ADN tổng số từ mô đƣợc tách chiết theo phƣơng pháp cơ bản đƣợc mô tả bởi Sambrook và cộng sự (2001) [45] đã đƣợc cải tiến cho phù hợp với điều kiện tách mô. Các bƣớc tiến hành tách chiết nhƣ sau :
1. Phá màng tế bào: Cắt nhỏ 0,1g mẫu cho vào ống eppendorf, bổ sung 0,7
ml đệm lysis và 10 µl proteinase K rồi ủ trong 8-10 giờ ở 560
C, thỉnh thoảng đảo đều ống cho đến khi mẫu tan hết.
2. Loại protein: Bổ sung 0,6 ml phenol rồi lắc đều hỗn hợp bằng máy vortex.
Ly tâm hỗn hợp với tốc độ 12000 v/p trong 15 phút ở 40C để thu dịch pha trên. Bổ sung hỗn hợp PCI (phenol : chloroform : isoamyl alcohol tỉ lệ thể tích 25 : 24 : 1) tỉ lệ 1 : 1 với thể tích dung dịch thu đƣợc. Lắc đều hồn hợp rồi ly tâm 12000 v/p trong
15 phút ở 40C để thu dịch pha trên. Lặp lại một lần nữa với hỗn hợp CI (chloroform : isoamyl alcohol tỉ lệ thể tích 24 : 1) theo tỉ lệ 1 : 1 với thể tích dung dịch thu đƣợc.
3. Tủa ADN: Bổ sung natri acetate 3M (tỉ lệ 1 : 10 so với dịch thu đƣợc) và
ethanol 100% lạnh (tỉ lệ thể tích 1 : 2 hoặc 1 : 2,5) rồi giữ lạnh qua đêm.
4. Thu tủa ADN: Ly tâm ống với tốc độ 12000 v/p trong 15 phút ở 40C để thu tủa ADN, loại dịch pha trên. Sau đó để tủa khơ hồn tồn ở nhiệt độ phịng.
5. Hòa tan tủa: Bổ sung 60 – 80 µl đệm TE, búng đều để tủa tan hồn tồn.
Lấy 10 µl mẫu, pha lỗng 10 lần bằng nƣớc khử ion vơ trùng.
6. Loại ARN: Bổ sung 2 µl RNase, ủ ở 370C trong vòng 1h30 phút. Bất hoạt enzym ở nhiệt độ 900C trong vòng 30 phút. Bảo quản trong tủ lạnh -200
C.