STTTên hóa chất 1 HCl (36%) 2 NH3 (25%) 3 Cồn 90 độ 4 Axit boric 5 Vôi tôi 6 Bột nghệ 7 Nước cất
2.2.2. Thiết bị, dụng cụ nghiên cứu [17]Thiết bị Thiết bị
- Cân phân tích Ohaus Corporation PA413 (Mỹ)
- Tủ lạnh
- Bếp điện
- Nồi đun cách thủy
- Tủ sấy Binder (Đức )
- Máy ly tâm
Dụng cụ
- Đĩa Petri, phễu lọc, cốc có mỏ, bình nón, đũa thủy tinh, ống đong, ống nghiệm 15ml có nút đậy (ống Pyrex hoặc loại tương đương), bình định mức.
- Pipet, micro pipet.
- Cối và chày sứ, dao, kéo, kẹp inox hoặc kẹp gỗ.
- Giấy lọc, sợi len lông cừu, giấy quỳ tím.
Chú ý: Dụng cụ thí nghiệm phải đảm bảo sạch đặc biệt không được nhiễm H3BO3 hoặc Na2B4O7.
2.3. Phương pháp nghiên cứu (kỹ huật phân tích hàn the)
Hàn the được biết đến là tên dân gian và thường được gọi theo tên hóa học là natri borat hay axit boric, nên tiến hành thực nghiệm áp dụng tiêu
18
chuẩn TCVN 8895:2012 “ Thực phẩm- Xác định natri borat và axit boric- Phương pháp định tính và bán định lượng” [17].
2.3.1. Phương pháp định tính
Ngun tắc
Mẫu thực phẩm được axit hóa bằng axit clohydric, sau đó đem đun nóng trên nồi cách thủy. Axit boric (H3BO3) hoặc natri borat (Na2B4O7) được phát hiện bằng giấy nghệ. Khi có mặt axit boric hoặc natri borat thì giấy nghệ chuyển từ màu vàng sang đỏ cam, giấy nghệ này sẽ chuyển màu xanh đậm trong môi trường kiềm và chuyển lại màu đỏ hồng trong môi trường axit.
Kỹ thuật pha hóa chất
+ Cồn 80 độ: đong 89 ml cồn 90 độ rồi cho nước cất vừa đủ 100 ml.
+ Chuẩn bị giấy nghệ: Cân từ 1,5 g đến 2 g bột nghệ, cho vào bình nón dung tích 250 ml, thêm 100 ml cồn 80 độ. Lắc mạnh trong 5 phút rồi lọc qua giấy lọc vào đĩa thuỷ tinh đáy phẳng (ví dụ đĩa Petri). Nhúng giấy lọc vào dịch lọc cho thấm đều. Lấy giấy lọc ra, để khơ ở nhiệt độ phịng, sau khoảng 1 giờ cắt giấy lọc thành những dải giấy có kích thước 1 cm x 6 cm. Có thể
chuẩn bị giấy nghệ bằng nghệ tươi. Bảo quản giấy nghệ trong lọ kín, tránh ánh sáng, ẩm và CO2, SO2, NH3, NO,… Sử dụng giấy nghệ trong vòng 10 ngày sau khi chuẩn bị [17].
Cách tiến hành
+ Chuẩn bị mẫu thử:
Bước 1: Nghiền nhỏ 25 g mẫu thử trong cối sứ. Bước 2: Chuyển mẫu đã nghiền vào cốc có mỏ.
Bước 3: Đun nhẹ mẫu trên nồi cách thủy với lượng nước vừa đủ để mẫu chuyển sang dạng bán rắn hoặc lỏng.
Bước 4: Axit hóa mẫu thử bằng axit clohydric, dùng 7 ml dung dịch HCl 36% cho 100 ml mẫu thử.
Bước 5: Để lắng hoặc ly tâm để lấy phần dịch trong để phân tích.
Lưu ý: nếu mẫu chứa chất béo thì làm lạnh bằng nước đá hoặc để trong tủ lạnh rồi gạn bỏ lớp chất béo đã đơng lại. Nếu mẫu có màu dùng sợi len lơng cừu vào dung dịch để khử màu.
+ Phép thử sơ bộ: Nhúng giấy nghệ vào mẫu thử đã axit hóa cho thấm đều. Lấy ra và để khô tự nhiên.
Nếu màu của giấy nghệ chuyển từ vàng sang đỏ cam thì tiếp tục hơ giấy nghệ trên miệng lọ dung dịch amoniac sau đó hơ trên miệng lọ dung dịch axit clohydric.
Tiến hành đồng thời một mẫu trắng thay 25 g mẫu thực phẩm bằng 25 ml nước và thực hiện như trên.
+ Phép thử khẳng định:
Bước 1: Cân 25 g mẫu thử đã nghiền nhỏ. Bước 2: Kiềm hóa bằng nước vơi trong.
Bước 3: Cho bay hơi đến khô trên nồi cách thủy.
