3.5. Quy trình chuẩn bị mẫu và phân tích thuốc BVTV nhóm clo hữu cơ trong mật ong mật ong
3.5.1. Chiết mẫu
- Bước 1: Cân 1g mật ong cho vào lọ đựng mẫu 30 mL, cho 5 mL nước cất vào lọ đựng mẫu, lắc đều trong 15 phút.
- Bước 2: Cột hấp phụ chứa 0,5 g chất C18 được rửa lần lượt bằng 10 mL metanol, 10 mL nước cất (bỏ các dịch rửa này).
- Bước 3: Đưa toàn bộ mẫu ở bước 1 vào cột đã được hoạt hóa ở bước 2;
tráng lọ đựng mẫu với 2 x 1 mL nước cất. Cho tiếp 30 mL nước cất qua cột (bỏ tất cả các dịch rửa giải này). Hút khô nước trong cột bằng hút chân không.
- Bước 4: Chất phân tích bị giữ lại trên pha rắn được rửa giải bằng 10 mL
etyl axetat, thu lấy dịch rửa giải này (F1). Cho 1 mL n-Hexan vào F1, cô cạn cịn 1 mL bằng cơ quay chân khơng, dịch thu được dùng để thực hiện bước làm sạch ở
bước tiếp theo.
3.5.2. Làm sạch dịch chiết
- Làm sạch dịch chiết trên cột sắc ký. Cột sắc ký dài 30 cm, đường kính trong 0,6 cm được nhồi theo thứ tự từ dưới lên trên: bông thủy tinh, 2 g nhơm oxit Al2O3, cột được hoạt hóa bằng 10 mL n-Hexan. Sau đó, cho dịch chiết thu được ở
bước 4 mục 3.5.1 chạy qua cột sắc ký.
- Rửa giải chất cần phân tích: tiến hành rửa giải chất cần xác định trên cột sắc ký bằng 80mL n-Hexan. Thu lấy toàn bộ dung dịch rửa giải này và thổi khơ bằng khí N2 cịn 0,2 mL và chuyển vào lọ đựng mẫu 1 mL.
3.5.3. Làm giàu mẫu
Các phần dung dịch rửa giải đã hòa tan đến 1 mL bằng n-Hexan được làm
bay hơi dung mơi bằng khí N2 đến cịn 0,5 mL. Dung dịch cuối cùng này được phân tích trên máy sắc ký khí với detectơ cộng kết điện tử (GC/ECD)
Có thể tóm tắt các bước chuẩn bị mẫu để phân tích nhóm thuốc BVTV cơ clo trong mẫu mật ong như hình sau, hình 3.6.
1 g mật ong + 5 mL nước cất
Hình 3.6. Quy trình chuẩn bị mẫu và phân tích một số thuốc BVTV nhóm clo hữu cơ trong mật ong
Cột C18 đã được hoạt hóa bằng 10 mL Metanol + 10
mL nước cất
Lắc trong 15 phút
Rửa giải chất phân tích bằng 10 mL etyl axetat
Thêm 1 mL n-Hexan
Cột nhơm đã được hoạt hóa bằng 10 mL n-Hexan
Cơ cạn cịn 1 mL
Rửa giải chất phân tích bằng 80 mL n-Hexan
Thổi khơ cịn 0,2 mL
Định mức đến 1 mL bằng n-
Hexan
Thổi khơ cịn 0,5 mL Phân tích trên GC/ECD (1 μL mẫu)