HPLC là chữ viết tắt 4 chữ cái đầu bằng tiếng Anh của phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (High Performance Liquid Chromatography), trước đây gọi là phương pháp sắc ký lỏng cao áp.
Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) là một dạng mở rộng của kỹ thuật sắc ký cột đi kèm với một detector nhạy để phát hiện các chất tách ra trong quá trình sắc
ký. Với những tiến bộ kỹ thuật về detetor và cột được làm từ vật liệu mịn hơn nên phải có một áp lực tác động lên cột để có được một tốc độchảy thích hợp. Phương pháp này ngày càng được sử dụng rộng rãi và phổ biến vì nhiều lý do: có độ nhạy cao, khả năng định lượng tốt, thích hợp tách các hợp chất khó bay hơi hoặc dễphân hủy nhiệt.
Phạm vi ứng dụng của phương pháp HPLC rất rộng, như phân tích các hợp chất thuốc trừ sâu, thuốc kháng sinh, các chất phụ gia thực phẩm trong lĩnh vực thực phẩm, dược phẩm, môi trường…
Nguyên lý hoạt động:
Mẫu sau khi tiêm vào cột sẽ được pha động lôi kéo qua cột. Dựa vào khả năng tương tác khác nhau giữa các chất có trong nền mẫu với pha tĩnh và pha động mà chúng được tách ra khỏi nhau và sau khi ra khỏi cột sẽ được ghi nhận bởi bộdò cụ thể.
Tiến hành
Chuẩn bịmẫu cho phân tích HPLC
Lấy 200μl dịch mẫu, thêm 400μl pha động A, 400μl pha động B đem phân tích bằng máy sắc ký lỏng hiệu cao năng (HPLC). Điều kiện tiến hành sắc kí:
- Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) với detector UV-VIS
- Pha tĩnh: Cột sắc ký Thermo-PR C18 (150 x 4.6mm), kích thước hạt 5μm
- Pha động: Dung dịch ACN : H2O = 9:1; TFA 0.1%
- Detector UV-VIS: bước sóng 254 nm
- Lưu lượng dòng: 0.5 ml/phút
- Thểtích tiêm: 20μl/ mỗi lần thí nghiệm
- Nhiệt độsắc ký: nhiệt độphòng
Chương 3: KẾT QUẢVÀ BÀN LUẬN
3.1. TINH SẠCH ĐỘC TỐ THÔ CỦA BA LOÀI ỐC CỐI BẰNG SẮC KÝLỌC GEL VÀ THỬ NGHIỆM ĐỘC TÍNH CÁC PHÂN ĐOẠN PEPTIDE