CHƢƠNG 2 : ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2. Phƣơng pháp nghiên cứu
2.2.2. Pha tĩnh trong HPLC
Trong HPLC, pha tĩnh (station phase) chính là chất nhồi cột, làm nhiệm vụ tách hỗn hợp chất phân tích. Đó là những chất rắn, xốp và kích thƣớc hạt rất nhỏ, từ 3-7µm. Trong sắc ký trao đổi ion, pha tĩnh là chất trao đổi ion.
Có thể chia các loại chất trao đổi ion thành hai loại cơ bản theo nền của chất trao đổi ion:
- Các hạt polime xốp truyền thống (nhựa trao đổi ion – nhựa ionit)
- Các hạt Silic có phủ lớp trao đổi ion và các hạt silic xốp có gắn các nhóm trao đổi ion trên bề mặt
Các hạt nhựa ionit là polime xốp đƣợc dùng rộng rãi để tách các ion, aminoaxit, các chất béo, các chất cacbonhidrat. Ngƣời ta chế tạo các hạt nhồi có đƣờng kính khoảng 10µm trên cơ sở trùng hợp styrene và divinylbenzen (DVB) hoặc acrylic với DVB, sau đó gắn các nhóm chức khác nhau để thu đƣợc các ionit
có tính chất khác nhau. Để tách các cation, ngƣời ta gắn các nhóm –RSO3H vào
polime, còn để điều chế các anionit, ngƣời ta gắn các amin bậc khác nhau. Các chất nhồi này có ƣu điểm là khả năng hấp thụ tốt nhất trong các loại ionit. Tuy nhiên nhƣợc điểm lớn của ionit loại này là sự khuyếch tán chậm, hiệu lực tách của cột giảm.
Các hạt Silic có phủ lớp trao đổi ion đƣợc chế tạo tƣơng tự nhƣ chất nhồi làm pha tĩnh (nhƣ đã mô tả ở trên). Hạt Silic đƣợc làm nền cho các loại pha tĩnh khác nhau. Chất nhồi này có khả năng trao đổi tốt và chịu áp suất tốt (do hạt nhân Silic rất cứng), do vậy làm tăng hiệu lực tách của cột ionit. Tuy nhiên nhƣợc điểm của chất nhồi này là khoảng pH làm việc thu hẹp so với phƣơng pháp dùng ionit truyền thống.
Thông thƣờng, cationit giữ các cation chất phân tích, cationit chứa nhóm
hoạt động là các anion R-
, anion R- có thể là nhóm –SO3H, -COOH. Anionit giữ
các anion chất phân tích, anionit có nhóm hoạt động R+ thƣờng là nhóm amin. Do
phụ thuộc vào độ bazơ của nhóm amin (amin thẳng > ammoniac > amin thơm; amin bậc 4> amin bậc 3 > amin bậc 2 > amin bậc 1). Anionit phổ biến thƣờng chứa amin bậc 4.