CHƯƠNG 1 : TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU
1.4. Các khuyến cáo của TCYTTG cho sản xuất và kiểm định chủng sản xuất
1.4.1. Yêu cầu chung trong sản xuất vắc xin VNNB bất hoạt
Quy trình sản xuất phải đạt GMP cho sản xuất các sản phẩm về thuốc và GMP cho các chế phẩm sinh học.
Nhà xưởng: Vi rút VNNB thuộc nhóm nguy cơ cấp độ 2 do đó nhà xưởng trong sản xuất vắc xin này phải đạt được an toàn sinh học cấp độ 2. Người tham gia vào quá trình sản xuất và kiểm định vắc xin này phải được chủng ngừa vắc xin
VNNB và đảm bảo có tỷ lệ kháng thể ≥ 1:10.
Nguồn nguyên liệu để sản xuất vắc xin (chuột hay tế bào) phải được cấp phép và kiểm soát bởi cơ quan kiểm định quốc gia.
1.4.2. Yêu cầu đối với nguồn nguyên liệu đầu vào:
Đối với chuột hay tế bào sử dụng để sản xuất chủng:
Chuột: Chuột sử dụng để nhân chủng vi rút VNNB sản xuất vắc xin phải từ
các đàn/dòng chuột khỏe mạnh, đạt: 5 tuần tuổi và khơng có bệnh lý (chuột sạch, được kiểm sốt chặt chẽ) và được cấp phép (kiểm soát) bởi cơ quan kiểm định quốc gia có thẩm quyền. Chuột sạch tức là phải được kiểm tra để đảm bảo khơng có các tác nhân gây bệnh cho chuột như nấm, vi khuẩn; ký sinh trùng; các loại vi rút gây bệnh cho chuột; các bệnh lý khác của chuột. Ngồi ra phải kiểm sốt môi trường tiếp xúc, môi trường sống của chuột để đảm bảo về vệ sinh và an toàn. Huyết thanh của chuột cũng phải chứng minh khơng có kháng thể chống lại các loại vi rút gây bệnh cho chuột…
Việc kiểm tra chất lượng chuột phục vụ sản xuất: được tiến hành trên một nhóm chuột nhất định, đảm bảo tính đại diện. Chuột phải được theo dõi, quan sát hàng ngày về sức khỏe nhưng không cần thiết phải kiểm tra tất cả các test nói trên, nên theo định kỳ, tần suất, số lượng sử dụng và các dấu hiệu bệnh lý…
Khi có bất kỳ 1 chuột nào bị ốm, chết phải được nghiên cứu tìm nguyên nhân cẩn thận. Nếu xảy ra phải dừng sản xuất và báo cáo đầy đủ cho cơ quan quốc gia có thẩm quyền. Q trình sản xuất chỉ bắt đầu lại khi đã tìm ra được nguyên nhân, cách giải quyết cũng như có các bằng chứng rõ ràng để khắc phục và kiểm soát các nguy cơ… và đợi phê chuẩn, cấp phép bởi cơ quan quốc gia có thẩm quyền.
Khi vắc xin được sản xuất trên não chuột yêu cầu phương pháp, quy trình gây nhiễm và gặt vi rút phải được đăng ký và phê chuẩn bởi cơ quan quốc gia có thẩm quyền.
Tế bào thận chuột Hamster tiên phát (PHK)
Tế bào thận tiên phát được sử dụng để sản xuất vắc xin, loại động vật cũng như loại mô tế bào tiên phát phải được phê chuẩn bởi cơ quan quốc gia có thẩm
quyền.
Chuột Hamster:Chuột sử dụng để lấy mô tế bào thận nhân chủng vi rút VNNB sản xuất vắc xin phải từ các đàn/dòng chuột khỏe mạnh, đạt: 10-14 ngày tuổi và khơng có bệnh lý (chuột sạch, được kiểm soát chặt chẽ) và được cấp phép bởi cơ quan kiểm định quốc gia có thẩm quyền.
Đặc biệt tại vùng, bộ phận lấy tế bào phải được kiểm tra cẩn thận các dấu hiệu bệnh lý; quy trình sản xuất tế bào cũng phải đảm bảo các tiêu chuẩn về an toàn, chất lượng, GMP đủ tiêu chuẩn cho sản xuất và được phê chuẩn bởi cơ quan quốc gia có thẩm quyền.
Tế bào PHK:Tế bào từ mô thận chuột Hamster khi sử dụng phải được kiểm tra để đảm bảo các tiêu chuẩn về vô trùng, các tác nhân vi rút ngoại lai, độ sống của tế bào (%), Mycoplasma… và được phê chuẩn bởi cơ quan quốc gia có thẩm quyền.
Tế bào thường trực
Nếu dòng tế bào thường trực được sử dụng để sản xuất vắc xin VNNB thì ngân hàng tế bào gốc (MCB) và ngân hàng tế bào sản xuất (WCB) phải được kiểm soát và phải đáp ứng các tiêu chuẩn có nguồn gốc từ động vật sử dụng cho sản xuất các chế phẩm sinh học dùng cho người.
