CHƯƠNG 2 : THỰC NGHIỆM
2.2. Thực nghiệm
2.2.2.1. Biến tính bằng hydrazine (tổng hợp PNS-GPTMS-Hydrazine là chất mangthuốc 1).
PNS-GPTMS hịa tan hồn trong nước khử ion sau đó nhỏ từ từ hỗn hợp trên vào hydrazine và phản ứng 12 giờ trong điều kiện khuấy từ ở nhiệt độ phòng.
Sản phẩm được đưa vào màng (MW 12kD-14kDa) và thẩm tách trong nước cất khoảng 3 ngày, sau đó đơng khơ thu sản phẩm.
Hình 2.6. Quy trình tổng hợp PNS-GPTMS-Hydrazine.
2.2.2.2. Biến tính PNS bằng Chitosan-mPEG (tổng hợp PNS-GPTMS-CS-mPEG là chất mang thuốc 2) mang thuốc 2)
Tổng hợp Chitosan-mPEG
- Cân 0,25g mPEG (5000Da) cho vào bình cầu 3 cổ và sau đó gia nhiệt lên 65-70oC cho mPEG chảy ra. Trong q trình gia nhiệt cần hút chân khơng để tạo môi trường chân không cho phản ứng.
- Sau khi mPEG chảy ra hồn tồn thì cân 16,00mg NPC (201.56Da) cho vào. Khi cân NPC thì lưu ý vì NPC khá nhạy với nước nên thao tác cần nhanh để tránh trường hợp NPC bị thủy phân. Để hệ phản ứng ổn định ở nhiệt độ từ 65-70˚C, trong mơi trường chân khơng trong vịng 6 giờ, tốc độ khuấy 300 vòng/phút
- Sau 6 giờ phản ứng ở nhiệt độ 65-70oC, hạ nhiệt độ hệ phản ứng xuống 40˚C. Cho tiếp vào 5 mL THF vào và tiếp tục khuấy ở tốc độ 300 (vòng/phút) trong khoảng hơn 1giờ. Rửa hỗn hợp phản ứng bằng diethyl ether 3 lần (mỗi lần 10 mL). Gạn bỏ phần nước phía trên và thu lấy phần chất rắn trắng kết tủa phía dưới. Tiếp theo đem cơ quay phần chất rắn trắng để loại bỏ hết dung mơi hữu cơ. Thu được mPEG đã hoạt hóa.
Hình 2.7. Hoạt hóa mPEG bằng NPC.
Tổng hợp CS-mPEG
- Nhỏ từng giọt dung dịch mPEG đã hoạt hóa vào dung dịch chitosan theo tỉ lệ khối lượng 1:5, khuấy 300 rpm trong vòng 24 giờ.
- Dung dịch CS-mPEG thu được sẽ được thẩm tách bằng màng (MW 12-14.000 Da) trong nước cất 4 ngày.
- Đông cơ dung dịch mPEG-chitosan thu được sản phẩm.
Hình 2.8. Qui trình tổng hợp Chitosan-mPEG. Tạo liên kết giữa PNS-GPTMS và CS-mPEG Tạo liên kết giữa PNS-GPTMS và CS-mPEG
Phản ứng của chitosan lên bề mặt của nano silica vừa biến tính hồn tồn có thể tạo ra nhờ khả năng hoạt động mạnh của vòng epoxy trong pH cao lẫn pH thấp. Tuy nhiên để chọn lựa pH như thế nào để CS-mPEG vẫn còn giữ được liên kết amide sau phản ứng là vấn đề đáng chú ý.
Trong luận án này, pH khoảng 3 đến 4 được lựa chọn, vì ở pH này liên kết amide này không bị thủy phân.
PNS-GPTMS được phân tán trong 15 mL H2O, đánh siêu âm trong 30 phút, điều chỉnh pH=3,5.
CS-mPEG được hòa tan trong 20 mL H2O, điều chỉnh pH 3,5 sau đó khuấy từ khoảng 30 phút.
Cho từ từ dung dịch CS-mPEG vào PNS-GPTMS, cho phản ứng ở nhiệt độ phòng trong 36 giờ. Hỗn hợp được li tâm và rửa lại 3 lần với nước cất. Đơng khơ, thu được sản phẩm.
.
Hình 2.9. Qui trình tổng hợp PNS-GPTMS-CS-mPEG.