CHƢƠNG 2 : ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2. Chất chuẩn, hoá chất, thiết bị
2.2.1 Chất chuẩn
Chất chuẩn Paraquat dichloride.x-hydrate của hãng Sigma - Aldrich độ tinh khiết 99,5%; Exp date: 14.Dec.2016.
2.2.2 Hố chất
- Các dung mơi dùng cho sắc ký lỏng hiệu năng cao (MeOH, ACN ....) của hãng Merck.
- KCl tinh thể, độ tinh khiết: 99,5% của hãng Merck. - Acid trichloroacetic tinh khiết 98,5% của hãng Merck. - Acid phosphoric (H3PO4) đặc (d=1,685 g/cm3
) của hãng Merck.
- Các dung mơi, hố chất dùng để xử lý mẫu của hãng Merck và đạt tiêu chuẩn tinh khiết phân tích (P.A.)
- Nƣớc cất sử dụng là nƣớc cất hai lần đã đƣợc deion hoá.
- Dung dịch đệm pha động pH = 2,5 đƣợc chuẩn bị bằng cách sau: gồm 1,1 g natri heptanesulfonate; 2 g KCl; 2 ml polyetylenglycol 400; 200 ml MeOH; 0,5 ml triethylamine thêm nƣớc xấp xỉ 1000 ml. Điều chỉnh pH của pha động bằng H3PO4 đến các giá trị pH mong muốn. Định mức vừa đủ 1000 ml bằng nƣớc deion.
- Pha dung dịch chuẩn gốc PQ: Hòa tan 100 mg chất chuẩn paraquat dichloride (C12H14Cl2N2.xH2O), hòa tan trong 100 ml nƣớc để đƣợc dung dịch gốc. Từ đó pha thành các dung dịch chuẩn thứ cấp có nồng độ 0,1 - 20 µg/ml trong nƣớc.
Trộn các nồng độ dung dịch chuẩn thứ cấp với huyết tƣơng trắng để có nồng độ PQ 0,02 - 10 µg/ml để khảo sát và xác định giá trị sử dụng của phƣơng pháp.
2.2.3. Thiết bị, dụng cụ
Thiết bị
- Thiết bị sắc ký lỏng hiệu năng cao Agilent 1200, gồm bơm trộn dung môi gradient áp suất cao, bộ đuổi khí trực tuyến bằng chân khơng, buồng ổn nhiệt, thiết bị tiêm mẫu tự động, detector mảng Diode (DAD), thƣ viện phổ độc chất sử dụng detector mảng Diode, máy tính, máy in.
- Cột pha đảo Agilent C8 (150 mm x 4,6 mm; 5 µm) và cột bảo vệ C8 (20 mm x 4,0 mm, 5 μm).
- Cân phân tích Precisa XT 220A, độ đọc của cân 0,0001 g. - Bể siêu âm. Model: S30/H. Hãng ELMA, Đức.
- Máy đo pH Meter 744, giá trị đọc ± 0,01, khoảng đo pH = 0,00 – 14,00 - Máy ly tâm Universal 320 hãng Hettich, Đức, tốc độ tối đa 4000 vịng/phút.
- Máy lắc xốy model: 3005 của hãng GFL, Đức. - Tủ sấy model: 500 của hãng Memmert, Đức.
- Máy cất nƣớc hai lần. Model: A4000D/Aquatron hãng Stuart - Barloworld Scientific, 4 l/h, Anh.
- Bộ lọc nƣớc siêu sạch. Model: WaterPro PS/HPLC/UF hybrid - Labconco, 115V, 60Hz, Mỹ.
Dụng cụ
- Bình định mức dung tích: 5, 10, 25, 50, 100 ml. - Pipetman các loại từ 0 - 1000 µl.
- Bộ lọc dung mơi của hãng Agilent, Mỹ.
- Ống nghiệm lấy máu chứa EDTA và ống nghiệm có nút xốy.
Tất cả các dụng cụ thủy tinh đều phải đƣợc rửa sạch, tráng bằng nƣớc cất, sau đó tráng bằng MeOH và để khơ, tráng n-hexan 3 lần sau đó sấy ở 105oC trong vịng 1 giờ, lấy ra để nguội trƣớc khi sử dụng.