tại δH 4,78 (1H, d, J = 6,0 Hz, H-10)/ δC 155,5 (C-1);
109,3 (C-2); 75,8 (C-11) và H-11 với C-10; C-12; C-13; C-14 tại δH 3,70 (1H, d, J = 6,0 Hz, H-11)/ δC80,7 (C-12); 69,4 (C-10); 26,2 (C-13); 19,8 (C-14), điều này minh chứng vị trí vịng pyron được tạo nên từ hai vị trí C-2 và C-3 của khung xanthon. Trên phổ NOESY xuất hiện tương tác giữa H-10 và H-14; giữa H-11 và H-13 tại δH 4,78 (1H, d, J = 6,0 Hz, H-10)/ δH 1,31 (3H, s, H-14) và δH 3,70 (1H, d, J = 6,0 Hz, H-11)/ δH 1,57 (3H, s, H-13) chứng tỏ hai cặp H-10 và H-14 có cùng cấu hình cịn cặp H-11 và H-13 có cấu hình ngược lại, tiếp tục so sánh độ chuyển dịch hóa học với các đồng phân đối quang như Garcinoxanthone E (H-10β và H-11α) và Garcinoxanthone D (H-10β và H-11β đã được phân lập theo tài liệu tham khảo [175], tuy nhiên độ chuyển dịch hóa học khơng phù hợp kết hợp với hằng số tách
J10-11 = 6,0 Hz chứng tỏ H-10 có cấu hình là β; H-14 có cùng cấu hình (β) cịn H-11
và H-13 có cùng cấu hình ngược lại (α). Ngồi ra, hợp chất 7 GM10 khơng thể có cấu hình H-10α và H-11α bởi hằng số tương tác của H-10 với H-11 chỉ là J10-11 = 6,0 Hz bởi tương tác giữa H-10α và H-11α thì hằng số tương tác J >10Hz. Trên cơ sở phân tích số liệu phổ ESI-MS và phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR có thể dự
85
đốn hợp chất GM10 là một chất mới về có cơng thức phân tử C24H26O8 và được đặt tên là Garcinoxanthone V. Cấu trúc phân tử của chất 10 được mơ tả trên Hình 3.19.
Hình 3.19. Cấu trúc của hợp chất 7 (Garcinoxanthone V, GM10)
- Hợp chất 8 GM5a (8-Deoxygartanin): Hợp chất 8 (GM5a) được phân lập
từ cặn chiết ethyl acetate là chất rắn dạng bột, màu vàng. Các dữ liệu phổ NMR của chất 8 (Phụ lục 8): 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ: 7,60 (1H, dd, J = 6,5; 1,0 Hz, H-8); 7,20 (1H, d, J = 6,0 Hz, H-6); 7,14 (1H, t, J = 6,5 Hz, H-7); 5,30 (1H, m, H-5”); 5,23 (1H, m, H-5’); 3,60 (2H, d, J = 6,0 Hz, H-1”); 3,37 (2H, d, J = 6,0 Hz, H-1’); 1,89 (3H, d, s, H-4”); 1,81 (3H, s, H-4’); 1,69 (3H, s, H-5”); 1,69 (3H, s, H-5’). 13C-NMR (125 MHz, MeOD) δ: 182,5 (C-9); 162,2 (C-3); 159,2 (C-1); 153,9 (C-4a); 147,7 (C-5); 146,9 (C-5a); 132,9 (C-3”); 132,7 (C-3'); 124,4 (C-7), 123,4 (C-2”); 123,3 (C-2’); 122,4 (C-8a); 120,9 (C-6); 116,2 (C-8); 111,7 (C-2); 108,0 (C- 4); 104,0 (C-9a), 26,0 (C-5”); 25,9 (C-5’); 22,6 (C-1”); 22,4 (C-1’); 18,1 (C-4”); 18,0 (C-4’).
. Công thức phân tử của chất 8 là C23H24O5 được xác định từ pic ion giả phân tử trên phổ khối ion dương ESI-MS (m/z 380,9) [M]+ (Phụ lục 8.1) kết hợp với phân tích dữ liệu phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR).
Phân tích dữ liệu phổ 1H-NMR, phổ 13C-NMR, DEPT của hợp chất 8 (GM5a) (Phụ lục 8) và so sánh với tài liệu tham khảo có thể xác định hợp chất 8 (GM5a) có cấu trúc là một dẫn xuất của prenylated xanthon với tên gọi là 8-Deoxygartanin [40], [104], cấu trúc phân tử được thể hiện trên Hình 3.20.
86
Hình 3.20. Cấu trúc hợp chất 8 (8-Deoxygartanin, GM5a)
Đây là chất có khả năng ức chế chọn lọc butyrylcholinesterase (BChE) [174], thể hiện hoạt tính chống co thắt với giá trị IC50 là 11,8 μM đối với dòng W2 của
Plasmodium falciparum [176]đồng thời hợp chất này cũng có khả năng ức chế sự
hoạt hóa NF-κB (p65) với giá trị IC50 là 11,3 μM [177].
