Phđn loại chủng nấm sợi lựa chọn VN10-1103 lă cần thiết cho câc nghiín cứu liín quan đến câc nội dung của đề tăi. Để thực hiện nghiín cứu năy chúng tơi kết hợp nghiín cứu đặc điểm hình thâi vă giải trình tự ADN mê hóa cho gen ITS vă D1D2 thuộc gen ADNr 28S.
3.4.1. Đặc iểm hình thâi
Trín mơi trƣờng ni cấy, VN10-1103 có khuẩn lạc mău trắng, trín phần lớn câc loại môi trƣờng khâc nhau (LCA, PDA,...) chúng sinh nhiều băo tử khô, dạng bột, tạo thănh một quả cầu trắng, mỗi quả cầu năy gồm một cụm cuống sinh băo tử bện chặt.
Cuống sinh băo tử ngắn, hình trứng thn nhọn dần về phía đỉnh, phần gần đỉnh hình thănh băo tử, khi băo tử rời khỏi cuống sinh băo tử tạo thănh hình răng cƣa, phần năy kĩo dăi theo sự hình thănh băo tử, tạo thănh hình zigzag. Băo tử khơ vă kị nƣớc, kích thƣớc 2-3 µm.
A B
Hình 7. Hình ảnh khuẩn lạc (A) vă băo tử (B) chủng VN10-1103 3.4.2. Phđn loại dựa tr n phƣơng phâp sinh học phđn tử
Chủng VN10-1103 đƣợc ni trín mơi trƣờng PDA ở 28°C, sau 5 ngăy thu sợi nấm vă tiến hănh tâch ADN tổng số. Sử dụng cặp mồi ITS1 vă NL4 để nhđn đoạn genbao gồm cả gen ITS vă phần D1D2 của ADNr 28S. Kết quả chúng tơi thu đƣợc đoạn gen có kích thƣớc khoảng 1200bp.
Hình8.Sản phẩmPCR ITS –D1D2 ADNr của chủng VN10-1103 trín gel agarose
Trình tự gen ADNr đoạn ITS vă D1D2 của chủng VN10-1103 đƣợc trình băy tại mục 1 vă mục 2 phần phụ lục.
Trình tự năy có độ tƣơng đồng 100 % (1200/1200) so với chủng Beauveria bassiana AY531983.
Hình 9. Cđy ph t sinh chủng loại của chủng VN10-1103 vă c c loăi có mối
quan hệ họ hăng gần, cđy được xđy dựa văo phđn tích trình tự gen ADNr dựa văotrình tự đoạn ITS vă D1D2