Baicalin baicalein chrysin ĐKĐBĐ của
độ lặp lại U(Sr)(Ua) 0,011023 0,008573 0,001266 ĐKĐBĐ của
độ tái lặp U(Sr)(Ub) 0,000101 0,004500 0,002841 ĐKĐBĐ của
độ thu hồi U(Sr)(Uc) 0,0477 0,0449 0,0150
ĐKĐBĐ tổng
Hàm lượng baicalin, baicalein và chrysin lần lượt là: x ± 0,049 %; x ± 0,046 % và x ± 0,0153 % (x là giá trị trung bình của phép đo, đơn vị là % hay g/100g dược liệu)
3.3. Áp dụng phƣơng pháp định lƣợng baicalein, baicalin và chrysin trên các mẫu Hoàng bá nam
Áp dụng phương pháp đã xây dựng, tiến hành đánh giá hàm lượng baicalein, baicalin, chrysin trong các mẫu dược liệu Hoàng bá nam thu hái tại các tỉnh: Lạng Sơn, Nghệ An, Sapa, Phú Thọ. Mỗi mẫu được tiến hành lặp lại 3 lần độc lập, kết quả được thể hiện như trong bảng 3.15
Bảng 3.15. Kết quả phân tích một số mẫu dược liệu Hoàng bá nam Mẫu
Hàm lượng (%)
baicalein baicalin chrysin Lạng Sơn 0,241 ± 0,005 1,670 ± 0,007 0,041± 0,008
Nghệ An 0,822 ± 0,003 0,250 ± 0,008 0,167 ± 0,006 Sapa 0,723 ± 0,009 2,251 ± 0,011 0,229 ± 0,004 Hịa Bình 0,950 ± 0,009 0,779 ± 0,011 0,317 ± 0,004 Phú Thọ 0,550 ± 0,009 0,854 ± 0,011 0,109± 0,010
Hình 3.7. Kết quả phân tích hàm lượng baicalin, baicalein, chrysin trong dược liệu Hoàng bá nam ở một số tỉnh của Việt Nam
Nhận xét: Hàm lượng hàm lượng baicalein dao động từ 0,241-0,950%, hàm lượng baicalin trong các mẫu Hoàng bá nam dao động từ 0,250-2,251%, hàm lượng chrysin dao động từ 0,041-0,31% (các mẫu được tính theo khối lượng dược liệu khơ tuyệt đối). Chứng tỏ hàm lượng các chất baicalin, baicalein và chrysin có sự khác nhau giữa các vùng trồng.
Phương pháp định lượng đồng thời các flavonoid: baicalein, baicalin, chrysin trong dược liệu Hồng bá nam bằng HPLC-UV có những ưu điểm sau:
- Định lượng đồng thời được 03 chất: baicalein, baicalin, chrysin - Phương pháp nhanh, đơn giản (t = 40 phút)
- HPLC-UV phổ biến, dễ sử dụng - Phương pháp có độ chính xác cao.
So với các kết quả đã công bố trước, hàm lượng baicalein, chrysin trong mẫu vỏ thân lớn hơn so với trong hạt và trong vỏ rễ.
Với số lượng mẫu cịn ít nên nghiên cứu này chỉ là bước đầu cho đánh giá chất lượng dược liệu Hoàng bá nam. Cần thu thập số lượng mẫu nhiều hơn ở các vùng trồng khác nhau.
KẾT LUẬN
Với các mục tiêu nghiên cứu đặt ra, chúng tôi đã thu được kết quả như sau:
1. Đã xây dựng được phương pháp HPLC–UV phân tích định lượng đồng thời 03 hoạt chất (baicalein, baicalin, chrysin). Các điều kiện bao gồm:
Cột tách: Ascentis C18 (15cm x 4,6mm, 5µm) Detector UV-VIS: bước sóng 280 nm
Thể tích tiêm mẫu: 10 µl Tốc độ dịng: 0,5 ml/phút
Lựa chọn được hệ dung mơi phù hợp nhất và cho hiệu quả tách tốt nhất 03 hợp chất. Chọn hệ dung môi ACN (kênh B) – 0,1 % acid formic trong nước (kênh A) với chương trình rửa giải: 0-20 phút (30-50% ACN); 20-40 phút (50% ACN).
