CHƢƠNG 2 : THỰC NGHIỆM
2.3 Hóa chất, dụng cụ, thiết bị
2.3.1 Dụng cụ chế tạo máy
Gương: gương parabol lệch trục (30o), tiêu cự 25,4 mm của EdmunOptic. Cuvett: cuvett nhựa hình trụ vng, mỗi cạnh 10 mm.
Cách tử: tấm cách tử nhựa A4 trong suốt tán xạ theo 2 trục, 200 rãnh/mm. Lỗ kim (pinhole): đường kính 50 – 250 µm, được đục bằng lazer của
Edmund Optic. Nguồn điện
Detector: Camera Mightex 5 megapixel
2.3.2 Hóa chất
Các hóa chất được mua của hãng Merck, với độ tinh khiết >99%, pha chế bằng nước cất hai lần, gồm:
- Chất gốc K2Cr2O7, axit oxalic - Dung dịch H2SO4 0.005M - Tinh thể NaOH, Na2CO3, NaCl - EDTA Na2H2Y
Phương pháp chuẩn bị các kit thử. - Kit thử nitrit:
+ Nguyên tắc:Xác định nitrit theo phương pháp dùng thuốc thử Griess cải
tiến, tạo thành phức màu hồng, bước sóng cực đại 520 nm.
+ Thuốc thử: Hỗn hợp rắn gồm: 0,4g 𝛼- naptinamin, 1g axit sunphanilic, 6g axit oxalic, 52.6g NaCl. Nghiền và trộn đều hỗn hợp. Khối lượng này tương đương với 300 kit, mỗi kit 0,2 g cho mỗi 5 ml mẫu thử.
- Kit thử amoni:
+ Nguyên tắc:xác định amoni theo phương pháp inđothymol tạo phức màu
xanh, bước sóng cực đại 693 nm.
+ Thuốc thử:
- Thành phần 1 (dung dịch A) gồm: 8,0 g NaOH, 10,00 ml NaClO 5% chuyển vào bình định mức 100,00 ml hòa tan và định mức bằng nước cất tới vạch định mức, sau đó chuyển vào lọ kín, tối màu để bảo quản. Lượng hóa chất này có thể thử cho 250 mẫu phân tích amoni, với thể tích mỗi lần thử là 0,20 ml dung dịch A dùng cho 5 ml mẫu.
- Thành phần 2 (hỗn hợp rắn B): Cân 0,2g natri nitropussiat, 1,5 g thymol, 1,5g EDTA, 21,8g NaCl. Tiến hành nghiền nhỏ, trộn đều hỗn hợp trên và bảo quản trong lọ kín được 125 gói kit amoni, với lượng cân mỗi gói là 0,1 g gói rắn B dùng cho phân tích 5 ml mẫu.
Phương pháp dựng đường chuẩn. - Dựng đường chuẩn Nitrit:
Chuẩn bị 5,0 ml dung dịch chuẩn nitrit có các nồng độ từ 0,05-0,8 ppm, thêm ống kit thử dạng bột chứa 0,2g thuốc thử nitrit, lắc cho tan. Chờ 5 phút để ổn định màu rồi chuyển vào máy đo quang cầm tay.
Độ hấp thụ của dung dịch phức màu được xác định đồng thời bằng 2 thiết bị UV-Vis 1650PC (Shimadzu, Nhật Bản và máy đo quang cầm tay tự chế tạo).
2.4 Phƣơng pháp đánh giá máy đo.
2.4.1. So sánh kết quả nồng độ chất phân tích tìm theo hai thiết bị của dãy dung dịch chuẩn cùng nồng độ:
Sử dụng phương trình đường chuẩn xây dựng trên hai thiết bị để xác định lại nồng độ chất phân tích trong mẫu kiểm tra. Từ hai tập số liệu, sử dụng chuẩn student để so sánh từng cặp:
𝑠𝑑 = (𝑑𝑖 − 𝑑 )2
𝑛 − 1
𝑡𝑐𝑎𝑙 = 𝑑 𝑛 𝑠𝑑
Nếu tcal < ttable, kết quả phân tích các dung dịch kiểm tra bởi thiết bị chế tạo được khác không đáng kể so với máy đã thương mại hóa của hãng nổi tiếng. - Xác định độ nhạy: Độ nhạy m = yL− ybl
xL−x bl = tan α = b
- So sánh khoảng LOD, LOQ của thiết bị chế tạo với thiết bị thương mại - So sánh độ chụm (Precision): Nhận xét độ chụm các kết quả độ hấp thụ
quang thơng qua tính độ lệch chuẩn tương đối, RSD (%)=s/x ̅ (x100% So sánh độ chụm từ kết quả đo sử dụng máy 1650PC và máy đo quang tự chế tạo. Lấy một mẫu phân tích có nồng độ nằm giữa khoảng tuyến tính, đo lặp lại nhiều lần trên hai thiết bị đo và so sánh phương sai của 2 tập số liệu bằng chuẩn Fisher, với
Ftính = SA2/SB2 (qui ước Ftinh>1)
Nếu Ftính > Fbảng (P, f1, f2), khi đó hai phương sai (cho biết độ chụm của hai phép đo) có sự khác nhau có nghĩa hay độ chụm các số liệu thực nghiệm giữa hai phương pháp là khác nhau.
Nếu độ lặp lại hai phương pháp khác nhau thì có thể kiểm tra xem phương pháp sử dụng máy Spectroclick có độ chụm tốt hơn hay kém hơn phương pháp sử dụng máy 1650 PC (kiểm tra chuẩn F 1 đuôi: one-tailed-test). Nếu Fthực nghiệm > Fchuẩn (P,f1, f2) thì có thể kết luận phép đo dùng máy đo quang tự chế tạo kém chính xác hơn phương pháp sử dụng máy đo UV- 1650PC của Shimadzu.
- Độ đúng: Đánh giá thông qua độ chệch: d= |x ̅-μ| và sai số tương đối giữa kết quả đo bằng thiết bị đo tự chế tạo với giá trị thực có trong mẫu tự pha.