Bước 4: Nung mẫu thử đã làm khơ trong lị nung ở nhiệt độ từ 500 đến 550 độ C cho đến khi các chất hữu cơ hóa tro.
Bước 5: Để nguội, thêm 15 ml nước, dùng đũa thủy tinh khuấy đều rồi thêm từng giọt axit clohydric đến khi hỗn hợp có tính axit rõ rệt (sử dụng giấy quỳ để kiểm tra).
Bước 6: Nhúng giấy nghệ vào hỗn hợp trên và hong khô.
Đọc kết quả
Mẫu thử có chứa axit boric hoặc natri borat nếu màu của giấy nghệ chuyển từ vàng sang đỏ cam.
Khi tiếp tục hơ giấy nghệ trên hơi amoniac thì màu đỏ cam chuyển thành xanh đậm.
Và giấy chuyển lại màu hồng khi hơ giấy nghệ trên hơi axit clohydric. Giới hạn phát hiện của phương pháp là 0,001%
20
2.3.2. Phương pháp bán định lượng
Nguyên tắc:
Dung dịch mẫu thử được axit hóa bằng axit clohydric. So sánh màu của giấy nghệ được nhúng vào dung dịch thử với giấy được nhúng vào dung dịch chuẩn để ước lượng khoảng giá trị hàm lượng axit boric (hoặc natri borat quy về axit boric) có trong mẫu thử.
Pha chuẩn gốc
Dung dịch axit boric chuẩn: cân 1 g axit boric chính xác đến 0,1 mg, cho vào bình định mức dung tích 100 ml, thêm nước đến vạch. Lắc cho axit boric tan hết (có thể đun nóng nhẹ trên nồi cách thủy cho tan hoàn toàn).
Chuẩn bị mẫu thử và dãy dung dịch
chuẩn + Chuẩn bị mẫu thử:
Bước 1: Nghiền nhỏ mẫu thử trong cối sứ.
Bước 2: Cân chính xác 25 g mẫu đã nghiền, cho vào bình nón dung tích 125 ml chứa 50 ml nước.
Bước 3: Dùng đũa thủy tinh khuấy trộn mẫu.
Bước 4: Đậy bình nón bằng mặt kính đồng hồ đun mẫu thử sơi trên nồi cách thủy.
Bước 5: Làm nguội bằng cách cho mẫu vào cốc có mỏ dung tích thích hợp và bỏ vào tủ lạnh cho đến khi chất béo đông lại (khoảng 30 phút).
Bước 6: Loại bỏ chất béo đông đặc và lọc mẫu thử. + Chuẩn bị dãy dung dịch chuẩn:
Dùng pipet lấy lần lượt 0,00; 0,05; 0,10; 0,20; 0,50; 0,75; 1,00; 2,50; 5,00 ml dung dịch axit boric chuẩn, cho vào ống nghiệm dung tích 15 ml. Pha loãng dung dịch bằng nước đến 10 ml và thêm 0,7 ml dung dịch axit clohydric. Đậy nút ống nghiệm để tránh bay hơi. Dung dịch màu chuẩn đã pha dùng trong 6 tháng khi bảo quản kín trong ống nghiệm.
+ Xác định:
21
Dùng pipet lấy 10 ml dịch lọc của mẫu thử đã chuẩn bị cho vào ống nghiệm 15 ml, thêm 0,7 ml dung dịch axit clohydric. Đậy nút ống nghiệm và trộn đều.
Dùng giấy nghệ đã đánh dấu kí hiệu một đầu là T (mẫu thử) nhúng đầu không đánh dấu vào dịch thử thu được ( khoảng 1/2 chiều dài mẫu giấy) dùng kẹp lấy ra để khơ trong khơng khí.
Tương tự dùng những tờ giấy nghệ được đánh số theo dãy dung dịch chuẩn (có số tương ứng) sau đó để khơ ngồi khơng khí.
Đọc kết quả sau 1 giờ nhưng khơng q 2 giờ so màu của các dải giấy nghệ bằng cách đặt giấy nghệ được nhúng dung dịch thử vào giữa từng cặp giấy chuẩn trên nền trắng như là giấy trắng, dưới ánh sáng tự nhiên là tốt nhất để nhận biết.
Sử dụng các dải giấy chuẩn mới cho mỗi mẫu thử.
Nếu màu của giấy thử nằm ngoài dải màu của dãy chuẩn thì pha lỗng dịch lọc: ví dụ dùng 5 ml dịch lọc, 5 ml nước, 0,7 ml dung dịch axit clohydric và nhân kết quả cuối cùng với 2.
Biểu thị kết quả
Với thể tích dịch lọc 10 ml (ứng với 5 g mẫu thử) thì các dung dịch màu chuẩn đã pha ứng với hàm lượng axit boric trong mẫu thử lần lượt là 0,00; 0,01; 0,02; 0,04; 0,10; 0,15; 0,20; 0,25; 1,00 % khối lượng.