Phƣơng pháp MTT đánh giá độc tính tế bào ở cấp độ “in vitro”. Phƣơng pháp này dựa trên phản ứng của enzyme của tế bào sống với MTT, màu vàng nhạt của MTT chuyển sang màu xanh đặc trƣng của phức MTT và enzyme. Độc tính của mẫu đƣợc xác định dựa trên tiêu chuẩn (TCVN 7391-5:2005, ISO 10993-5:1999, Đánh giá sinh học trang thiết bị y tế - Phần 5: Phép thử độc tính tế bào in vitro) [62].
Dung dịch chiết của mẫu trong DMEM đƣợc sử dụng để đánh giá độc tính tế bào của mẫu. Để lấy dịch chiết, các mẫu trƣớc tiên đƣợc xử lý bằng dung dịch ethanol 70% để khử trùng và sau đó rửa sạch với PBS để loại bỏ ethanol. Bƣớc tiếp theo, mẫu đƣợc ngâm trong môi trƣờng nuôi cấy tế bào DMEM và đƣợc đặt bên trong tử ấm (incubator) điều kiện 37oC, tốc độ lắc 120 vòng/phút trong thời gian ba ngày. Sau khi ủ, dịch chiết của mẫu đƣợc lọc qua màng lọc khuẩn (kích thƣớc lỗ 22µm) và pha lỗng với các nồng độ khác nhau 100%, 75%, 50%, 25%.
Các dịch chiết đã pha loãng trên đƣợc cho vào đĩa cấy 96 giếng chứa tế bào MG-63(1×104 tế bào/giếng) đã đƣợc ủ 24 giờ, và đĩa cấy 96 giếng này đƣợc giữ trong tủ ấm 3 ngày. Sau đó 20 µl dung dịch MTT (5 mg/ml) đƣợc cho vào các giếng nuôi và đĩa cấy 96 giếng đƣợc giữ trong tủ ấm 4 giờ. Cuối cùng, loại bỏ dung dich trong đĩa cấy, cho vào mỗi giếng 200 µl DMSO. Độ hấp thụ của dung dịch đƣợc đo tại bƣớc sóng 595 nm bằng bộ đọc ELISA (EL, 312, Biokinetics reader, Bio-Tek instruments). Các mẫu đƣợc thí nghiệm lặp lại 4 lần.