- Malaixia: Là nước mới phát triển nghề chế biến các sản phẩm hàu vì nhu cầu thị trường ngày càng tăng Số lượng bán lên tới 20 triệu đôla một năm Malaixia
Phụ lục 1: Một số phương pháp nghiên cứu
1.1 Xác định hoạt độ protease theo phương pháp Anson Nguyên lý:
Nguyên lý:
- Dùng protein (casein hoặc hemoglobin) làm cơ chất. Xác định hoạt độ phân giải protein của enzyme trên cơ sở định lượng sản phẩm được tạo thành trong phản ứng bằng phản ứng màu với thuốc thử Folin-Ciocalteau. Dựa vào đồ thị chuẩn định lượng tyrosine tương ứng với lượng sản phẩm thuỷ phân dưới tác dụng của enzyme. - Đơn vị hoạt động proteolitic (HP) là lượng enzyme mà trong một phút ở 300C có khả năng phân giải protein tạo thành các sản phẩm hoà tan trong acid tricloacetic cho phản ứng màu với thuốc thử Folin-Ciocalteau tương đương với 1mol tyrosine.
- Hoạt độ riêng của chế phẩm được biểu diễn bằng số đơn vị hoạt động proteolytic trên 1mg protein của chế phẩm (số PU/mg protein).
Hoá chất cần:
-Dung dịch tyrosine tiêu chuẩn (1mol/1ml): Cân chính xác 18.12 mg tyrosine tinh khiết, khô hoà tan trong 100 ml dung dịch HCl 0,2N.
Xây dựng đường chuẩn tyrosine: Lấy 6 ống nghiệm, cho vào 6 ống này dung dịch tyrosine chuẩn theo thứ tự 0; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1 ml. Sau đó thêm HCl 0,2N cho đủ 5ml, tiếp tục cho vào mỗi ống nghiệm 10ml NaOH 0,5N và 3ml thuốc thử Folin, lắc đều và để yên trong 10 phút, đo mật độ quang học ở bước sóng 660 nm. Nồng độ tyrosine trong mỗi ống sẽ tăng dần theo thứ tự 0; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1 mol tyrosine / ml.
Bảng : Bảng xây dựng đường chuẩn tyrosine.
Ống nghiệm 1 2 3 4 5 6 Dung dịch tyrosine chuẩn ml 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 Dung dịch HCl 0,2N (ml) 5,0 4,8 4,6 4,4 4,2 4,0 Dung dịch NaOH 0,5N (ml) 10 10 10 10 10 10
Thuốc thử Folin (ml) 3 3 3 3 3 3
Nồng độ tyrosine mol /ml 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1
Lắc và để yên 10 phút đem đo mật độ quang ở bước sóng 660 nm. Tính hiệu số mật độ quang học giữa các ống với ống 1. Dựng đồ thị biểu diễn sự tương quan
giữa OD với nồng độ protein của các ống. Từ đồ thị chuẩn và OD của ống thí nghiệm ta tính được nồng độ protein.
- Dung dịch casein 2%.
- Thuốc thử Folin – Ciocalteau được pha loãng bằng nước cất theo tỷ lệ 1/5 trước khi sử dụng.
- Dung dịch Na2CO3 0,4 M. - Máy so màu.
Tiến hành xác định: Chuẩn bị 2 ống nghiệm sạch, ống thí nghiệm và ống
kiểm tra.
- Ống thí nghiệm: cho vào ống thí nghiệm 1ml dung dịch cơ chất đã đạt đến 300C, giữ 5 đến 10 phút ở 300C, cho 1ml dung dịch enzyme (đã đạt đến 300C) tiếp tục giữ ở nhiệt độ 300C trong 10 phút cho ngay 5ml acid tricloacetic 5% lắc đều giữ 30 phút ở 300C lọc lấy 1ml dịch lọc trong suốt cho vào ống nghiệm khác để làm phản ứng màu với thuốc thử Folin Ciocalteau-làm như sau: lấy 1ml dung dịch lọc, thêm 4ml dung dịch Na2CO3 6% lắc đều, thêm 1ml thuốc thử Folin đã pha loãng 5 lần lắc đều giữ 30 phút ở nhiệt độ phòng, so màu trên máy speckol ở bước sóng 650 nm. Dùng cuvet dày 1cm.
Ống kiểm tra: Sau khi cho 1ml dung dịch enzyme cho ngay 5ml dung dịch acid tricloacetic 5% lắc đều rồi mới cho 1ml dung dịch cơ chất. Các giai đoạn tiếp theo giống như ở thí nghiệm.
Tính kết quả:
Lấy hiệu số mật độ quang học đọc trên máy của mẫu thí nghiệm (ET N) và mẫu kiểm tra (EKT).
Dựa vào đồ thị chuẩn tính luợng mol tyrosine tương ứng.
Tính số đơn vị hoạt động proteolitic của 1ml dung dịch enzyme đã lấy xác định hoạt độ theo công thức :
7: Thể tích toàn bộ hỗn hợp phản ứng (1ml dung dịch cơ chất, 1ml dung dịch enzyme, 5ml dung dịch acid tricloacetic).
t: Thời gian để enzyme tác dụng với cơ chất (10 phút).
Hoạt độ riêng của enzyme: Là số đơn vị hoạt độ enzyme tính trên 1mg protein enzyme (PU/mg protein).
mol tyrosine*7 PU/ml = t
Phụ lục 2
3.1 Xác định thành phần khối lượng của hàu theo trọng lượng và kích cỡ
nguyên liệu
Bảng 3.1: Thành phần khối lượng của hàu tính theo trọng lượng g/con.
Cỡ hàu (g/con) Tỷ lệ thịt (%) Tỷ lệ vỏ (%)
35 - 45 7,20 92,80
50-60 8,05 91,95
65-80 7,60 92,40
80-100 6,75 93,25
Bảng 3.2: Thành phần khối lượng của hàu tính theo kích thước cm/con
Cỡ hàu (cm/con) Tỷ lệ thịt (%) Tỷ lệ vỏ (%)
4 – 5,5 7, 41 92,59
6 – 8 7,64 92,36
8,5 -10 7,48 92,52