CHƢƠNG 2 : ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.1 Phƣơng pháp: thực hiện nghiên cứu mô tả, tiến cứu theo một qui trình
thống nhất bao gồm:
- Chẩn đoán xác định và xếp loại bệnh nhân HCRLST theo bảng phân loại WHO 2001.
- Lập hồ sơ bệnh án theo mẫu riêng để thu thập chi tiết các triệu chứng lâm sàng và xét nghiệm (mẫu bệnh án nghiên cứu đƣợc trình bày ở phần phụ lục).
- Phân tích các xét nghiệm huyết đồ, tủy đồ, sinh thiết tủy xƣơng. Những xét nghiệm này đƣợc tiến hành tại thời điểm bệnh nhân vào viện lần đầu tiên.
Mơ hình các bước tiến hành nghiên cứu
Các bệnh nhân đƣợc chẩn đoán HCRLST nguyên phát
Xếp loại theo WHO 2001
Nghiên cứu đặc điểm tế bào sinh máu qua huyết đồ, tủy đồ, sinh thiết tủy
25
2.2.2 Vật liệu nghiên cứu
- Máu ngoại vi của 31 bệnh nhân: lấy máu tĩnh mạch (0,5-1ml) chống đông bằng EDTA K3. Làm tiêu bản máu dàn, đọc các chỉ số tế bào máu ngoại vi trên máy đếm tế bào tự động XT 4000i của hãng Sysmex – Nhật Bản. Nhuộm giêm sa bằng máy Leica, quan sát hình thái tế bào máu, đánh giá rối loạn hình thái.
- Dịch hút tủy xƣơng: 1 ml dịch tủy lấy đầu tiên khi chọc hút tủy: 0,5ml dùng kéo 8 tiêu bản (2 tiêu bản nhuộm giêm sa, tiêu bản cịn lại hồng cầu sắt hoặc nhuộm hóa học tế bào khi cần thiết); 0,5ml còn lại chống đông bằng EDTA K3 dùng làm tủy đồ, để đếm tế bào tủy, làm hồng cầu lƣới tủy.
- Mô tủy xƣơng (qua sinh thiết tủy xƣơng) làm tiêu bản sinh thiết. Tiêu chuẩn mẫu sinh thiết: dài 1-1,5 cm.
- Sau đó kết quả đƣợc ghi lại vào ―Phiếu xét nghiệm Huyết – Tủy đồ‖ theo mẫu của phòng xét nghiệm khoa Huyết học – Truyền máu nhƣ sau:
Họ và tên ngƣời bệnh: ………………………… Tuổi: …………… Nam/Nữ Địa chỉ:…………………………………………………………………………... Giƣờng:……………………………………………………………………........... Tóm tắt q trình bệnh lý, triệu chứng thực thể (Gan, lách, hạch):……………... …………………………………………………………………………………… Chẩn đoán lâm sàng:…………………………………………………………….. Yêu cần xét nghiệm:……………………………………………………………... Làm xét nghiệm: … giờ… ngày… tháng… năm 20…
Test thuốc tê:…………………….. Kết quả:………… Bác sĩ đọc test:…………………………………………
BỆNH VIỆN BẠCH MAI
KHOA HUYẾT HỌC – TRUYỀN MÁU
PHIẾU XÉT NGHIỆM HUYẾT – TỦY ĐỒ
Ngày… tháng… năm 20…
BÁC SĨ ĐIỀU TRỊ
26
CHỈ SỐ KẾT QUẢ CHỈ SỐ KẾT QUẢ
Số lƣợng hồng cầu (T/l) Chỉ số trƣởng thành dòng BC hạt Huyết sắc tố (g/l) Chỉ số trƣởng thành dòng HC Hematocrit (l/l) Hồng cầu lƣới máu (%) MCV (fl) Hồng cầu lƣới tủy (%) MCH (pg) HÓA HỌC TẾ BÀO
MCHC (g/l) Peroxydase Hồng cầu có nhân (G/l) Sudan
Số lƣợng bạch cầu (G/l) Esterase không ức chế Số lƣợng tiểu cầu (G/l) Esterase ức chế bằng NaF Số lƣợng tế bào tủy xƣơng (G/l) PAS
Nhận xét: ...............................................................................................................
Kết luận:…………………………………………………………………………. Kiến nghị: ……………………………………………………………………….
……………………………………………………………………………………
2.2.3. Các chỉ số nghiên cứu
- Đặc điểm tế bào học máu ngoại vi bao gồm: số lƣợng, thành phần, đặc điểm rối loạn hình thái các loại tế bào máu (hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu), tỷ lệ % tế bào non ác tính.
- Đặc điểm tế bào học tủy xƣơng: số lƣợng tế bào tủy ở mỗi thể bệnh, đặc điểm rối loạn hình thái theo dịng.
2.2.4 Các kỹ thuật sử dụng trong nghiên cứu: (Đƣợc thực hiện tại phòng xét
nghiệm huyết học Khoa Huyết học – Truyền máu Bệnh viện Bạch Mai Hà nội).