2. Đã đánh giá được phương pháp phân tích về: độ lặp lại, tái lặp lại (các giá trị RSDr và RSDR đều nhỏ); đường chuẩn và khoảng tuyến tính ( các giá trị R2 đều lớn hơn 0,99). Độ đúng (hiệu suất thu hồi của baicalin : 97,2 - 99,6%; baicalein: 95,5 - 99,4% ;
chrysin: 95,4- 98,7%). Giới hạn phát hiện (LOD) của baicalin, baicalein, chrysin lần lượt là: 0,16; 0,1052 và 0,05 µg/ml. Giới hạn định lượng (LOQ ) của baicalin, baicalein, chrysin lần lượt là: 0,51; 0,35 và 0,18 µg/ml.
3. Kết quả phân tích hàm lượng baicalin trong các mẫu Hoàng bá nam từ 0,250-2,251%, hàm lượng baicalein từ 0,241 – 0,950%, hàm lượng chrysin dao động từ 0,041- 0,317% ( tính theo khối lượng dược liệu khơ tuyệt đối)
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt
1. Bộ Y tế (2017), Dƣợc điển Việt Nam V, NXB Y học, tr. 1285. 2. Bộ Y tế (2017) (2011), Dƣợc Liệu Học NXB Y học, tr.458
3. Võ Văn Chi (2012), Từ điển cây thuốc Việt Nam, Nxb Y học, tr. 337-378
4. Đào Văn Đôn (2011), "Nghiên cứu định lượng baicalein trong núc nác (Cortex Oroxyli) bằng phương pháp HPLC", tạp chí dƣợc học, (421), tr. 36-38.
5. Lê Thị Thu Hương, Nguyễn Tiến Công, Nguyễn vũ Mai Trang, Nguyễn Thị Minh Trang (2013), "Các hợp chất flavonoid từ lá cây núc nác Oroxylum indicum", Tạp chí Khoa học Trƣờng ĐH Sƣ phạm TPHCM, 43, tr. 92-96.
6. Tạ Thị Thảo (2010), Giáo trình mơn học thống kê trong hóa phân tích, Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội
7. Vũ Minh Thục, Popyadin G.V (1994), "Ảnh hưởng của núc nác đối với hoạt tính chức năng của các lymphocytes điều hoà miễn dịch ở các bệnh nhân dị ứng thể atopi", Nội khoa, (4), tr. 17-19.
8. Vũ Minh Thục, Popyading G.V (1995), "Ảnh hưởng "invitro" của chế phẩm núc nác đối với quần thể và tiểu quần thể trong máu của các bệnh nhân dị ứng của thể atopi", Nội khoa, (1), tr. 1-2.
9. Phương Thiện Thương (2013), "Thành phần hóa học của quả Núc nác", Tạp chí
dƣợc liệu, 18(4), tr. 213 - 220.
10. Viện Dược liệu (2006), Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam, Nxb Khoa học và Kỹ thuật, tr. 481.
Tiếng Anh
11. Adrian Oo et al (2019), "Baicalein and baicalin as Zika virus inhibitors",
12. Akhilesh K. Yadav et al (2012), "Simultaneous determination of flavonoids in Oroxylum indicum by RP-HPLC", Medicinal Chemistry Research, (22), pp.
2222–2227.
13. Anja Krüger, Markus Ganzera (2013), "Oroxylum indicum Seeds—Analysis of Flavonoids by Micellar Electrokinetic Chromatography", Chromatography, (1), pp. 1-8.
