* Các thiết bị khác
- Cân phân tích (độ chính xác 0,1mg) - Tủ sấy
- Máy cất nước khử ion - Thiết bị Votexer
- Thiết bị ly tâm Universal 320 (Hittich) - Bể siêu âm: Model S100H, hãng ELMA, Đức - Bộ chiết pha rắn: Model VM-12, hãng Agela, Mỹ - Bộ cơ khí Nito: Model DBG-002, hãng MRC Ltd, Israel
- Bộ ly tâm chân không: Model miVac Quattro, hãng SP Scientific, Mỹ
2.1.1.2. Dụng cụ
- Vial loại 2 ml
- Pipetman các loại từ 0-1000 µl và đầu típ tương ứng - Các bình định mức: 25, 50, 100ml
- Ống falcon 15, 50ml
- Các dụng cụ thông thường khác của phịng thí nghiệm
2.1.2. Hóa chất 2.1.2.1. Chất chuẩn 2.1.2.1. Chất chuẩn
- Hóa chất OCPs chuẩn 10 mg/L (10 ppm) là hỗn hợp Pesticide-mix 19 chuẩn dùng cho các phép đo sắc ký khí. Hỗn hợp chuần bao gồm: Alpha- HCH, Beta-HCH, Gamma-HCH, Delta-HCH, Heptachlor, Aldrin, Chlordane cis, α-Endosulfan, Chlordane trans, pp' DDE, Dieldrin, Endrin, β- Endosulfane, pp' DDD, Endrin Aldehyde, Endosulfane Sulfate, Endrin Keton, Methoxychlor. Dung dịch được bảo quản ở -20oC
2.1.2.2. Hóa chất
- N-hexan (Merck, Đức) - Toluene (Merck, Đức) - Axit axetic (Merck, Đức)
- MgSO4 khan, NaCl (Merck, Đức)
- Chất hấp phụ PSA (Primary secondary amine) (Agilent, Mỹ) - Chất hấp phụ C18 (Agilent, Mỹ)
2.1.2.3. Chuẩn bị dung dịch chuẩn
Dung dịch chuẩn hỗn hợp làm việc nồng độ 1 mg/L: Lấy chính xác 1 mL dung dịch chuẩn hỗn hợp 10 mg/L và định mức 10 mL với dung môi n- hexan. Dung dịch được bảo quản ở -20oC.
Dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp 1, 2, 5, 10, 20, 50, 100, 200 µg/L được pha từ dung dịch chuẩn hỗn hợp 1 mg/L trong dung môi n-hexan. Các dung dịch này chỉ được pha trước khi sử dụng.
2.1.2.4. Chuẩn bị mẫu chuẩn
- Mẫu dung dịch chuẩn: được chuẩn bị từ dung dịch chuẩn hỗn hợp làm việc và được sử dụng cho quá trình so sánh đánh giá hiệu suất thu hồi cũng như khảo sát các điều kiện chạy máy GC-MS/MS.
- Mẫu trắng: là mẫu gạo được xác định khơng có HCBVTV. Mẫu được làm khơ tự nhiên tại nhiệt độ phịng, nghiền và cho qua rây 2mm. Mẫu được bảo quản tại 4oC và được dùng làm nền cho các khảo sát quá trình chiết tách, làm sạch trên nền mẫu thật.
- Mẫu chuẩn trên nền trắng là mẫu được pha từ dung dịch chuẩn và dịch chiết của mẫu trắng theo quy trình xử lý mẫu dự kiến.
2.2. PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM
2.2.1. Tối ưu điều kiện phân tích trên hệ GC-MS/MS
Các nghiên cứu, khảo sát lựa chọn điều kiện vận hành thiết bị GC- MS/MS gồm:
- Nhiệt độ cổng bơm mẫu và tốc độ bơm mẫu, - Thể tích bơm mẫu và tốc độ khí mang
- Chương trình nhiệt độ
- Lựa chọn mảnh phân tách định tính và định lượng
Trong các khảo sát này, dung dịch chuẩn sẽ được đưa vào thiết bị GC- MS/MS với các điều kiện khảo sát khác nhau và từ đó lựa chọn ra điều kiện phù hợp nhất cho xây dựng qui trình phân tích.
2.2.2. Tối ưu hóa quy trình xử lý mẫu
Tối ưu hóa quy trình xử lý mẫu tập trung vào khả năng thu được tối đa chất phân tích ở dịch chiết cuối cùng, được thể hiện qua thông số độ thu hồi của chất phân tích. Để đạt mục đích trên, nghiên cứu tập trung tối ưu bốn thơng số của quy trình gồm: dung mơi chiết, q trình bay hơi dung mơi, loại chất hấp phụ được sử dụng ở bước làm sạch và thể tích dung mơi rửa giải. Trong q trình xử lý mẫu, có khả năng cao xuất hiện các chất được chiết đồng thời với chất phân tích, tạo ra ảnh hưởng nền làm tăng hoặc giảm tín hiệu của OCPs ở hệ thống khối phổ. Để giảm thiểu ảnh hưởng nền đến kết quả khảo sát điều kiện xử lý mẫu, độ thu hồi được tính theo hiệu suất phần trăm (%) giữa tín hiệu từ mẫu khảo sát trên tín hiệu mẫu chuẩn trên nền trắng. Mẫu khảo sát là mẫu được thêm chuẩn trước khi thực hiện quy trình xử lý mẫu theo thông số cần khảo sát. Mẫu chuẩn trên nền trắng là mẫu được pha từ dung dịch chuẩn và dịch chiết của mẫu trắng gạo theo quy trình xử lý mẫu dự kiến.
2.2.2.1. Dự kiến quy trình xử lý mẫu
Để giảm thiểu hiệu ứng nền và tăng hiệu quả chiết thay vì kết hợp chiết xuất QuEChERS và làm sạch d-SPE thông thường, tôi lựa chọn SPE cho bước làm sạch dịch chiết. Dựa trên nghiên cứu xác định hóa chất BVTV trong chè của Lý Tuấn Kiệt và cơng sự [30], quy trình xử lý mẫu dự kiến xác định OCPs trên nền mẫu gạo như sau :
Bước 1. Cân 2 g mẫu gạo cho vào ống Falcon 50 mL.
Bước 2. Thêm 5ml nước deion và 10 mL ACN (1% axit axetic) và vào ống Falcon 50 mL. Lắc vortex trong 1 phút và lắc 30 phút.
Thêm muối EN 15662 QuEChERS (1g NaCl, 4 g MgSO4, 1g Na3Citrate, 0,5g Na2HCitrate)
Lắc vortex trong 1 phút.
Bước 3. Lấy ống Falcon ly tâm trong 10 phút với tốc độ 4500 vòng/phút.
Bước 4. Hút 5 mL dung dịch (lớp dung mơi phía trên) và cho đi qua cột được chiết pha rắn SPE để làm sạch
Bước 5. Rửa giải bằng 20ml ACN-Toluenen (3:1, v/v). Thu thập dung dịch chiết và dung dịch rửa giải
Bước 6. Ly tâm chân không dung dịch đến ~5 mL, sau đó làm khơ dưới dịng khí N2 ở nhiệt độ thấp. Hòa tan cắn trong 1 mL n-hexan rồi đem phân tích bằng GC-MS/MS.