2.2.4.1 Kỹ thuật lấy mẫu bệnh phẩm
Kỹ thuật lấy máu ngoại vi, chọc hút tủy xƣơng và sinh thiết tủy xƣơng đƣợc thực hiện theo một quy trình thống nhất của Viện HH-TM
2.2.4.2 Một số kỹ thuật xử lý bệnh phẩm
a) Kỹ thuật nhuộm giêm sa tiêu bản máu và tủy xƣơng dàn
Ngày… tháng… năm 20..
Bác sỹ chuyên khoa Họ tên: …………………………
27
b) Kỹ thuật nhuộm hồng cầu sắt
c) Kỹ thuật sử lý mảnh sinh thiết tủy xƣơng và nhuộm hematoxilin tiêu bản tổ chức học tủy xƣơng
d) Kỹ thuật nhuộm sợi liên võng – Kỹ thuật nhuộm sinh thiết tiêu bản tổ chức tủy xƣơng (thực hiện tại khoa giải phẫu bệnh viện Bạch Mai).
2.2.5 Một số tiêu chuẩn đánh giá đƣợc sử dụng trong nghiên cứu
2.2.5.1 Tiêu chuẩn đánh giá số lượng hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu ở máu ngoại vi
a. Số lƣợng hồng cầu [ 1], [6], [7], [9].
- Số lƣợng hồng cầu máu ngoại vi bình thƣờng: khi số lƣợng hồng cầu ≥ 4 T/l - Số lƣợng hồng cầu máu ngoại vi giảm: khi số lƣợng hồng cầu 2,5 -< 4 T/l - Số lƣợng hồng cầu máu ngoại vi giảm nặng: khi số lƣợng hồng cầu < 2,5 T/l - Bệnh nhân có thiếu máu: khi lƣợng huyết sắc tố <120 g/l
- Bệnh nhân có thiếu máu nặng: khi lƣợng huyết sắc tố <80 g/l - Bệnh nhân có thiếu máu rất nặng: khi lƣợng huyết sắc tố <60 g/l b. Số lƣợng bạch cầu [ 1], [6], [7], [9].
- Số lƣợng bạch cầu máu ngoại vi bình thƣờng: khi số lƣợng bạch cầu 4-10 G/l - Số lƣợng bạch cầu máu ngoại vi giảm: khi số lƣợng bạch cầu <4 G/l
- Số lƣợng bạch cầu máu ngoại vi tăng: khi số lƣợng bạch cầu >10 G/l c. Số lƣợng tiểu cầu [ 1], [6], [7], [9].
- Số lƣợng tiểu cầu máu ngoại vi bình thƣờng: khi số lƣợng tiểu cầu 150 – 450G/l - Số lƣợng tiểu cầu máu ngoại vi giảm: khi số lƣợng tiểu cầu <150 G/l
- Số lƣợng tiểu cầu máu ngoại vi giảm vừa hoặc nặng: <100 G/l - Số lƣợng tiểu cầu máu ngoại vi tăng: khi số lƣợng tiểu cầu > 450 G/l
28
2.2.5.2 Đánh giá các rối loạn hình thái dịng hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu ở máu ngoại vi và tủy xương
a) Tiêu bản máu ngoại vi:
Dựa trên quan sát các tiêu bản máu dàn nhuộm giêm sa.
- Xác định các rối loạn hình thái bạch cầu đoạn trung tính ở máu ngoại vi: dựa trên quan sát 100 tế bào bạch cầu kết hợp đối chiếu số lƣợng bạch cầu, đếm tỷ lệ hồng cầu non (nếu có).
- Xác định có rối loạn hình thái tiểu cầu máu ngoại vi trên tiêu bản nhộm giêm sa đối chiếu với số lƣợng tiểu cầu.
b) Tiêu bản tủy xƣơng:
- Xác định số lƣợng tế bào có nhân trong tủy.
- Phân loại tỷ lệ % các loại tế bào có nhân trong tủy dựa trên 100 tế bào.
- Xác định các rối loạn hình thái dịng hồng cầu, bạch cầu hạt trong tủy: dựa trên quan sát 100 nguyên hồng cầu và 100 bạch cầu dòng hạt trong tủy.
- Xác định các rối loạn hình thái dịng mẫu tiểu cầu trong tủy: dựa trên quan sát 20 mẫu tiểu cầu trên tiêu bản tủy xƣơng dàn và/hoặc trên tiêu bản STTX.
2.2.5.3 Tiêu chuẩn đánh giá số lượng tế bào tủy qua chọc hút tủy xương
- Số lƣợng tế bào tủy tăng: khi số lƣợng tế bào tủy >90G/l.
- Số lƣợng tế bào tủy bình thƣờng: khi số lƣợng tế bào tủy 27 – 90G/l. - Số lƣợng tế bào tủy giảm: khi số lƣợng tế bào tủy < 27 G/l.
2.2.5.4 Tiêu chuẩn phân loại
Theo tiêu chuẩn phân loại HCRLST theo WHO 2001 áp dụng theo bảng
2.2.6. Xử lý số liệu
29