Phương pháp tiêu cơ: Áp dụng phương pháp nghiên cứu metacercaria của Darwin (2005) [27]. Các bước tiến hành như sau:
- Đo chiều dài của cá chép bằng thước đo và cân khối lượng cá bằng điện tử. - Nghiền từng mẫu cá chép bằng cối sứ hoặc máy xay thịt.
- Chuyển mẫu nghiền vào cốc thủy tinh 100 ml có chứa 50 ml dung dịch tiêu cơ (8 ml HCl + 6g pepsin trong 1.000 ml nước cất), dung dịch tiêu cơ ngập 1/3 thể tích mẫu.
- Trộn đều mẫu và dung dịch tiêu cơ, đặt mẫu trong tử ấm 370C từ 2-3 giờ, thỉnh thoảng khuấy đều mẫu.
- Thêm 50 ml nước cất, lắc rồi để lắng, lọc sản phẩm tiêu cơ qua lưới lọc 1x1 mm và rửa qua nước muối sinh lý, để dung dịch lắng cho đến khi phần lắng cặn dễ quan sát.
- Loại bỏ phần nổi một cách nhẹ nhàng và giữ lại phần lắng cặn. - Lặp lại 7 đến 8 lần cho đến khi chất lắng trở nên trong.
- Chuyển chất lắng mỗi lần một lượng nhỏ vào trong đĩa petri chứa nước muối sinh lý. Xoay nhẹ đĩa petri bằng tay sao cho các chất lắng tập trung vào giữa đĩa. Dùng pipette loại bỏ phần nhẹ nổi trên bề mặt.
- Quan sát phần lắng cặn trên kính sôi nổi, kiểm tra metacercaria.
1A 1B 1C 2A 2B 2C Nghiệm thức 1: đối chứng Nghiệm thức 2: Echinostome Bố trí thí nghiệm
Số ốc bị nhiễm KST
Tổng số ốc kiểm tra X 100% TLCN =
- Tách riêng từng loại và đếm số lượng metacercaria của mỗi loài sán.
- Định loại metacercaria: Metacercaria được xác đinh theo khóa định loại của Darwin Murrel (2005) [27], Hà ký (2007) [7].
- Xử lý số liệu:
Tính tỷ lệ cảm nhiễm (TLCN) Cercaria trên ốc
Cường độ cảm nhiễm Cercaria (CĐCN) trên ốc
Đơn vị tính: Ký sinh trùng/ốc
Tính tỷ lệ cảm nhiễm (TLCN) Metacercaria trên cá
Cường độ cảm nhiễm (CĐCN) Metacercaria trên cá.
Đơn vị tính: Ký sinh trùng/ cá
Tổng số trùng trên các ốc kiểm tra Tổng số ốc kiểm tra có KST
CĐCN =
Số cá bị nhiễm KST
Tổng số cá kiểm tra X 100% TLCN =
Tổng số trùng trên cá kiểm tra Tổng số cá kiểm tra có KST CĐCN =
2. CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN