Song song với công việc tạo củ bằng in vitro để nhân nhanh một số lượng lớn củ sơ cấp chúng tôi còn tiến hành áp dụng phương pháp nhân giống truyền thống để tạo củ lily bổ sung cho phương pháp in vitro. Quá trình được thực hiện như sau:
Thu hoạch củ con: Các củ con từ cây mẹ sau khi thu hoạch hoa xong chúng ta có thể thu hoạch củ mẹ và luôn cả củ con. Thông thường mỗi củ mẹ sau khi đã thu hái hoa cho từ 2-5 củ con có kích cỡ 0,5 - 1cm đường kính. Chúng ta thu các củ này cẩn thận, tránh làm dập nát, rửa sạch đất, hong ở phòng mát, sau đó đưa vào bảo quản trong kho lạnh ở nhiệt độ 2-50C, độẩm 85%.
Đóng gói: trải đều củ con trên hộp hoặc sọt nhựa, cứ mỗi lớp củ lại cách một lớp giá thể bằng mùn cưa đã xử lý, hoặc dớn đã vô trùng. Dớn hay mùn cưa đều được làm ẩm. Mỗi khay kích cỡ 40 x 30 x 80 có thể xếp được 4-5 lượt củ. Khay hoặc sọt có thể xếp trồng lên nhau rồi đưa vào phòng lạnh.
Thời gian bảo quản: 8 - 10 tuần trong phòng lạnh nhiệt độ 2-50C, độẩm 85%.
Phá ngủ: sau 8-10 tuần đưa khay củ ra khỏi phòng lạnh để ở nhiệt độ bình thường 15- 250C rồi đem trồng trên đất phù sa, đất cát pha , luôn giữđộẩm 80 - 85%.
Sau 2 - 3 vụ trồng tuỳ thuộc vào giống, làm lạnh, phá ngủ liên tiếp như vậy ta sẽ thu được củ thương phẩm. Tất nhiên sau mỗi vụ trồng ta lại phải xử lý lạnh, rồi phá ngủ thì mới đảm bảo tỉ lệ nảy mầm cao. Quá trình này được minh hoạ bằng các hình ảnh dưới đây.
Củ giống lily in vitro giai đoạn in vivo
Củ lily giống in vitro khi đưa ra khỏi bình nuôi cấy
Cây lily từ củ in vitro sau 6 tháng trồng ởvườn ươm
Cây và củ lily (thương phẩm) từ củ in vitro sau 2 năm trồng trong vườn ươm đã
đạt kích cỡ 2,5 - 4 cm đường kính
Ngoài củ bi từ củ mẹ sinh ra, trong quá trình trồng hoa, nách lá cũng xuất hiện những củ con có màu xanh hoặc tím tuỳ theo đặc tính của giống.
Khi củ đạt được kích cỡ như trên thì ta phải bảo quản ở trong kho lạnh ẩm trong vòng 8-10 tuần để trồng năm sau. Ở Việt Nam, điều lưu ý nhất là phải tính sao cho khi thu hoạch củ thương phẩm và sau khi cho củ ngủ trong kho lạnh, thời điểm phá ngủđem đi trồng phải đúng vào vụ Đông - Xuân ở Đồng bằng sông Hồng thì mới thu hoạch hoa vào dịp Tết Nguyên Đán hoặc ngày lễ 8/3. Nếu thời gian ngủ trong kho lạnh phải kéo dài hay rút ngắn sẽ ảnh hưởng đến tỉ lệ nảy mầm của củ, giảm chất lượng hoa hoặc tăng chi phí.
Ở nước ta, Sa Pa - Lào Cai và chân núi Langbiang - Lạc Dương - Đà Lạt là 2 nơi có đủ điều kiện nhiệt độ, độ ẩm để nuôi củ lily giống. Tuy nhiên ở Sa Pa thì cần chú ý đến thời điểm để đúng thời vụ trồng như nêu trên. Điều này khác với các nước Hà Lan, Nhật Bản, Hàn Quốc và Trung Quốc. Vì những nước này có mùa đông băng giá, thời vụ trồng lily của họ là mùa hè, để củ ngủ qua đông sang xuân, thu hoạch củ đem trồng là được. Còn ở Việt Nam phải để trong kho lạnh nên chi phí sẽ tốn kém hơn. Chúng tôi cũng đã có những khảo nghiệm so sánh giữa củ trồng từ nuôi cấy in vitro so với củ trồng từ tách củ con sau khi thu hoa thì thấy rằng các đặc tính nông sinh học, tốc độ sinh trưởng và khả năng nhiễm sâu bệnh ở các giống lily màu là tương đương nhau, không có sự khác biệt giữa 2 phương pháp nhân giống. Do đó, tận dụng các củ con sau khi trồng hoa thương phẩm chúng ta hoàn toàn có thể sử dụng cả 2 phương pháp nhân giống: in vitro
bằng công nghệ tế bào và in vitro bằng thu củ con (mini) từ củ mẹ hay nách lá (tuỳ theo giống) để có thể bổ sung vào quá trình nhân giống và giảm giá thành tạo củ giống thương phẩm trong quá trình sản xuất củ giống hoa lily. Vì ngay cảở chu kỳ 2 và 3, củ giống đã đẻ ra những củ bi con khá nhiều (Xem ảnh minh hoạ). Qua 30 tháng thực hiện bằng cả hai phương pháp nhân giống, chúng tôi đã tự sản xuất được 30.000 củ giống thương phẩm.
Tóm tắt quy trình tạo của sơ cấp (in vitro):
Củ giống (từ những giống được thị trường chấp nhận) sạch bệnhđãđược lựa chọn
Cấy chuyển vảy củ bi hoặc cắt củ bi để nhân nhanh củ bi trong môi trường
MS+1gKinetin/l+0,5gBAP/l+90gSacasorse
Trồng ra giá thểở vườn ươm để phát triển thành cây và cho củ lớn hơn
Tiếp tục nuôi củ bi trên môi trường MS+90g đường + 1g Kinetin + 1 g than hoạt tính + 1g BAP để thu củ thứ cấp có kích cỡ 0,5-1cm
Cấy vảy củđã khử trùng vào môi trường MS+ 90g đường Sacarose + 1 mg BAP + 1 mg Kinetin + 1 g
than hoạt tính nuôi trong tối, nhiệt độ phòng 25- 27)C để tạo củ bi.
Tách vảy củ, và khử trùng kép bằng HgCl2 0,2 % trong 7 phút