14. Anja Krügern et al (2012), "Oroxylum indicum seeds – Analysis of flavonoids by HPLC–MS", Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, (70), pp. 553–556.
15. AOAC International (2013), Guidelines for Dietary Supplements and Botanicals, AOAC Official, pp.
16. Asmaliyah et al ( 2016), "Quantitative Pre-Eliminary Phytochemical Screening of Aqueous Extracts of Leaves of Oroxylum indicum from Five Different Places in Sumatra Island, Indonesia ", International Journal of Pharmacognosy and Phytochemical Research 8(11), pp. 1863-1869
17. Bao Qun Li et al (2000), "Flavonoid Baicalin Inhibits HIV-1 Infection at the Level of Viral Entry", Biochemical and Biophysical Research Communications, 276(2), pp. 534-538.
18. Bin Yang et al (2011), "Antioxidant flavonoids from the seed of Oroxylum indicum", Fitoterapia, (82), pp. 841–848.
19. Biswanath Dinda, Bikas Chandra Mohanta, Shio Arima, Nariko Sato, Voshihiro Harigaya (2007), "Flavonoids from the Stem-bark of Oroxylum indicum", Natural Product Sciences, 13(3), pp. 190-194.
20. Cao Yang-yang et al (2012), " Determination of Baicalein-7-O-gentiobioside and Baicalin in Senmen Oroxyli from Guangxi Province by HPLC", Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae, (04), pp.1-3
21. Du Y et al (2016), "Simultaneous Determination of 11 Components in Yinzhihuang Preparations and Their Constituent Herbs by High- Performance Liquid Chromatography with Diode Array Detector", Journal of chromatographic science, 54(4), pp. 625-632.
22. Ganesan Pushpavalli, Panneerselvam Kalaiarasi, Chinnadurai Veeramani, Kodukkur Viswanathan Pugalendi (2010), "Effect of chrysin on hepatoprotective and antioxidant status in D-galactosamine-induced hepatitis in rats", European journal of pharmacology, 631(1-3), pp. 36-41.
23. Guoyong Xie, Xiaonan Wei, Binbin Lin, Rui Wen, Minjian Qin (2014), "Stilbenoids from the seeds of Oroxylum indicum", Biochemical Systematics and Ecology, 54, pp. 36-39.
24. Han SE, Park CH, Nam-Goong IS, Kim YI, Kim ES (2019), "Anticancer Effects of Baicalein in FRO Thyroid Cancer Cells Through the Up-regulation of ERK/p38 MAPK and Akt Pathway", International journal of experimental and clinical pathophysiology and drug research, 33 (2), pp. 375-382.
25. Haruhisa Kizu et al (1993), "Studies on the Napalese Crude Drugs. XVII. On the Naphthalene Related Compound from the Root Bark of the Oroxylum indicum Vent", Yakugaku Zasshi, 114(7), pp. 492 -513.
26. Hom Nath Luitel et al (2010), "Chemical constituents from Oroxylum indicum (L.) Kurz of Nepalese Origin", Nepal Journals Online, 8(8), pp. 66-68.
27. ICH (1996), Validation of Analytical Procedures: Text and methodology, ICH
Hamonised Tripartite Guideline, pp 1-3.
28. Jian Zhang, Wei Yang, You Bing Zhou, Yong Xiao Xiang, Lu Shan Wang, Wen Kai Hu, Wen Jun Wang (2018), "Baicalein inhibits osteosarcoma cell proliferation and invasion through the miR‑183/Ezrin pathway", Molecular medicine reports, 18(1), pp. 1104-1112.
29. Jian Zhang et al (2018), "Baicalein inhibits osteosarcoma cell proliferation and invasion through the miR183/Ezrin pathway", Molecular medicien reports, 18,
pp. 1104-1112.
30. Jianguo Wu et al (2014), "Solubility of Baicalein in Different Solvents from (287 to 323)K", Int J Thermophys (35), pp. 1465–1475.
