PHẦN 2 : MỤC TIÊU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.5. Phƣơng pháp ngh in cứu
2.5.7. Phương pháp xác định đường tổng
Nguyên tắc: sử dụng HCl để khử hết đƣờng trong ba kích thành đƣờng
khử, sau đó dựa vào phản ứng màu giữa đƣờng khử với thuốc thử acid Dinitrosalicylic (DNS). Cƣờng độ màu của hỗn hợp phản ứng tỷ lệ thuận với nồng độ đƣờng khử. Dựa theo đồ thị đƣờng chuẩn của glucose tinh khiết với thuốc thử DNS sẽ tính đƣợc đƣờng khử của mẫu nghiên cứu.
Cách tiến hành:
* Dựng đƣờng chuẩn glucose với thuốc thử DNS Dung dịch glucose chuẩn 10 mg/ml.
Bảng 2.7. Xây dựn đƣờng chuẩn glucose theo phƣơn pháp DNS
Ống
ĐC ống 1 ống 2 ống 3 ống 4 ống 5
VGlusose (ml) 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1
VNƣớc cất (ml) 10 9,8 9,6 9,4 9,2 9
VMẫu pha loãng
(ml) 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1
VDNS (ml) 3 3 3 3 3 3
OD54Onm
- Từ mỗi ống nghiệm có đánh số lấy ra 1 ml dung dịch, bổ sung thêm 3ml DNS. - Đun sơi trong 5 phút (có đậy nắp).
- Làm lạnh tới nhiệt độ phòng. - Đo OD540nm.
- Dựng đƣờng chuẩn glucose với thuốc thử DNS bằng phần mềm Excel. * Xác định hàm lƣợng đƣờng tổng số.
- Cân 5 gam ba kích đã sấy ở các ngƣỡng nhiệt 40oC - 50⁰C – 80oC -
90oC, bổ sung 45ml nƣớc cất và 5ml dung dịch HCl
- Đun cách thủy ở nhiệt độ 70-75o
C trong 3 giờ - Làm nguội
- Trung hòa hết acid bằng NaOH 50%
- Lọc qua giấy lọc Whatman No 1. Xác định hàm lƣợng đƣờng khử bằng phƣơng pháp dùng thuốc thử DNS (Miller, 1959).
- Đo OD540nm. Từ phƣơng trình tuyến tính giữa nồng độ đƣờng khử (mg/ml)