Mẫu Nicotin cho vào máu (ng) Nicotin tìm thấy (ng) Độ thu hồi (%)
1 20 18,78 93,9
2 40 38,64 96,6
3 40 38,83 97,075
Điều kiện phân tích GC/MS: chế độ SIM, chọn ion 84.
2.6. Xây dựng đƣờng chuẩn
Đường chuẩn của cotinin được xây dựng dựa trên mối quan hệ giữa nồng độ chất với số đếm diện tích píc của chất đó, và đường chuẩn tn theo phương trình sau: y = ax + b
Trong đó: x - Nồng độ chất
y - Số đếm diện tích píc của chất
Dung dịch nicotin chuẩn để phân tích hàm lượng nicotin trong mẫu khí
Luận văn Thạc sĩ Bùi Thị Kiều Trang
chất chuẩn có nồng độ từ 5.10-3 - 120.10-3 mg/mL) để xây dựng đường chuẩn đối với mẫu khí. Dung mơi pha chuẩn là etylaxetat.
Dung dịch nicotin chuẩn để phân tích hàm lượng nicotin trong máu
Từ dung dịch nicotin gốc nồng độ 20 mg/mL pha thành dung dịch 2 mg/mL. Pha loãng dung dịch bằng etylaxetat để được dãy dung dịch chuẩn có nồng độ nicotin nằm trong khoảng từ 0,5 đến 3 μg/mL. Sử dụng dãy dung dịch này để xây dựng đường chuẩn xác định nicotin trong máu.
2.7. Định tính và định lƣợng nicotin
Để định tính nicotin trong các mẫu, người ta dựa vào thời gian lưu của chất xuất hiện trên sắc đồ so với thời gian lưu của nicotin xuất hiện trên sắc đồ phân tích chuẩn. Nếu thời gian lưu của chất trùng với thời gian lưu của nicotin trong sắc đồ mẫu chuẩn thì có thể kết luận mẫu có nicotin. Luận văn đã sử dụng phương pháp GC/ECD và GC/MS để định tính và định lượng nicotin trong mẫu khí và mẫu máu.
Việc định lượng nicotin trong mẫu được dựa vào thể tích mẫu cuối cùng, số đếm diện tích píc của mẫu và đường chuẩn, trên cơ sở đó tính được nồng độ nicotin trong mẫu phân tích.
Việc định lượng nồng độ nicotin trong các mẫu khí dựa vào cơng thức sau: X (mg/m3) =
Trong đó:
X: Nồng độ nicotin trong mẫu khơng khí (mg/m3
khơng khí) Cx: Nồng độ nicotin xác định tính theo đường chuẩn (x 10-3
mg/mL). V: Thể tích cuối của mẫu chiết dùng để phân tích trên GC/ECD (mL).
: Tốc độ dịng lấy mẫu 2 lít/phút = 120 lít/giờ = 120/1000 m3
Việc định lượng lượng nicotin trong các mẫu máu cũng tương tự như đối với mẫu khí, nhưng tính theo phương trình hồi quy thu được từ đường
Luận văn Thạc sĩ Bùi Thị Kiều Trang
CHƢƠNG 3.
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
3.1. Xây dựng đƣờng ngoại chuẩn của nicotin
3.1.1. Đƣờng ngoại chuẩn xác định nicotin trong mẫu khí
Nicotin trong các mẫu khí được xác định bằng phương pháp GC/ECD. Để khẳng định lại có nicotin trong mẫu thì sử dụng phương pháp GC/MS. Sắc đồ phân tích chất chuẩn nicotin được chỉ ra trong Hình 3.1; ở đây nicotin xuất hiện ở thời điểm 10,226 phút.
Đường chuẩn Hình 3.2 có hệ số tương quan khá cao, trên 99%. Điều đó cho thấy chất chuẩn sử dụng có độ tinh khiết cao và kĩ thuật bơm ổn định. Dựa vào phương trình đường chuẩn Hình 3.2 để tính tốn giá trị thực tế của nicotin trong mẫu khơng khí đã lấy được.
0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0 32.5 35.0 37.5 40.0 42.5 45.0 min 0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.50 1.75 2.00 2.25 2.50 2.75 3.00uV(x1,000,000) 3 .6 9 0 7 .2 7 0 1 0 .2 2 6
Luận văn Thạc sĩ Bùi Thị Kiều Trang
Chất chuẩn nicotin sử dụng để xây dựng đường ngoại chuẩn có nồng độ từ 5.10-3 - 120.10-3 mg/mL. Số đếm diện tích píc tương ứng với các nồng độ được chỉ ra trong Bảng 3.1 và Hình 3.2.