CHƢƠNG 1 TỔNG QUAN
1.4. Các phƣơng pháp xử lý mẫu phẩm sinh học
1.4.1. Phƣơng pháp chiết lỏng-lỏng
Chiết là quá trính chuyển chất tan từ pha này sang pha khác[7].
Chiết các chất vô cơ: các chất vô cơ nhƣ là các ion kim loại, các anion tan trong nƣớc là chất có khả năng hydrat hóa rất lớn. Muốn chuyển các ion này vào pha hữu cơ cần phá bỏ lớp hydrat hóa, tạo liên kết giữa chúng với các tác nhân chiết theo các cơ chế khác nhau, hính thành dạng chiết tan tốt trong dung môi hữu cơ và dễ dàng chuyển vào pha hữu cơ. Để tăng cƣờng tình chọn lọc của phƣơng pháp có
thể sử dụng các điều kiện chiết phù hợp bao gồm: pH của dung dịch, nồng độ chất tạo phức, nồng độ thuốc thử…, khi đó chất phân tìch do tình chất khác nhau có khả năng phản ứng chọn lọc với các tác nhân chiết cũng nhƣ các phân tử dung môi hữu cơ.
Chiết các chất hữu cơ: để chuyển đƣợc các chất tan hữu cơ từ pha nƣớc sang pha hữu cơ thí nguyên tắc cơ bản là các chất tƣơng tự nhau sẽ hòa tan vào nhau. Các chất hữu cơ có lực tƣơng tác với các phân tử trong pha hữu cơ theo các lực phân cực hoặc lực phân tán, tuy nhiên để chiết đƣợc triệt để, hiệu suất chiết cao trƣớc hết phải chọn các dung môi chiết cho phù hợp để các chất phân tìch phải tan tốt vào pha hữu cơ theo sự tƣơng tự về tình chất của chúng [7].
Mặt khác phải sử dụng các kỹ thuật chiết lặp, giải chiết, rửa chiết để có đƣợc chất phân tìch tinh khiết, hiệu quả chiết cao.
Chiết lỏng-lỏng là phƣơng pháp chiết dựa trên sự phân bố khác nhau của chất tan giữa hai pha không trộn lẫn vào nhau thƣờng một pha là nƣớc và pha còn lại là dung mơi hữu cơ khơng tan hoặc rất ìt hịa tan trong nƣớc. Q trính chiết là quá trính chuyển chất tan từ pha nƣớc vào pha hữu cơ đƣợc thực hiện qua bề mặt tiếp xúc giữa hai pha nhờ các tƣơng tác hóa học giữa tác nhân chiết và chất cần chiết [8,9].
Để có đƣợc kết quả chiết tốt, q trính chiết phải có các điều kiện chiết cần thiết. Điều kiện chiết chất phân tìch vào pha hữu cơ:
+ Dung môi chiết và dịch chiết là hai pha khơng đƣợc trộn lẫn, trong đó dung mơi phải có độ tinh khiết cao, đảm bảo khơng làm nhiễm bẩn chất phân tìch;
+ Hệ số tách α càng khác 1 càng tốt
+ Cân bằng chiết đạt đƣợc nhanh và thuận nghịch, sự phân lớp phải rõ ràng để giải chiết đƣợc tốt
+ Phải chọn đƣợc điều kiện chiết tối ƣu bao gồm pH của dung dịch, nồng độ tác nhân chiết, nồng độ thuốc thử, chất phụ gia…
Phƣơng pháp chiết lỏng – lỏng có thể áp dụng cho các chất bay hơi, chất lỏng và rắn với những ƣu điểm nhƣ các thiết bị đơn giản, hiện có rất nhiều dung mơi tinh
khiết với độ hòa tan và chọn lọc tốt, hòa tan mẫu thuận lợi và phù hợp với thiết bị sắc ký.
Phƣơng pháp này đã đƣợc Jos´e Luiz da Costa và Alice Aparecida da Matta Chasin sử dụng để xử lì mẫu nƣớc tiểu xác định MDMA, MDA, MDEA [18]. Cho 100µL dung dịch chất nội chuẩn MBDB, 2g NaCl và 0,5mL dung dịch NaOH 1M vào 4ml nƣớc tiểu, hỗn hợp này đƣợc lắc đều trong 10 phút và ly tâm trong 10 phút. Dịch chiết đƣợc chuyển sang một ống khác có chứa 50µL MeOH/HCl (axit HCl 5M trong Methanol) sau đó cho bay hơi đến khơ dƣới dịng khì nitơ ở nhiệt độ 300C. Phần cặn chiết còn lại đƣợc hòa tan bằng 250µL pha động và bơm vào hệ thống HPLC để phân tìch. Hiệu suất thu hồi ở mức hàm lƣợng 300 ng/mL là 102,0; 105,1; 101,2 % và ở mức hàm lƣợng 500 ng/mL là 90,0; 85,5; 98,8 % lần lƣợt cho MDMA, MDEA và MDA.
Marta Concheiro và cộng sự [22] cũng sử dụng phƣơng pháp chiết lỏng – lỏng để xác định amphetamin, MA, MDA, MDMA, MDEA và PMA trong nƣớc tiểu nhƣ sau: Thêm 50 µL của chất nội chuẩn nồng độ 1 mg/L; 0,5 mL NaOH 1N và 3ml dietyl ete vào 0,5 ml nƣớc tiểu sau đó lắc trong 15 phút, ly tâm ở tốc độ 3500 vòng/phút. Pha hữu cơ đƣợc chuyển sang một ống khác. Dung dịch này đƣợc thêm 100mL hỗn hợp MeOH : HCl (99:1 v/v) sau đó cho bay hơi dƣới dịng khì Nitơ ở 350C. Phần chất rắn còn lại sau khi bay hơi hết dung mơi đƣợc hịa tan trong 100 µL đệm amoni format pH 3,0 sau đó tiến hành bơm mẫu vào hệ thiết bị sắc ký. Kết quả thu đƣợc hiệu suất thu hồi của amphetamin, MA, MDA, MDMA, MDEA và PMA lần lƣợt là 86,9 %; 92,1%; 85,9 %; 88,8%; 88,3%; 81,1%.