- Hợp chất 9 GM5b: Hợp chất 9 (GM5b) được phân lập từ cặn chiết ethyl
acetate là chất rắn dạng bột, màu vàng. Các dữ liệu phổ NMR của chất 9 (Phụ lục 9): 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ: 7,18 (1H, d, J = 7,0 Hz, H-6); 6,56 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-5); 5,29 (1H, t, J = 6,0 Hz, H-2"); 5,22 (1H, t, J = 5,5 Hz, H-2'); 3,60 (2H, d, J = 6,0 Hz, H-1"); 3,39 (2H, d, J = 6,0 Hz, H-1'); 1,88 (3H, s, H-4"); 1,82 (3H, s, H-4'); 1,69 (3H, s, H-5"); 1,69 (3H, s, H-5'). 13C-NMR (125 MHz, MeOD) δ: 186,2 (C-9); 162,9 (C-3), 158,9 (C-1); 154,2 (C-4a); 154,0 (C-5a); 145,7 (C-8); 138,6 (C-7); 133,1 (C-3"); 132,8 (C-3'); 124,3 (C-6); 123,2 (C-2"); 123,1 (C-2'); 112,2 (C-2); 109,8 (C-5); 108,7 (C-8a); 108,4 (C- 4); 102,9 (C-9a); 26,0 (C-4"); 25,9 (C-4'); 22,6 (C-1"); 22,4 (C-1'); 18,1 (C-5"); 17,9 (C-5').
Công thức phân tử C23H24O6 được xác định từ pic ion giả phân tử trên phổ khối ion âm HR-ESI-MS (m/z 397,1654) [M+H]+
, (m/z 395,1503) [M-H]- (Phụ lục 9.1), kết hợp với phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR).
Trên phổ 1H-NMR trong vùng trường yếu xuất hiện hai tín hiệu proton của vòng benzene tại δH 7,18 (1H, d, J = 7,0 Hz, H-6); 6,56 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-5) hai proton này tạo hiệu ứng mái chứng tỏ hai proton này cạnh nhau trên vịng benzene. Bên cạnh đó cịn xuất hiện tín hiệu cộng hưởng proton của hai nhóm methine (>CH- ) tại δH 5,29 (1H, t, J = 6,0 Hz, H-2"); 5,22 (1H, t, J = 5,5 Hz, H-2'); tín hiệu proton của hai nhóm methylene (>CH2) tại δH 3,60 (2H, d, J =6,0 Hz, H-1"); 3,39 (2H, d, J = 6,0 Hz, H-1') cùng tín hiệu của bốn nhóm methyl (CH3) tại δH 1,88 (3H, s, H-4"); 1,82 (3H, s, H-4'); 1,69 (3H, s, H-5"); 1,69 (3H, s, H-5'). Phổ 13C-NMR và DEPT có
87
tổng cộng 23 tín hiệu carbon trong đó 4 nhóm methyl (4xCH3) tại δC 26,0 (C-4"); 25,9 (C-4'); 18,1 (C-5"); 17,9 (C-5'), hai nhóm methylene (2xCH2) tại δC 22,6 (C- 1"); 22,4 (C-1'); bốn nhóm methine (4xCH) tại 123,2 (C-2"); 123,1 (C-2'); 124,3 (C- 6); 109,8 (C-5) và 13 nguyên tử carbon bậc 4 trong đó có một carbon của nhóm ketone tại δC 186,2 (C-9) cùng 6 nguyên tử carbon liên kết trực tiếp với nguyên tử oxy tại δC 162,9 (C-3), 158,9 (C-1); 154,2 (C-4a); 154,0 (C-5a); 145,7 (C-8); 138,6 (C-7). Kết hợp việc phân tích số liệu phổ 1H, 13C-NMR và DEPT gợi ý cấu trúc hợp chất 9 có dạng tương đồng với hợp chất GM5a là cấu trúc khung của một xanthone cùng với sự có mặt của hai nhóm prenyl trong cơng thức phân tử của hợp chất 9 (GM5b). Vị trí của nhóm prenyl được xác định dựa vào việc phân tích số liệu phổ HSQC và HMBC. Trên phổ HMBC thấy H-1’ tương tác với C-1; C-3; C-2; C-3’; C- 2’ tại δH 3,39 (2H, d, J = 6,0 Hz, H-1')/ δC 162,9 (C-3), 158,9 (C-1); 112,2 (C-2); 132,8 (C-3'); 123,1 (C-2') điều này chứng minh vị trí kết nối của nhóm prenyl là tại C-2. Bên cạnh đó cũng tìm thấy tương tác của H-1” với C-3; C-4a; C-2”, C-3” và C- 4 tại δH 3,60 (2H, d, J = 6,0 Hz, H-1")/ δC 162,9 (C-3), 154,2 (C-4a); 123,2 (C-2"); 133,1 (C-3"); 108,4 (C-4) chứng tỏ vị trí kết nối của nhóm prenyl thứ hai là tại vị trí C-4. Ngồi ra cịn xuất hiện tương tác của H-5 với C-5a; C-8a; C-7 tại δH 6,56 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-5)/δC 154,0 (C-5a); 108,7 (C-8a); 138,6 (C-7) và H-6 tương tác với C-5a; C-7 và C-8 tại δH 7,18 (1H, d, J = 7,0 Hz, H-6)/δC 154,0 (C-5a); 138,6 (C-7); 145,7 (C-8). Phổ COSY và NOESY cũng thấy sự tương tác giữa H-5 và H-6 tại δH 6,56 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-5)/ δH 7,18 (1H, d, J = 7,0 Hz, H-6). Như vậy, các số liệu này đã góp phần củng cố nhận định vị trí của hai nhóm methine trên vịng benzene cạnh nhau là chính xác. Trên cơ sở phân tích phổ 1D, 2D-NMR và dữ liệu phổ khối HR-ESI-MS có thể nhận định hợp chất 9 (GM5b) là một dẫn xuất prenylate xanthon mới và đặt tên là Deoxygartanin A. Cấu trúc phân tử của chất 9 được mơ
tả trên hình 3.21.
88
Như vậy bằng kỹ thuật chiết phân đoạn và sắc ký cột, sắc ký bản mỏng với các hệ dung môi/hệ dung môi khác nhau chúng tôi đã phân lập được 9 hoạt chất từ cặn chiết phân đoạn ethyl acetate của vỏ quả măng cụt, trong đó có 7 chất đã biết là α-