Nguyên lý hoạt động
Phân tách protein, peptide hoặc các oligonucleotide dựa trên cơ sở kích thước. Các phân tửdi chuyển qua các cột trong đó có chứa các hạt gel, chúng có thểkhếch tán vào các hạt ở mức độ nhiều hay ít. Phân tử có kích thước nhỏ sẽ đi vào các lỗ của các hạt gel, do đó sẽ di chuyển ra khỏi cột chậm hơn trong khi các phân tửcó
kích thước lớn sẽ đi vào hạt ít hơn hoặc không đi vào hạt khi đó chúng sẽ ra khỏi cột nhanh hơn. Cảtrọng lượng phân tửvà hình dạng phân tử đềuảnh hưởng đến tốc độ di chuyển của chúng khi đi qua cột. Sắc kí lọc gel có thể được dùng để xác định kích thước phân tử, phân ly các thành phần trong hỗn hợp,…
Các hạt gel là những polymer không tan nhưng có tính hydrate hóa cao, các loại gel thường dùng là: dextran, agarose, polyacrylamide, sephadex, sepharose và Bio-gel, đây là những loại gel phổbiến trên thị trường và có sẵn những hạt có lỗvới đường kính chuẩn là 100 µm.
Hình 2.6 : Nguyên lý phương pháp sắc kí lọc gel
(http://bricker.tcnj.edu/tech/BIOL311chromatography.htm)
Tiến hành sắc kí
Vật liệu:
- Cột sắc kí: d = 2,5 cm, h = 100 cm–Amersham
- Bộthu mẫu Collector Fraction 920–Amersham
kích thước lớn sẽ đi vào hạt ít hơn hoặc không đi vào hạt khi đó chúng sẽ ra khỏi cột nhanh hơn. Cảtrọng lượng phân tửvà hình dạng phân tử đềuảnh hưởng đến tốc độ di chuyển của chúng khi đi qua cột. Sắc kí lọc gel có thể được dùng để xác định kích thước phân tử, phân ly các thành phần trong hỗn hợp,…
Các hạt gel là những polymer không tan nhưng có tính hydrate hóa cao, các loại gel thường dùng là: dextran, agarose, polyacrylamide, sephadex, sepharose và Bio-gel, đây là những loại gel phổbiến trên thị trường và có sẵn những hạt có lỗvới đường kính chuẩn là 100 µm.
Hình 2.6 : Nguyên lý phương pháp sắc kí lọc gel
(http://bricker.tcnj.edu/tech/BIOL311chromatography.htm)
Tiến hành sắc kí
Vật liệu:
- Cột sắc kí: d = 2,5 cm, h = 100 cm–Amersham
- Bộthu mẫu Collector Fraction 920–Amersham
kích thước lớn sẽ đi vào hạt ít hơn hoặc không đi vào hạt khi đó chúng sẽ ra khỏi cột nhanh hơn. Cảtrọng lượng phân tửvà hình dạng phân tử đềuảnh hưởng đến tốc độ di chuyển của chúng khi đi qua cột. Sắc kí lọc gel có thể được dùng để xác định kích thước phân tử, phân ly các thành phần trong hỗn hợp,…
Các hạt gel là những polymer không tan nhưng có tính hydrate hóa cao, các loại gel thường dùng là: dextran, agarose, polyacrylamide, sephadex, sepharose và Bio-gel, đây là những loại gel phổbiến trên thị trường và có sẵn những hạt có lỗvới đường kính chuẩn là 100 µm.
Hình 2.6 : Nguyên lý phương pháp sắc kí lọc gel
(http://bricker.tcnj.edu/tech/BIOL311chromatography.htm)
Tiến hành sắc kí
Vật liệu:
- Cột sắc kí: d = 2,5 cm, h = 100 cm–Amersham
- Pump–LKB
- Gel Biogel P2–Amersham
- Acid acetic–Merck
- Tube 15–Nunc.
Tiến hành
o Chuẩn bịcột Biogel
Cân 40 g gel Biogel–P2 cho vào 200 ml nước cất khuấy đều trong 4h. Cho từ từ dung dịch chứa gel vào cột để lắng tự nhiên đến khi lượng gel đầy cột. Dùng dung môi acid acetic 1% cân bằng cột với thể tích bằng 5 lần thể tích cột, tốc độ dòng chảy 1 ml/phút.
o Tinh chế
Nạp mẫu bằng cách cho từ từ 2 ml vào cột, chờ cho mẫu thấm hoàn toàn vào gel. Cho thêm 1ml acid acetic vào cột để đưa mẫu vào hoàn toàn trong gel. Thôi mẫu: chạy mẫu bằng dung dịch acid acetic 1%, dòng chảy 1ml/phút, thu mẫu qua collector vào các tube, mỗi tube 2 ml.Đo OD280 nm các tube thu được.