1.5.1. Phương pháp chiết lỏng-lỏng kết hợp với sắc ký khí khối phổ
Dư lượng 48 loại thuốc trừ sâu họ halogen hữu cơ, photpho hữu cơ, pyrethroid và nito hữu cơ trong các mẫu mật ong được sản xuất tại Brazil được xác
định bằng phương pháp sắc ký khí khối phổ (GC/MS) [23]: Mẫu mật ong được hòa
tan trong nước, lắc đều. Tiếp theo mẫu được chiết bằng 50 mL dung môi etyl axetat
để chiết bằng cách khuấy trong 20 phút. Pha hữu cơ được tách ra khỏi mẫu bằng
cách ly tâm hỗn hợp chiết đã nêu trên. Thu lấy dung mỗi hữu cơ ở lớp phía trên,
chiết mẫu thêm một lần nữa bằng etyl axetat. Gộp hai phần lại và làm cô cạn trong một thiết bị quay cất chân không ở áp suất thấp ở 65oC, làm khô phần mẫu cịn lại nhờ dịng khí N2 tinh khiết. Cuối cùng, phần mẫu khơ được hịa tan trong 5 mL etyl axetat và lọc mẫu cịn lại qua giấy lọc có kích thước lỗ 0,5 µm. Dịch chiết được làm sạch bằng cách cho qua cột Florisil đã được hoạt hóa bằng 5 mL axeton, dung môi rửa giải chất phân tích ra khỏi cột Florisil là 10 mL hỗn hợp hexan:etyl axetat tỉ lệ 50:50. Sau khi hoàn thành bước rửa giải, dung dịch thu được được cô cạn nhờ dịng khí N2 và được hịa tan trở lại trong 1 mL etyl axetat, sau đó đem phân tích trên
GC/MS.
Trong số 48 loại thuốc trừ sâu nghiên cứu, có 45 loại có giới hạn phát hiện (LOD) thấp hơn 0,005mg/L, trong đó 28 loại có LOD bằng hoặc thấp hơn 0,001 mg/L. Giới hạn định lượng (LOQ) của các chất nghiên cứu biến thiên trong khoảng từ 0,0010 mg/L đến 0,0200 mg/L.
1.5.2. Phương pháp chiết pha rắn kết hợp với sắc ký khí khối phổ
51 loại thuốc trừ sâu thuộc các nhóm khác nhau mà chủ yếu là nhóm clo hữu cơ, photpho hữu cơ và thuốc diệt ve trong các mẫu mật ong được xác định đồng
mật ong được hòa tan trong hỗn hợp nước:metanol (70:30), sau đó chuyển vào cột C18 (1 g) đã được hoạt hóa bởi axetonitril và nước. Các chất phân tích được rửa giải bằng hỗn hợp hexan:etyl axetat. Dung dịch sau rửa giải được thổi khô và đem
xác định bằng phương pháp sắc ký khí khối phổ. Khối phổ làm việc theo chế độ
chọn lọc ion.
Giới hạn phát hiện của phương pháp phân tích đối với từng loại thuốc trừ sâu có giá trị trong khoảng 0,1-6,1μg/kg. Khoảng tuyến tính thu được từ 25-200 µg/Kg với hệ số xác định > 0,996.
Bên cạnh đó, một số tác giả đã cải tiến phương pháp chiết pha rắn để phân
tích đồng thời 42 loại thuốc trừ sâu thuộc nhóm clo hữu cơ, carbamate, và phốt pho hữu cơ trong các mẫu mật ong. Trong đó nhóm photpho hữu cơ và cacbamat được phân tích bằng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ đề ion ở áp suất khí quyển
(LC/APCI/MS) [12].
Với phương pháp này, giới hạn định lượng của phương pháp LC/APCI/MS
đối với từng loại thuốc trừ sâu nhóm phốt pho hữu cơ và cacbamat từ 0,005-0,1
mg/kg. LOQ của phương pháp GC/MS đối với từng loại thuốc trừ sâu nhóm clo hữu cơ trong khoảng 0,003-0,2 mg/kg. Độ thu hồi của phương pháp LC/APCI/MS là 73- 95%, độ thu hồi của phương pháp GC/MS là 79-98%.
Detectơ quang hóa ngọn lửa (FPD) sử dụng trong sắc ký khí và detectơ huỳnh quang (FL) sử dụng trong sắc ký lỏng cũng được sử dụng để thực hiện xác định đồng thời dư lượng 15 loại thuốc trừ sâu nhóm phốt pho hữu cơ (OP), 17 loại
nhóm clo hữu cơ (OC), 8 loại nhóm Pyrethoid (PYR), 12 loại nhóm N-metyl- cacbamat (NMC) và bromopropylate trong các mẫu mật ong [18].
Theo đó, khoảng tuyến tính trong xác định các chất được tìm thấy là từ
0,0005-0,074 mg/kg với hệ số tương quan R2 ≥ 0,99 đối với đa số các hợp chất
nghiên cứu. Hầu hết các thuốc trừ sâu có độ thu hồi trong khoảng 70-103%. Các giá trị LOQ cho tất cả các loại thuốc trừ sâu nghiên cứu dao động từ 0,0005-0,025 mg/kg, giá trị LOD từ 0,0002-0,008 mg/kg.
Chương 2
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1. Đối tượng nghiên cứu
Đối tượng nghiên cứu là sản phẩm mật ong nuôi tại các tỉnh Hưng Yên, Bắc
Giang, Lạng Sơn. Mật ong được lấy trực tiếp vào các tháng 2, 3 và 4 năm 2014 từ cơ sở nuôi ong tại xã Hồng Nam - huyện Tiên Lữ - tỉnh Hưng Yên; xã Giáp Sơn - huyện Lục Ngạn - tỉnh Bắc Giang; xã Bằng Khánh - huyện Lộc Bình - tỉnh Lạng Sơn. Ở những nơi lấy mẫu, các thùng ong được đặt trong những vườn cây ăn quả như nhãn, vải, mận… Vào thời điểm tháng 2 đến tháng 4 là mùa hoa nở, hàng ngày chủ nuôi ong sẽ thả đàn ong ra để chúng đi hút mật tại các vườn cây ăn quả này.
Các chất lựa chọn nghiên cứu xác định trong mật ong là nhóm chất clo hữu cơ, bao gồm: α-BHC; Hexachlorbenzen (HCB); β-BHC; γ-BHC; δ-BHC;
Heptachlor; α-Chlordene; β-Chlordene; Oxychlordane; trans-Chlordane; o,p’-DDE;
cis-Chlordane; trans-Nonachlor; p,p’-DDE; o,p’-DDD; cis-Nonachlor; o,p’-DDT; p,p’-DDD; p,p’-DDT. Trong đó, các hợp chất của BHC, DDT, Chlordane, Hexachlorbenzen và Heptachlor đều nằm trong danh mục thuốc BVTV cấm sử dụng ở Việt Nam.