Chƣơng 3 : NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.4.4.Phƣơng pháp giám định đặc tính sinh hóa
3.4. Phƣơng pháp nghiên cứu
3.4.4.Phƣơng pháp giám định đặc tính sinh hóa
* h ơng ph p x c định mộ số đặc ính sinh vậ , ho h c của c c chủng vi huẩn Streptococcus suis phân lập đ ợc bằng hệ hống A I 20 S ep
Cách tiến hành nhƣ sau: mỗi chủng vi khuẩn cần kiểm tra đƣợc cấy thành một lớp dày đặc trên mặt đĩa thạch máu Columbia, nuôi cấy ở 37oC 24 giờ (5% CO2). Dùng tăm bông vô trùng thu hoạch vi khuẩn từ đĩa thạch, rồi hòa tan vào 2 ml nƣớc cất vô trùng để đạt đƣợc độ đục tƣơng đƣơng với ống số 4 của dãy so độ đục chuẩn McFarland. Trong khay nhựa đã có chứa các loại thuốc thử, tiến hành nhỏ khoảng 100l huyễn dịch này vào mỗi lỗ đối với các phản ứng từ VP đến ADH. Phần huyễn dịch còn lại đƣợc trộn đều với 1 ampule môi trƣờng API GP có sẵn trong bộ kit thử và nhỏ vào các lỗ còn lại, từ ADH đến GLYG. Toàn bộ khay nhựa có chứa các phản ứng đƣợc đặt vào một giá nhựa có chứa khoảng 5ml nƣớc cất bên dƣới để làm ẩm và đƣợc ủ ở tủ ấm 37oC. Sau 4 giờ, tiến hành nhỏ các thuốc thử thích hợp: VP 1 và VP 2 đối với phản ứng VP, NIN đối với phản ứng HIP, ZYM A và ZYM B đối với các phản ứng PYRA, GAL, GUR, GAL, PAL và LAP, rồi tiến hành đọc kết quả sau 10 phút. Đối với một số phản ứng, nếu kết quả chƣa rõ ràng thì có thể đọc lại sau 24 giờ.
Cách đọc kết quả: Các phản ứng đƣợc đánh giá là dƣơng tính hay âm tính dựa vào một bảng so màu sẵn đƣợc cung cấp bởi nhà sản xuất, đƣợc tính điểm và mã
21
hóa bằng các chữ số. Kết quả xác định của mỗi chủng vi khuẩn cuối cùng sẽ đƣợc hiển thị bằng một dãy số gồm 7 chữ số. Tiến hành tra bảng nhận biết để có thể kết luận là chủng vi khuẩn kiểm tra thuộc loại vi khuẩn nào.
Hình 3.2 : Hệ thống API 20 Strep