Plasmid mang gen Nồng độ (ng/µl) Tỷ số A260/A280
8344G 88,40 1,85 8344A 54,30 1,81 8993G 77,05 1,90 8993C 87.05 1,83 8993T 101,05 1,86 11778A 106,75 1,87 11778G 45,35 1,80 3243A 84,65 1,82 3243G 128,55 1,87 3380G 91,80 1,85 3380A 48,65 1,90
Kết quả điện di các plasmid trên gel agarose (Hình 3.1) cho thấy các plasmid tinh sạch đều có một băng DNA rõ nét kích thƣớc khoảng 3 kb (phù hợp với tính tốn lý
thuyết vector pJET 1.2 có chiều dài là 2974 bp) , chứng tỏ chúng tôi đã tách chiết đƣợc plasmid quan tâm.
Hình 3.1. Kết quả điện di plasmid tinh sạch
1: Thang chuẩn DNA; 2-12: tƣơng ứng với các plasmid 3243G, 3243A, 11778G, 11778A, 8993C, 8993T, 8993G, 8344A, 8344G,
3.1.2. Kiểm tra sự có mặt của các đoạn gen chèn trong plasmid tái tổ hợp bằng PCR-RFLP RFLP
Các đoạn gen ty thể chèn trong plasmid đƣợc nhân bản theo cách thức do Trƣơng và tập thể thiết lập [53].
Kết quả điện di trên gel agarose 2% cho thấy các phản ứng PCR đều lên băng đúng nhƣ tính tốn lý thuyết. Plasmid 3243 cho băng DNA kích thƣớc 198 bp (hình 3.2A), plasmid 3380 cho băng DNA 128 bp (Hình 3.2B), plasmid 8344 cho băng 212 bp (Hình 3.2C), plasmid 11778 cho băng 318 bp (Hình 3.2D) và plasmid 8993 cho băng 402 bp (hình 3.2E). Trong khi đó, đối chứng âm đều cho kết quả âm tính chứng tỏ các plasmid có chứa đoạn gen quan tâm.
Tiếp theo, các sản phẩm PCR đƣợc cắt enzyme giới hạn với thành phần và lích thƣớc băng tính tốn (bảng 3.2). Sản phẩm cắt đƣợc điện di kiểm tra trên gel agarose 2% hoặc gel polyacrylamide 12% (Hình 3.3). Các băng điện di đều cho kết quả đúng nhƣ tính tốn lý thuyết (đối chiếu với bảng 3.2) chứng tỏ các plasmid tinh sạch đƣợc đã mang chính xác đoạn gen đích có hay khơng có đột biến.
Hình 3.2. Kiểm tra sản phẩm PCR các đoạn gen ty thể bằng điện di trên agarose 2%
1: Thang chuẩn DNA , 2 : Đối chứng âm (không chƣ́a DNA), 3: Plamsid không