CHƯƠNG 2 : VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2. Phương pháp nghiên cứu
2.2.7. Phương pháp nuôi cấy tế bào ung thư trong điều kiện in vitr o
Tế bào ung thư được nuôi cấy trong điều kiện nuôi cấy cơ bản, bổ sung thêm 10% FBS và 1% kháng sinh (ampicillin và streptomycin). Trong đó bào sau khi được lấy ra từ tủ -80oC sẽ được rã đông từ từ bằng nước ấm đến nhiệt độ 37oC. Ngay sau đó pha lỗng dung dịch tế bào có chứa chất bảo quản DMSO (vì DMSO gây độc cho tế bào) với dịch ni tế bào đã pha. Tiếp đó ly tâm ống hỗn hợp ở 1000 vịng trong 5 phút. Thu lấy cặn tế bào rồi ni lên đĩa hoặc chai ni tế bào có chứa dịch nuôi. Theo dõi sự sinh trưởng và phát triển của tế bào ung thư. Xem xét kỹ hình dạng tế bào cũng như sức sống, sức tăng trưởng của tế bào. Đến khi nào tế bào phủ kín khoảng 80% bề mặt đĩa (chai) ni cấy thì mới bắt đầu cho lên đĩa 96 giếng đem đi thử nghiệm chế phẩm.
2.2.8. Phương pháp kiểm tra sự ảnh hưởng của dung dịch P lên tế bào ung thư trong điều kiện in vitro
Để chắc chắn rằng dung dịch P không ảnh hưởng đến khả năng sống sót và sinh trưởng của tế bào, dung dịch P được pha loãng với nước cho đến nồng độ 50%. Sau đó lấy 2ml dung dịch 50% P cho vào 4 giếng của hai dòng tế bào HeLa và dòng tế bào KMS-20 đã được nuôi ổn định chứa 198ml dung dịch nuôi cấy cùng tế bào. Được nồng độ dung dịch P cuối cùng ở trong mỗi giếng là 5%. Sau đó đem đĩa thử 96 giếng đi nuôi ở điều kiện 37oC, 95% O2, 5% CO2 và kiểm tra sự sinh trưởng và phát triển của tế bào sau 24h, 48h và 72h. Thí nghiệm được lặp lại 2 lần, với mỗi lần lặp lại với 4 giếng thí nghiệm.