TT Vi khuẩn Nguồn gốc Ký hiệu chủng Serotype Thời gian chết chuột 1 A. pleuropneumoniae Phổi lợn APP-TN 1 5a 12 - 18h 2 Dịch họng lợn APP-TN 4 2 12 - 18h 3 P. multocida Phổi lợn PAS - TN5 A 12 - 24h 4 Dịch họng lợn PAS - TN2 D 12 - 18h
5 S. suis Phổi lợn SEP - TN1 2 12 - 24h
Như vậy, bộ giống vi khuẩn được lựa chọn để chế tạo vắc xin thử nghiệm có 5 chủng vi khuẩn khác nhau. Vi khuẩn A. pleuropneumoniae có
hai chủng thuộc serotype 2 và serotype 5a; vi khuẩn P. multocida có hai
chủng thuộc serotype A và D; vi khuẩn S. suis được lựa chọn một chủng duy nhất thuộc serotype 2, đây là serotype có khả năng cao gây bệnh cho lợn và cho người. Các chủng vi khuẩn được lựa chọn để chế tạo vắc xin thử nghiệm
đều có có cấu trúc kháng nguyên ổn định, độc lực cao được phân lập ở lợn mắc bệnh viêm phổi tại tỉnh Thái Nguyên.
3.2.2. Kết quả chế tạo vắc xin thử nghiệm phịng viêm phổi cho lợn
- Ni cấy canh trùng chế tạo vắc xin thử nghiệm:
+ Môi trường thích hợp để vi khuẩn A. pleuropneumoniae phát triển
tốt là môi trường giàu dinh dưỡng PPLO và để trong tủ ấm 5-10% CO2. + Vi khuẩn P. multocida và S. suis phát triển tốt trên môi trường BHI
broth và nước thịt TYE.
- Nuôi cấy lắc (300 - 500 lần/phút) trong vòng 24 giờ.
- Đậm độ tối thiểu cần đạt trong 1ml canh trùng dùng chế vắc xin thử nghiệm thấp nhất là 1,5 x 108 vi khuẩn theo TCVN 8669 (2011).
- Vô hoạt bằng formalin để diệt vi khuẩn với tỷ lệ 0,5%. - Bổ sung nhũ dầu với tỷ lệ 1/5 (20%).
- Vắc xin thử nghiệm chế tạo từ các chủng A. pleuropneumoniae, P. multocida và S. suis được kiểm nghiệm theo TCVN 8669 (2011) đối với vắc xin chết có bổ trợ nhũ dầu - Trung tâm kiểm nghiệm thuốc thú y Trung ương I - Hà Nội.
* Kiểm tra đậm độ vi khuẩn của canh trùng sử dụng chế vắc xin thử nghiệm
Các chủng A. pleuropneumoniae, P. multocida và S. suis được nuôi cấy riêng rẽ trong các bình khác nhau với thời gian ni cấy 24 giờ, trong khi ni có lắc (300 - 500 lần/phút). Sau thời gian nuôi cấy đến giai đoạn giống lớn, tiến hành lấy mẫu để kiểm tra đậm độ vi khuẩn trong 1 ml của từng loại canh trùng bằng phương pháp đếm số lượng vi khuẩn trên mơi trường thạch TSA có bổ sung YE tươi đối với A. pleuropneumoniae và môi trường thạch máu với P. multocida và S. suis.