2.3.1. Phân tích khối lượng polymer ngoại bào
EPS trong dịch thu lại sau ly tâm được tinh sạch bằng cách kết tủa trong Ethanol lạnh với tỷ lệ thể tích là 2 ethanol : 1 mẫu và để ở nhiệt độ -20oC qua đêm. Mẫu sau kết tủa được ly tâm với lực ly tâm 4000×g ở 4oC (Rotina 420R, Hettich Zentrifugen) trong 15 phút để thu EPS tinh sạch. Khối lượng của EPS được xác
định bằng phương pháp trọng lượng sau khi sấy khô tới trọng lượng không đổi ở nhiệt độ từ 50oC tới 60oC.
2.3.2. Phân tích hàm lượng protein, polysaccharide và axit nucleic trong polymer ngoại bào polymer ngoại bào
EPS trong dịch sau ly tâm được kết tủa trong ethanol lạnh với quy trình như trình bày ở mục a), ly tâm (Rotina 420R, Hettich Zentrifugen), loại bỏ phần dịch lỏng. Phần EPS kết tủa được hòa tan trong nước cất tới thể tích ban đầu. Dung dịch này được sử dụng để phân tích protein, polysaccharide và nucleic acids. Protein được phân tích bằng phương pháp Lowry với dung dịch chuẩn là BSA (Bovine Serum Albumin) [45]. Cacbonhydrate được xác định theo phương pháp Phenol – axit Sulfuric với dung dịch chuẩn là glucose [46]. Axit nucleic được phân tích bằng phương pháp Dyphenylamin.
2.3.3. Đo độ đục
TCVN 6184:2008 được áp dụng để xác định độ đục của mẫu thử. Phần nước trong sau phản ứng đông keo tụ được dùng để đo độ đục của dung dịch bằng thiết bị đo độ đục nhanh của Hanna (Model: HI 93703C) với dung dịch chuẩn là Fomazin. Dung dịch được khuấy đều, sau đó lấy khoảng 12ml dung dịch cho vào cuvet. Đặt cuvet vào trong máy HI 98713. Sau vài giây, máy báo kết quả độ đục của dung dịch trên màn hình (đơn vị: NTU).
2.3.4. Đo phổ hồng ngoại
Xác định nhóm chức trong EPS bằng phổ hồng ngoại IR: EPS được tinh sạch bằng cách kết tủa trong ethanol, sau đó sấy khơ ở nhiệt độ 50oC. 0,1 - 0,2 mg mẫu sau khi đã sấy khô được trộn và nghiền kỹ với 100mg KBr. Sau đó, ép mẫu trên máy có lực ép 5 tấn để tạo viên. Mẫu sau khi tạo viên được cho lên cửa sổ máy quang phổ hồng ngoại để xác định thành phần nhóm chức.
2.3.5. Phân tích nồng độ thuốc nhuộm
Nồng độ của thuốc nhuộm: Nồng độ thuốc nhuộm Yellow CL2R, Blue CLBP và Red CL5B được xác định bằng phương pháp đo quang (UVD-3200, Labomed Inc.) tại các bước sóng 418nm, 626nm và 514nm tương ứng.
Chương 3 - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN