Đối với kết quả khối lƣợng rễ sau khi xử lý mặn ta nhận thấy 14 giống bên nhóm đối chứng trọng lƣợng rễ tƣơng đối đồng đều từ 0,03g-0,039g. Các giống lúa khi xử lý mặn có trọng lƣợng rễ cao chiếm 42,8% gồm các giống: Dấu Ấn độ, Nếp nõn tre, Pokkali, Hom râu, Nếp ốc. Trong đó, giống có trọng lƣợng rễ cao nhất là giống Nếp nõn tre. Các giống có trọng lƣợng rễ ở mức trung bình chiếm 14,28% gồm có 2 giống: Mặn D2, Chiêm cũ. Còn lại 42,85% các giống có khối lƣợng rễ thấp, trong đó giống chuẩn kháng IR28 là giống có khối lƣợng rễ thấp nhất(Hình 21.).
Hình 21. Đồ thị biểu diễn khối lƣợng rễ
Đồ thị biểu thị giá trị trung bình (± SE) của 9 lần lặp lại Trục tung biểu thị khối lượng thân (g)
Trục hoành biểu thị tên giống được sắp xếp từ giống kháng kém nhất đến kháng tốt nhất từ trái qua phải
Sau khi tiến hành đánh giá ảnh hƣởng của điều kiện mặn lên đặc điểm hình thái sinh lý và đặc điểm sinh lý của cây lúa chúng tôi tiếp tục các bƣớc tiếp nghiên cứu tiếp theo.
3.3. Tách chiết DNA tổng số từ lá lúa
Lá lúa được thu và nghiền sử dụng máy nghiền mẫu. DNA tổng số đ
CTAB và được điện di kiểm tra. Kết quả điện di cho thấy các băng DNA
sáng, chứng tỏ chất lƣợng DNA của các mẫu là khá tốt, . Kết quả điện di và đo OD 260/280 cũng cho thấy DNA có nồng độ tƣơng đối cao, chất lƣợng tốt đủ tiêu chuẩn thực hiện các nghiên cứu tiếp theo.(Hình 22.)
Hình 22. DNA tổng số tách từ lá lúa
1.Nếp nõn tre; 2.Chiêm cũ; 3.Nếp vải; 4.Ré nước; 5.Hom râu; 6.Nếp ốc; 7.Ngoi;8. Dâu Ấn độ; 9. Nếp đèo đàng M. Maker 1kb, Gel Agarose 1%.
3.4. Nhân bản gen OsHKT1
Gen OsHKT1đƣợc nhân bản bằng phƣơng pháp PCR sử dụng 4 cặp mồi đặc hiệu. Kết quả sản phẩm PCR đƣợc điện di kiểm tra trên gel agarose. Kết quả sản phẩm phản ứng PCR sử dụng cặp mồi 1 đƣợc trình bày ở hình 23.
Hình 23. Điện di sản phẩm PCR sử dụng cặp mồi 1
1.Nếp nõn tre; 2.Chiêm cũ; 3.Nếp vải; 4.Ré nước; 5.Hom râu; 6.Nếp ốc; 7.Ngoi;8. Dâu Ấn độ; 9. Nếp đèo đàng M. Maker 1kb; Gel Agarose 1%
Kết quả điện di cho thấy các băng thu đƣợc sáng , khá gọn, đồng đều nhau, đúng kích thƣớc là 499bp và khơng xuất hiện băng phụ. Như vậy, đoạn
đầu của exon 1 gen OsHKT1 đã được nhân bản thành công.
Đoạn tiếp theo của exon 1 được nhân bản sử dụng cặp mồi 2. Kết quả điện di sản phẩm PCR được trình bày ở hình 24.
Hình 24. Điện di sản phẩm PCR sử dụng cặp mồi 2
1.Nếp nõn tre; 2.Chiêm cũ; 3.Nếp vải; 4.Ré nước; 5.Hom râu; 6.Nếp ốc; 7.Ngoi;8. Dâu Ấn độ; 9. Nếp đèo đàng M. Maker 1kb; Gel Agarose 1%
M 2
Kết quả điện di cho thấy các băng thu đƣợc sáng , khá gọn, đồng đều nhau, đúng kích thƣớc là 828bp và không xuất hiện băng phụ. Như vậy, đoạn thứ hai của exon 1 gen OsHKT1 đã đƣợc nhân bản thành cơng.
Đoạn cịn lại của exon 1 và exon 2 được nhân bản bằng phản ứng
PCR sử dụng cặp mồi 3. Kết quả điện di sản phẩm PCR được trình bày ở
hình 25
Hình 25. Điện di sản phẩm PCR sử dụng cặp mồi 3
1.Nếp nõn tre; 2.Chiêm cũ; 3.Nếp vải; 4.Ré nước; 5.Hom râu; 6.Nếp ốc; 7.Ngoi;8. Dâu Ấn độ; 9. Nếp đèo đàng M. Maker 1kb;Gel Agarose 1%.
Điện di kiểm tra sản phẩm PCR trên gel agarose thu đƣợc các băng đúng kích thƣớc là 603bp, cũng khơng xuất hiện băng phụ, các mẫu có băng sáng rõ. Nhƣ vậy đã nhân bản thành công cả 2 đoạn exon 1 và exon 2 gen OsHKT 1.
Đoạn exon thứ 3 đƣợc nhân bản bằng phƣơng pháp PCR sử dụng cặp mồi 4. Kết quả điện di sản phẩm PCR được trình bày ở hình 26
60 3 bp
Hình 26. Điện di sản phẩm PCR sử dụng cặp mồi 4
1.Nếp nõn tre; 2.Chiêm cũ; 3.Nếp vải; 4.Ré nước; 5.Hom râu, 6.Nếp ốc; 7.Ngoi;8. Dâu Ấn độ; 9. Nếp đèo đàng M. Maker 1kb; Gel Agarose 1%.
Điện di kiểm tra sản phẩm PCR trên gel agarose thu đƣợc các băng đúng kích thƣớc là 668bp, cũng khơng xuất hiện băng phụ, các mẫu có băng sáng rõ. Như vậy, gen OsHKT1 đã được nhân bản thành công.