CHƢƠNG 2 THỰC NGHIỆM
2.6. Phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC định lƣợng Diazinon
Hình 2.9. Sơ đồ khối của thiết bị HPLC Nguyên tắc: Nguyên tắc:
Quá trình tách trong HPLC là những quá trình tổ hợp của nhiều q trình vừa có tính chất hóa học vừa có tính chất lý học. Quá trình này là những cân bằng động xảy ra ở trong cột sắc kí giữa pha tĩnh là chất rắn và pha động là chất lỏng. Nó là sự vận chuyển và phân bố của chất tan (hỗn hợp mẫu) theo từng lớp qua pha tĩnh. Trong q trình đó chất tan ln ln được phân bố lại giữa hai pha, khi pha động luôn luôn chảy qua cột với một tốc độ nhất định. Trong q trình sắc kí, chất nào bị lưu giữ mạnh nhất sẽ được rửa giải ra khỏi cột sau cùng, chất nào bị lưu giữ kém nhất sẽ được rửa giải ra trước tiên. Các detector sẽ dò nhận sự biến đổi tín hiệu điện khi có mặt chất phân tích và cho tín hiệu là pic chất trên sắc đồ. Thông thường, dựa vào thời gian lưu, có thể định tính được chất phân tích bằng cách so sánh với thời gian lưu của chất chuẩn trong cùng điều kiện phân tích.
b, Thực nghiệm:
Việc định lượng Diazinon được thực hiện trên máy Hệ thống HPLC Shimadzu 10 Avp với detector PDA Shimadzu-M10 Avp thuộc Khoa Hóa học- Đại học Khoa học tự nhiên-ĐHQGHN. Các điều kiện để định lượng Diazinon như sau:
Hệ thống HPLC Shimadzu 10 Avp với detector PDA Shimadzu-M10 Avp: - Sử dụng cột pha đảo Cadenza CD-C18 (250 x 4,6mm x 3µm)
- Pha động : 90:10 ( ACN: H2O) - Tốc độ dịng 1,20 min/ml
Hình 2.10. Hệ thống HPLC của Shimadzu c, Xây dựng đường chuẩn Diazinon c, Xây dựng đường chuẩn Diazinon
Để xác định nồng độ diazinon còn lại trong dung dịch, thí nghiệm dựng đường chuẩn diazinon trong khoảng nồng độ từ 10,13 ppm – 102,4 ppm định lượng diazinon bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao. Diazinon có cực đại hấp thụ ở bước sóng λmax = 247 nm. Nồng độ Diazinon được xác định tại bước sóng này.
Để xác định sự phụ thuộc của diện tích pic vào nồng độ dung dịch Diazinon, thí nghiệm tiến hành chạy máy HPLC các dung dịch Diazinon có nồng độ khác nhau lần lượt là 10,13; 20,33; 50,86; 79,18; 102,4 ppm và kết quả thu được trong bảng 2.1 và đồ thị đường chuẩn như hình 2.10.
Bảng 2.2.Sự phụ thuộc của diện tích pic vào nồng độ của dung dịch Diazinon
Nồng độ (ppm) 10,13 20,33 50,86 79,18 102,4
Hình 2.11. Đường chuẩn Diazinon
Nhận xét: Giá trị hồi quy R2 = 0,9975 của đường chuẩn Diazinon cho thấy đường chuẩn có độ tin cậy cao.
Từ đồ thị đường chuẩn Diazinon có phương trình đường chuẩn là: y = 7217,8x - 18335
Trong đó: y là diện tích pic
x là nồng độ dung dịch diazinon (ppm) y = 7217.8x - 18335 R² = 0.9975 0 100000 200000 300000 400000 500000 600000 700000 800000 0 20 40 60 80 100 120 Di ện t íc h Nồng độ( ppm) Phƣơng trình đƣờng chuẩn Diazinon