Sau khi tham khảo tài liệu, chúng tôi sử dụng pha động là dung dịch
NaH2PO4 5mM. Điều chỉnh dung dịch NaH2PO4 5mM về pH=7,5; pH=8,0; pH=8,2;
pH=9,0; pH=9,5 bằng dung dịch NaOH 0,5M trên máy đo pH, sau đó tiến hành
khảo sát các điểm pH khác nhau, sử dụng pha động là 100 % dung dịch NaH2PO4
5mM với tốc độ dòng là 1,5 ml/phút, chuẩn hỗn hợp 5 chất có nồng độ 20 µg/ml, thể tích bơm mẫu là 20µl.
Bảng 3.1. Ảnh hƣởng của pH pha động tới thời gian lƣu của chất phân tích pH pH
Thời gian lƣu (phút)
Aspartam Axit sorbic Axit benzoic Acesufalm-K Saccarin
7,5 3,89 12,11 20,54 56,86 81,68 8,0 5,01 10,69 17,85 48,67 80,52 8,2 5,32 10,27 17,24 47,53 77,28 8,5 5,63 9,98 16,55 44,48 72,05 9,0 5,47 9,22 15,34 41,05 66,07 9,5 5,82 9,54 15,80 42,66 69,31
Qua kết quả khảo sát ảnh hƣởng của pH pha động ở bảng 3.1 và hình 3.3, chúng tôi nhận thấy:
- Trong khoảng pH từ 7,5 ÷ 8,5, khi tăng pH: thời gian lƣu của các chất axit
benzoic (pKa=4,19), axit sorbic (pKa=4,76), acesufam-K (pKa~2) và saccarin
(pKa~2) giảm. Ở khoảng pH này, chúng tồn tại ở dạng anion trong dung dịch và
đƣợc giữ lại trên cột nhờ vào lực tƣơng tác ion vì vậy thời gian lƣu của chúng giảm khi lực rửa giải của dung môi tăng với sự tăng của pH pha động. Riêng đối với aspartam, khi tăng pH: thời gian lƣu tăng do aspartam là 1 dipeptit của axit aspartic
và phenylalanilin với giá trị pKa1=2,96 và pKa2=7,37, do đó aspartam thể hiện tính
lƣỡng cực. Vì vậy, khi pH của pha động tăng trong khoảng 7,5 ÷ 8,5, thời gian lƣu của aspartam tăng.
Do pH làm việc của cột đang sử dụng là từ 2÷10 cho nên khi pH khảo sát là 9,0 và 9,5 (giá trị pH này gần với giá trị pH cực đại của cột) làm cho thời gian lƣu của các chất thay đổi và không tuân theo qui luật nhƣ trƣớc. Do đó, chúng tơi khơng khảo sát tại các pH>9 nữa.
Để các pic tách nhau rõ ràng, tiết kiệm thời gian phân tích và bảo vệ tuổi thọ của cột, chúng tôi chọn pH bằng 8,2 cho pha động và giữ cố định cho các khảo sát tiếp theo.
3.1.4. Khảo sát nồng độ dung dịch đệm của pha động
Sau khi chọn đƣợc pH của dung dịch đệm (pH=8,2), chúng tôi tiếp tục khảo sát nồng độ của dung dịch đệm natri dihydrophotphat. Nồng độ dung dịch đệm chọn để khảo sát là 1mM; 2,5mM; 5mM; 7,5mM; 10mM. Theo khảo sát ảnh hƣởng của pH ban đầu, tổng thời gian phân tích cho cả 5 chất với pha động là 100% dung dịch
NaH2PO4 5mM (pH=8,2) là 77,28 phút. Để giảm thời gian phân tích cả 5 chất trên,
sau khi tham khảo tài liệu, chúng tôi sử dụng pha động là NaH2PO4 và Acetonitril
(ACN) với tỷ lệ 90 % NaH2PO4:10% ACN với tốc độ dòng pha động là 1,5 ml/phút,