MCB và WCB phải nằm trong đời cấy chuyển tối đa cho phép, đồng thời phải kiểm tra: Mycoplasma, vô trùng, tác nhân ngoại lai, khả năng sinh khối u trên động vật, độ sống, độ ổn định về di truyền (đặc tính sinh hóa, miễn dịch, di truyền…), phải được phê chuẩn, cấp phép bởi cơ quan kiểm định quốc gia có thẩm quyền.
Mơi trường sử dụng trong sản xuất vắc xin VNNB
Các loại môi trường nuôi cấy sử dụng (MEM/TCM199/…): Phải là các loại mơi trường chun dụng, có chứng nhận chất lượng đầy đủ từ nhà sản xuất (nếu là các loại môi trường thương mại), cịn các mơi trường do nhà sản xuất tự nghiên cứu sản xuất thì phải đảm bảo đầy đủ các tiêu chuẩn quy định cho các hóa chất cho sản xuất các chế phẩm sinh học sử dụng cho người.
Huyết thanh, trypsin nếu được sử dụng trong nuôi cấy tế bào phải được kiểm tra để đảm bảo về vô trùng, Mycoplasma và tác nhân/vi rút ngoại lai trước khi đưa vào sử dụng.
Huyết thanh người không nên sử dụng nhưng Albumin huyết thanh người có thể được sử dụng nhưng phải đáp ứng đầy đủ các tiêu chuẩn cho các sản phẩm từ máu dùng cho người…
Kháng sinh: Không nên sử dụng Penicillin và các beta-lactams khác vìchúng rất nhậy cảm với vi rút và lượng tồn dư có thể xảy ra phản vệ cho người sử dụng vắc xin. Các kháng sinh khác có thể sử dụng trong quá trình sản xuất nhưng phải kiểm soát được sự ảnh hưởng, hàm lượng tồn dư trong giới hạn an toàn của sản phẩm cuối cùng.
Các cơ chất khác cũng có thể được sử dụng nhưng hàm lượng phải được kiểm sốt trong giới hạn an tồn trong sản phẩm cuối cùng. Ví dụ các chỉ thị pH khơng độc (Phenol đỏ thì hàm lượng ≤ 0,002%).
Thành phần, hàm lượng các chất bổ sung vào môi trường nuôi cấy nhân vi rút đều phải được thẩm định hoặc dựa trên các nghiên cứu đã được thẩm định.
Chủng vi rút
Chủng vi rút sử dụng để sản xuất vắc xin VNNB bất hoạt phải là những chủng đảm bảo các tiêu chuẩn về thuần khiết, an toàn và hiệu quả trên lâm sàng khi đã bất hoạt; các tiêu chuẩn cho chủng sản xuất vắc xin cho người phải được phê chuẩn bởi cơ quan kiểm định quốc gia có thẩm quyền.
Hệ thống chủng vi rút gồm: Chủng gốc (Master seed lots) và chủng sản xuất (Working seed lots). Chủng phải có hồ sơ, lý lịch đầy đủ:
Tên chủng; Nguồn gốc; Số lượng (ống); Hiệu giá;
Ngày sản xuất (thiết lập); ngày có hiệu lực. Lơ/loạt;
(*): Chủng đơng khơ có thể bảo quản ở ≤ -20 C; chủng đơng băng thì bảo quản ở ≤ -60oC.
Chủng gốc và chủng sản xuất phải được kiểm tra từng tiêu chuẩn chất lượng quy định, phải đạt các tiêu chuẩn cơ sở và được phê chuẩn bởi cơ quan kiểm định quốc gia có thẩm quyền. Các tiêu chuẩn chất lượng cần được kiểm soát đối với chủng gốc và chủng sản xuất:
Nhận dạng: Để đảm bảo chủng vi rút trước sản xuất đúng là chủng (kháng nguyên) VNNB đăng ký để sản xuất vắc xin. Nhận dạng chủng thường được kiểm tra bằng phương pháp PCR hoặc ELISA hoặc một phương pháp hóa miễn dịch phù hợp được phê chuẩn.
Kiểm tra nấm, vi khuẩn, Mycoplasmab: thường được kiểm tra bằng phương pháp nuôi cấy trực tiếp và/hoặc PCR. Chủng phải đạt yêu cầu không nhiễm nấm, vi khuẩn, Mycoplasma.
Tác nhân ngoại lai: Kiểm tra trên động vật và tế bào theo theo đúng hướng dẫn của WHO và quy trình chung trong dược điển. Chủng sản xuất cần đạt yêu cầu loại trừ tác nhân ngoại lai.
Kiểm tra hiệu giá vi rút:
Hiệu giá của vi rút thường được kiểm tra bằng phương pháp gây nhiễm trên tế bào hoặc gây nhiễm trên não chuột. Tùy theo công nghệ sản xuất và loại chủng vi rút VNNB mà mỗi nhà sản xuất cần đưa ra hiệu giá phù hợp cho lơ chủng của mình để đảm bảo tính ổn định trong sản xuất và năng suất sản xuất của vắc xin sau này.
1.5. Tóm tắt quy trình thiết lập ngân hàng chủng (Beijing-1) để sản xuất vắcxin viêm não Nhật Bản bất hoạt trên tế bào Vero tại Việt Nam