CHƢƠNG 2 THỰC NGHIỆM
2.2. Phƣơng pháp nghiên cứu
2.2.1. Phƣơng pháp phân tích
Phƣơng pháp phân tìch là phƣơng pháp điện di mao quản sử dụng detector độ dẫn không tiếp xúc kết nối kiểu tụ điện (CE – C4D). Thiết bị này đƣợc thiết kế và chế tạo bởi Công ty 3Sanalysis (http://www.3sanalysis.vn/) trên cơ sở hợp tác với nhóm nghiên cứu của GS. Peter Hauser (Thụy Sỹ), là thiết bị có nguồn thế cao lên đến 20kv, có thể thực hiện bán tự động (hính 2.1). Hệ thiết bị này hiện đang đƣợc triển khai nghiên cứu hoàn thiện và phát triển ứng dụng tại Bộ mơn Hóa Phân tìch, Khoa Hóa học, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội [1].
Hình 2.1. Hệ thiết bị CE-C4D
(1: Hộp thế an toàn, 2: Bộ điều khiển cao thế, 3: Cảm biến đo độ dẫn không tiếp xúc, 4: Ống dẫn dung dịch đệm, 5: Núm điều chỉnh , 6: Bộ phận điều khiển, 7: Bính
khì nén)
2.2.2. Phƣơng pháp xử lý mẫu
*Các mẫu đƣợc sử dụng trong nghiên cứu này gồm mẫu trắng là mẫu nƣớc tiểu đƣợc lấy từ những ngƣời khỏe mạnh, không sử dụng bất cứ loại ma túy nào và mẫu nƣớc tiểu thu của các đối tƣợng bị tính nghi đã sử dụng ma túy nhóm ATS.
*Xử lý mẫu nƣớc tiểu: do hàm lƣợng chất phân tìch có trong nƣớc tiểu thƣờng rất thấp nên cần đƣợc chiết tách để làm giàu mẫu và loại bỏ tạp chất trƣớc khi bơm mẫu vào thiết bị CE. Sau khi tham khảo tài liệu [2] và khảo sát các điều kiện thiết bị, hóa chất, chúng tơi thực hiện quy trính chiết xuất nhƣ sau:
- Xử lý mẫu nước tiểu bằng phương pháp chiết pha rắn: sử dụng cột C18
dung tìch 3ml.
1. Hoạt hóa cột ( 3ml MeOH, 3ml H2O, 3ml đệm phốt phát pH 6) 2. Nạp mẫu ( 5 ml nƣớc tiểu, 0,5ml đệm phốt phát pH 6)
3. Rửa tạp chất ( 1ml H2O, 2ml H3PO4 10mM, 2ml MeOH/H2O 1/9 v/v) 4. Rửa giải ( 2ml MeOH ngâm 5 phút), thu dịch chiết
- Xử lý mẫu nước tiểu bằng phương pháp chiết lỏng:(chiết lặp 2 lần) 1. Lấy mỗi mẫu 5 ml nƣớc tiểu vào ống nghiệm có nắp xốy
2. Kiềm hóa mẫu về pH 9 bằng dung dịch NH3 (kiểm tra bằng giấy quỳ) 3. Chiết mẫu bằng 3 ml etyl axetat, lắc trong vòng 10 phút.
4. Ly tâm cho tách lớp (tốc độ 8000 vòng/phút trong 20 phút)
5. Hút lớp etyl axetat (lớp trên) đến khi hết dịch trong thí cho 200µl MeOH vào lắc nhẹ giúp làm giảm huyền phù trong mẫu rồi tiếp tục hút thu tiếp dịch chiết.
6. Cô cạn dịch chiết bằng dịng khì nito, sau đó hịa tan vào MeOH và pha lỗng với tỉ lệ thìch hợp rồi tiến hành phân tìch trên thiết bị CE.