31. Juan J. Martínez Medina et al (2017), "Antioxidant and anticancer effects and bioavailability studies of the flavonoid baicalin and its oxidovanadium(IV) complex", Journal of Inorganic Biochemistry, 166, pp 1-3.
32. K srilatha srinivas et al (2011), "High Performance Thin Layer Chromatographic determination of Chrysin in Oroxylum Indicum Vent. from Different Geographical Regions of India", Journal of Chemistry, 9(1), pp. 313- 317.
33. Kai He et al (2018), "Baicalein and Ly294002 induces liver cancer cells apoptosis via regulating phosphatidyl inositol 3-kinase/Akt signaling pathway",
Original article, 14(9), pp. 519-525.
34. Khawlhring Lalrinzuali et al (2015), "Investigation of the Anti-Inflammatory and Analgesic Activities of Ethanol Extract of Stem Bark of Sonapatha Oroxylum indicum In Vivo", International Journal of Inflammation, 2018, pp.8. 35. Krunal Doshi, R Ilanchezhian, Rabinarayan Acharya, B. R. Patel, B. Ravishankar (2012), "Anti-inflammatory activity of root bark and stem bark of Shyonaka", Journal of Ayurveda and Integrative Medicine, 3(4), pp. 194–197. 36. Li Juan Chen et al (2002), "Isolation and identification of four flavonoid
constituents from the seeds of Oroxylum indicum by high-speed counter-current chromatography", Journal of chromatography, 988(1), pp. 95-105.
37. Li Zhou et al (2014), "Solubility of Chrysin in Ethanol and Water Mixtures ",
38. Liang zhen Jiang et al (2018), "Baicalein inhibits proliferation and migration of bladder cancer cell line T24 by down-regulation of microRNA-106",
Biomedicine & Pharmacotherapy, 108, pp. 1583-1590.
39. Ling Wang, Yun Ling, Yan Chen, Cheng-Ling Li, Feng Feng, Qi-Dong You, Na Lu, Qing-Long Guo (2010), "Flavonoid baicalein suppresses adhesion, migration and invasion of MDA-MB-231 human breast cancer cells", Cancer Letters, 297(1), pp. 42-48.
40. Longfei Lin, Boran Ni, Hongmie Lin, Miao Zhang, Xuechun Li, Xingbin Yin, Changhai Qu Jian Ni (2015), "Traditional usages, botany, phytochemistry, pharmacology and toxicology of Polygonum multiflorum Thunb.: A review",
Journal of Ethnopharmacology, 159, pp. 158-183.
41. Lucian Del Fabbro et al (2019), "Chrysin protects against behavioral, cognitive and neurochemical alterations in a 6-hydroxydopamine model of Parkinson's disease", Neuroscience Letters, 706, pp. 158-163.
42. M. Kaisarul Islam et al (2010), "Phytochemical and Antimicrobial Analysis on the Extracte of Oroxylum Indicum Linn. Stem-Bark", Iranian Journal of
Pharmacology and Therapeutics, 9(1), pp. 25-28.
43. Maitreyi Zaveri, Amit Khandhar, Sunita Jain (2008), "Quantification of Baicalein, Chrysin, Biochanin-A and Ellagic Acid in Root Bark of Oroxylum indicum by RP-HPLC with UV Detection", Eurasian Journal of Analytical Chemistry, 3(2), pp. 246-257.
44. Maitreyi Zaveri, Bhavita Dhru (2010), " In-vitro antioxidant potential of stem and root bark of Oroxylum indicum", Journal of Global Pharma Technology,
2(8), pp. 975-8542.
45. Mst. Marium Begum, Azharul Islam, Rayhana Begum, Md. Sahab Uddin, Alam Sumiya (2019), "Ethnopharmacological Inspections of Organic Extract of
Oroxylum indicum in Rat Models: A Promising Natural Gift", Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 2019, pp. 1-13.
46. Pharmacopoeia of the people's republic of China (2015), Oroxyli Semen, China
Medical Science and Technology Press publishing company, pp. 318 - 319. 47. Qian Wang et al ((2004), "Zinc coupling potentiates anti-HIV-1 activity of
baicalin", Biochemical and Biophysical Research Communications, 324(2), pp.
605-610.
48. Qing-Fei Fan, Zu-Yan Hua, Zhi Na, Hua-Shu Tang, Guo-Ying Zuo, Qi-Shi Song (2015), "One new flavonoid from Oroxylum indicum", Natural Product Research, 29(19), pp. 1828 - 1832.
49. Ranjith Arimboor, K. Salini, Chami Arumughan (2013), "HPTLC Estimation of Oroxylin A in Oroxylum indicum Herbal Formulations", Journal of Planar Chromatography, 26(3), pp. 274-278.
50. Sudipta Das, Manabendra Duttachoudhury (2010), "Antimicrobial Activity of Stem Bark Extracts from the Plant Oroxylum indicum Vent.", Biological and Environmental Sciences, 5(1), pp. 95-99.
51. T. Hari Babu, K. Manjulatha, G. Suresh Kumar, A. Hymavathi, Ashok K. Tiwari, Muraleedhar Purohit, J. Madhusudana Rao, K. Suresh Babu (2010),
Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 20 pp. 117–120.
52. Vimal Kumar et al (2011), "Antioxidant and antimicrobial activities of stem bark extracts of Oroxylum indicum Vent. (Bignoniaceae) A medicinal plant of northeastern India", South Asian Journal of Experimental Biology, 1( 3).
53. Whasun Lim et al (2017), "Chrysin Attenuates Progression of Ovarian Cancer Cells by Regulating Signaling Cascades and Mitochondrial Dysfunction",
54. Xiao-Nan Wei, Bin-Bin Lin, Guo-Yong Xie, Jian-Wen Li, Min-Jian Qin (2013), "Chemical constitunents of seeds of Oroxylum indicum", Zhongguo Zhong Yao Za Zhi, 38(2), pp. 204-207.
55. Xiaotong Wei et al (2018), "Chrysin promotes SMMC-7721 cell apoptosis by regulating MAPKs signaling pathway", Journal Article (lang:chi), 38(10), pp.
1187-1194.
56. Xue-Song Liu et al (2009), "Solubility of Baicalin in Methanol, Ethanol, and Ethyl Acetate from (298.2 to 328.2) K", J. Chem. Eng. Data (54), pp. 2330– 2331.
57. Yan Qing Zhou, Qing Wen Zhang, Song Lin Li, Zhi Qi Yin, Xiao Qi Zhang, Wen Cai Ye (2012), "Quality Evaluation of Semen Oroxyli through Simultaneous Quantification of 13 Components by High Performance Liquid Chromatography", Current Pharmaceutical Analysis, 8(2), pp. 206 - 213e. 58. Yi Xu et al (2018), "Chrysin induces cell growth arrest, apoptosis, and ER stress
and inhibits the activation of STAT3 through the generation of ROS in bladder cancer cells", Oncology Letters, (15), pp. 9117-9125.
59. Zhao Zhengxiao et al (2019), "Baicalein Inhibits Orthotopic Human Non-Small Cell Lung Cancer Xenografts via Src/Id1 Pathway", Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 2019, pp. 1-7.
60. Zhou Wang, Lingman Ma, Mengqi Su, Yiran Zhou, Ke Mao, Chengqin Li, Guangyong Peng, Changlin Zhou, Baiyong Shen, Jie Dou (2018), "Baicalin induces cellular senescence in human colon cancer cells via upregulation of DEPP and the activation of Ras/Raf/MEK/ERK signaling", Cell death and disease, 217.
SKĐ mẫu dược liệu Hoàng bá nam tại Phú Thọ