Dựa vào khả năng sinh các loại độc tố chính (alpha, beta, epsilon, iota) người ta chia vi khuẩn C. perfringens thành 5 type độc tố khác nhau đó là A, B, C, D và E. Trong số đó theo các tác giả trong và ngoài nước thì type A là type thường gây ngộ độc thực phẩm cho con người.
Để xác định type độc tố, chúng tôi chọn 9 chủng trong số các chủng vi khuẩn phân lập được để tiến hành xác định các gen mã hoá sinh các loại độc tố chính của vi khuẩn bằng phản ứng Multiplex PCR. Từ kích thước sản phẩm thu được,xác định type độc đố. Dựa vào khả năng sản sinh type độc tố chính của vi khuẩn mà kết luận được chủng vi khuẩn mà chúng tôi phân lập được thuộc type vi khuẩnnào. Kết quả đinh type độc tố được trình bàyởhình 3.10
Hình 3.10 Kết quả xác định gen mã hoáđộc tố vi khuẩnC. perfringens
Theo tài liệu, thì mỗi type độc tố có khả năng sản sinh các loại độc tố khác nhau: type A chỉ sản sinh độc tố chính alpha; type B sản sinh 3 loại độc tố chính là alpha, beta và epsilon; type C sản sinh 2 loại độc tố chính là alpha và beta; type D sản sinh 2 loại độc tố chính là alpha và epsilon; type E sản sinh hai loại độc tố chính là alpha và iota. Ngoài ra type A và type C còn có khả năng sản sinh độc tố ruột enterotoxin. Từ hình 3.10 cho thấy, các đoạn sản phẩm đều nằm ở vạch kích thước 402 bp tương ứng với kích thước của đoạn gen mã hóa độc tố alpha mà nhà thiết kế mồi đưa ra. Kết quả định type được ghi lại ở bảng 3.4
1 2 3 4 5 6 7 8 9 P N M
500 bp 1000 bp 402 bp
Bảng 3.4 Kết quả định type cácchủng vi khuẩnC. perfringens
Các loại độc tố
TT Chủng
vi khuẩn Alpha Beta Epsilon Iota
Typ độc tố 1 CG1 + − − − A 2 CG2 + − − − A 3 CG3 + − − − A 4 CG4 + − − − A 5 CG5 + − − − A 6 CG6 + − − − A 7 CG7 + − − − A 8 CG8 + − − − A 9 CG9 + − − − A 10 ĐC + + − − − A 11 ĐC− − − − −
Kết quả bảng 3.4 cho thấy tất cả các chủng vi khuẩn chúng tôi phân lập được đều sản sinh độc tố chính alpha, không có chủng nào sinh độc tố beta, epsilon và iota. Từ kết quả đó đi đến kết luận, tất cả 9 chủng vi khuẩn mà chúng tôi kiểm tra đều thuộc vào type A. Kết quả nghiên cứu của chúng tôi phù hợp với các nghiên cứu trong và ngoài nước. Nhiều kết quả nghiên cứu cho thấy type A thường sản xuất enterotoxin (CPE) là nguyên nhân gây ngộ độc thực phẩm ở người, chẳng hạn như nghiên cứu của Eman, M. Nasr, Amal, A. Shehta and Hala, A. Amer, 2004 [19]; Phạm Hồng Sơn (2002) [11]. Khi vi khuẩn xâm nhập vào trong ruột, chúng tiếp tục phát triển cùng với sự hình thành nha bào các độc tố enterotoxin được giải phóng kết hợp với các tế bào
thượng bì niêm mạc ở ruột non gây tổn hại cấu trúc màng tế bào gây ra các triệu chứng như đau bụng và tiêu chảy.