2.3.4.1 Lấy mẫu bệnh phẩm
Từ chuột: mổ xác chuột lấy mảnh cắt gan, lách, phổi, hạch cho vào lọ thủy tinh gửi đến phòng thí nghiêm để làm các xét nghiệm vi sinh vật nhằm chuẩn đoán dương tính với bệnh dịch hạch. Các chai lọ chứa mẫu phải được bảo quản lạnh trong thời gian vận chuyển. Nếu ở xa phòng thí nghiệm, các phủ tạng của chuột cần đươc giữ trong môi trường vận chuyển Cary-Blair.
Từ bọ chét thu được trên chuột: lấy toàn thân bọ chét trong cối sứ với một ít nước muối NaCl 9‰ để nuôi cấy vi khuẩn.
2.3.4.2 Quan sát hình thái
Làm tiêu bản nhuộm Wayson: lấy mảnh cắt gan, lách, phổi chấm lên lam kính, cho 1 giọt thuốc nhuộm Wayson rồi để khô tự nhiên. Nhỏ vài giọt cồn 900 lên phiến đồ đã khô, để cồn bốc hơi nhẹ nhàng, phơi phô, soi dưới kính hiển vi vật kính 100 quan sát hình thái vi khuẩn Y.pestis: hình bầu dục nhỏ bắt màu xanh đậm ở hai đầu, rỗng ở giữa.
Công thức thuốc nhuộm Wayson (bảng phụ lục 1)
2.3.4.3 Nuôi cấy
Vi khuẩn dịch hạch mọc tốt ở 280C, là vi khuẩn hiếu khí tùy tiện, dễ mọc trên những môi trường thông thường: thạch peptone, canh thang BHI, môi trường thạch DOC…
Cấy phủ tạng chuột, dịch nghiền bọ chét vào môi trường phân lập bằng cách chấm trực tiếp mãnh cắt phủ tạng chuột lên trên bề mặt môi trường.
- Ở môi trường thạch Deoxycholate Natri, sau 48 giờ ở nhiệt độ 280C khuẩn lạc mọc rất nhỏ thường hay liên kết với nhau thành từng vệt mờ, màu hồng nhạt, bờ gồ ghề, giữa có màu đỏ sẫm.
- Trên môi canh thang BHI sau 48 giờ, vi khuẩn lắng xuống đáy ống, một số ít đóng thành một lớp váng mỏng trên mặt canh thang, khẽ chạm sẽ rơi xuống đáy ống làm cho môi trường trở nên trong, lắc nhẹ vẩn đục cuộn lên từ đáy ống, đây chính là tính chất đặc trưng của vi khuẩn dịch hạch trong môi trường lỏng.