M Ở ĐẦU
2.2.4.Xác định điều kiện thích hợp chiết betacyanin từ vỏ thanh long
Vỏ quả thanh long tươi được cắt thành miếng nhỏ (2 - 3 mm), sau đó trộn đều, cân chính xác thành nhiều mẫu nhỏ (1÷ 2 g) rồi cho vào các ống nghiệm, bịt kín, bảo quản ở -200C đến khi chiết.
Betacyanin kém bền nhiệt nên chỉ nghiên cứu chiết bằng phương pháp ngâm chiết (ở nhiệt độ phòng, trong bóng tối) và phương pháp siêu âm.
Để xác định điều kiện chiết betacyanin bằng phương pháp chiết nhờ siêu âm và ngâm chiết, tiến hành các lô thí nghiệm sau:
2.2.4.1. Chọn dung môi chiết (Lô TN1):
Cố định tỷ lệ dung môi trên nguyên liệu là 5/1(w/v). Tiến hành chiết 1 lần bằng phương pháp siêu âm (5 min, ở 300C).
Dung môi chiết sử dụng là dung dịch etanol-nước, trong đó tỷ lệ etanol trong dung dịch (X1) thay đổi lần lượt từ 0 – 100% (v/v):
X1 = 0; 20; 40; 60; 80; 100 % (v/v)
Dịch chiết sau đó được pha loãng bằng etanol tuyệt đối rồi đo quang ở 538 nm để xác định hiệu suất chiết betacyanin theo công thức:
%H = (lượng betacyanin chiết được/ lượng betacyanin tổng số).100%
2.2.4.2. Chọn tỷ lệ dung môi/ nguyên liệu (Lô TN2):
Dùng dung môi chiết thích hợp đã chọn. Tiến hành chiết 1 lần bằng phương pháp siêu âm (5 min, ở 300C), trong đó tỷ lệ dung môi/nguyên liệu (X2) thay đổi như sau:
X2 = 5/1; 10/1; 15/1; 20/1; 25/1; 30/1 (v/w)
Betacyanin kém bền nhiệt nên chỉ nghiên cứu chiết bằng phương pháp ngâm chiết (ở nhiệt độ phòng, trong bóng tối) và phương pháp siêu âm. Do thời gian chiết và số lần chiết phụ thuộc vào phương pháp chiết nên cần nghiên cứu ảnh hưởng sự thay đổi hiệu suất chiết theo thời gian chiết và số lần chiết bằng hai phương pháp chiết đã chọn.
2.2.4.3. Chọn thời gian chiết (Lô TN3):
a) Phương pháp siêu âm:
Dùng dung môi và tỷ lệ dung môi/nguyên liệu thích hợp đã xác định. Tiến hành chiết 1 lần. Ở đây ta khảo sát thêm yếu tố nữa là nhiệt độ siêu âm.
Nhiệt độ và thời gian siêu âm thích hợp được xác định phương pháp quy hoạch thực nghiệm toàn phần 2 yếu tố theo mô hình cấu trúc có tâm 22+ 3 (gồm 4 thí nghiêm ở biên và 3 thí nghiệm ở tâm), trong đó:
Thời gian: X3 = 5 ÷ 35 (min); Nhiệt độ : T = 30 ÷ 80(0C)
Hàm mục tiêu (Y) là hiệu suất betacyanin chiết được (xác định bằng phương pháp đo quang).
Phương trình hồi quy thực nghiệm theo mô hình bậc hai được xác định bằng phầm mềm EXCEL:
Dùng chuẩn Student để loại bỏ các hệ số không có ý nghĩa và chuẩn Fisher để kiểm định tính tương thích của phương trình hồi quy với thực nghiệm (độ tin cậy 95%). Sau đó, xác định các thông số tối ưu bằng phần mềm Maple 7.0.
b) Phương pháp ngâm chiết:
Dùng dung môi và tỷ lệ dung môi/nguyên liệu thích hợp đã xác định. Tiến hành chiết 1 lần, trong đó thời gian ngâm chiết (X3) thay đổi như sau:
X3 = 2; 4; 6; 8; 10; 12 (h)
2.2.4.4. Chọn số lần chiết (Lô TN4):
Dùng dung môi, tỷ lệ dung môi/nguyên liệu, thời gian chiết (và nhiệt độ chiết thích hợp, nếu chiết bằng phương pháp siêu âm), trong đó thay đổi số lần chiết (X4) như sau:
X4 = 1; 2; 3; 4 (lần)
Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định điều kiện thích hợp để chiết betacyanin tử vỏ thanh long bằng phương pháp siêu âm và phương pháp ngâm chiết được trình bày ở hình 2.2.
Ngâm chiết(X1opt ; X2 opt ; X4 = 1)
Số lần chiết (X4 opt)
X3 = t/gian (h) 2 4 6 4 8 10 12 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Dịch chiết betacyanin
Tính hiệu suất thu hồi betacyanin
Tỷ lệ dung môi/nguyên liệu thích hợp (X2 opt)
X2 = Dmôi/N.Liệu (v/w) 5/1 10/1 15/1 20/1 25/1 30/1 Dịch chiết betacyanin
Tính hiệu suất thu hồi betacyanin
% Etanol thích hợp (X1opt)
Siêu âm (X1opt; X3 =5 min, X4 = 1 lần)
X1 = % etanol (v/v) 0 20 40 60 80 100
Lô TN 2
Lô TN3 Siêu âm (X1opt ; X2opt; X4=1)
X3= 5 ÷ 35 (min) T= 30 ÷ 80 (0C) Quy hoạch thực nghiệm
yếu tố toàn phần
Dịch chiết betacyanin
Tính hiệu suất thu hồi betacyanin
Thời gian (nhiệt độ) chiết thích hợp (X3 opt; Topt )
X4 = số lần chiết 1 2 3 4 4
Dịch chiết betacyanin
Tính hiệu suất thu hồi betacyanin
Lô TN4 Siêu âm (Topt) /Ngâm chiết (X1 opt; X2opt ; X3 opt )