- Kiểu radical (liên kết dạng cánh): Cấu trúc gồm 2, 3,4 NST liên kết với nhau theo
CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 3.1 Nuôi cấy tế bào và xử lý mẫu
3.1 Nuôi cấy tế bào và xử lý mẫu
Chúng tôi sử dụng phƣơng pháp nuôi cấy tế bào lympho máu ngoại vi ngƣời theo tiêu chuẩn của Phịng phân tích NST thuộc Viện năng lƣợng nguyên tử Đà lạt, đây là cơ sở đã đƣợc tổ chức Năng lƣợng nguyên tử quốc tế IAEA công nhận. Đối với mẫu nuôi cấy tế bào bạch cầu lympho để làm tiêu bản NST, chúng tơi có sự thay đổi về nồng độ colcemid so với tiêu chuẩn của Viện năng lƣợng. Colcemid đƣợc dùng với nồng độ 0,17 µg/ml và cho vào mẫu tại giờ thứ 46 kể từ lúc nuôi cấy. Nồng độ này đảm bảo không gây độc tế bào, thu đƣợc kết quả tốt nhiều tế bào ở phân bào lần 1 và hạn chế số tế bào chuyển sang phân bào lần 2 mà không làm ảnh hƣởng đến kết quả. Theo IAEA khuyến cáo nồng độ colcemid có thể thay đổi từ khoảng 0,10-0,20 µg/ml đƣợc thêm vào trong khoảng thời gian từ 46-52 giờ. Việc xác định chính xác thời gian và nồng độ colcimid đóng vai trị rất quan trọng bởi vì bằng kỹ thuật nhuộm giêmsa quy ƣớc khơng thể phân biệt đƣợc tế bào phân bào lần 1 với tế bào phân bào lần 2. Sau phân bào lần 1, ở lần phân bào tiếp theo số tổn thƣơng sẽ bị mất dần đi do hiện tƣợng sửa chữa phục hồi hoặc tế bào đã chết. Khảo sát thời gian thu hoạch sau khi sử dụng colcemid, chúng tơi và các tác giả đều có nhận định trùng hợp là sau 2 tiếng. Thời điểm 48 giờ này thích hợp để thu hoạch, khơng gây độc tế bào và thu đƣợc nhiều tế bào ở kỳ giữa. Kết quả chúng tôi thu đƣợc các tế bào có chỉ số phân bào cao, có thể phân tích trung bình từ 100 metapha trên một mẫu bằng kỹ thuật nhuộm giemsa thƣờng quy để đánh giá biến loạn NST. Các đơn vị sử dụng colcemid với nồng độ khác nhau theo báo cáo lần lƣợt là: tổ chức Nguyên tử năng quốc tế IAEA, Bộ mơn mơ phơi, Đại học Y dƣợc TP Hồ Chí Minh, Khoa Y học hạt nhân, BV Chợ Rẫy, Phòng đo liều sinh học, Viện năng lƣợng nguyên tử Đà Lạt và tác giả.
Đồ thị 3.1:Nồng độ colcemid và số lƣợng các đơn vị nghiên cứu đã sử dụng
Số lƣợng metapha đƣợc phân tích là 10.524, hình ảnh đƣợc tự động ghi lại bằng kính hiển vi, ngƣời sử dụng chỉ việc chọn các metapha đáp ứng đủ điều kiện. Tối thiểu 100 metapha/1 tế bào, các biến loạn NST đƣợc thống kê lại dựa trên kết quả phân tích từ 6-47 tế bào. Đã có nhiều tác giả nghiên cứu nguy cơ tác động của mơi trƣờng, hóa chất đến biến loạn NST nhƣng những nghiên cứu chiếu xạ thực nghiệm mẫu máu in vitro bằng máy gia tốc tuyến tính thì chƣa thấy đề cập đến. Tác giả V.Kasuba (2008) [41] đã tiến hành phân tích số lƣợng 765 nhân viên làm việc trong bệnh viện với tổng số 193.000 metapha trong 5 năm, đã rút ra đƣợc các kết luận khả quan.