14
Nguyên t逸c: Trích ly b茨ng dung môi siêu t噂i h衣n là m瓜t quá trình tách m瓜t hay nhi隠u ch医t t瑛 m瓜t h厩n h嬰p, s穎 d映pi"n逢w"ej医t siêu t噂i h衣n làm dung môi trích ly. H厩n h嬰p ban 8亥w"vj逢運ng 荏 d衣ng r逸p."pj逢pi"e pi"e„"mjk"荏 d衣ng l臼ng.
⇒w"8kあm:
ろ Ho衣t ch医t vjw"8逢嬰c e„"8瓜 tinh khi院t cao;
ろ Hi羽u su医v"vt ej"x "8瓜 ch丑n l丑c cao;
ろ Dung môi s穎 d映ng thân thi羽n v噂k"o»k"vt逢運ng và d宇 dàng thu h欝i;
ろ Ho衣t tính sinh h丑c c栄a s違n ph育m ly vt ej"8逢嬰c b違o toàn.
Pj⇔ぢe"8kあm:
ろ Ejk"rj "ecq"j挨p"x噂i eƒe"rj逢挨pi"rjƒr"vt‒p=
ろ M厩i lo衣k"n逢w"ej医v"e„"8i吋m t噂i h衣n khác nhau.
D詠a trên nh英pi"逢w."pj逢嬰e"8k吋m c栄a t瑛pi"rj逢挨pi"rjƒr"荏vt‒p."rj逢挨pi"rjƒr"vt ej"n{" b茨ng dung môi CO2 siêu t噂i h衣n có nh英pi"逢w"th院."8逢嬰c nghiên c泳w"x "8逢嬰e"8隠 ngh鵜 s穎 d映ng trong nhi隠w"n pj"x詠c [27, 28].
1.2.4.5. Hう thぐng trích ly bｊng CO2 siêu tずi hＴn
Vjk院v"d鵜"vt ej"n{"ej pj"8逢嬰e"vj吋"jk羽p"pj逢"j·pj"3032c0"A欝pi"fwpi"o»k"8逢嬰e"d鰻"uwpi" x q"d·pj"ejk院v"d茨pi"j羽"vj嘘pi"d挨o"8欝pi"fwpi"o»k0"èr"uw医v"x壱p"j pj"320222"ruk0"N逢w" n逢嬰pi"d挨o"e„"vj吋"8k隠w"ej雨pj"n‒p"8院p"32"oN1rj¿v"*v嘘k"8c"34"oN1rj¿v+"vj吋"jk羽p"荏"j·pj" 1.10d0"D瓜"8k隠w"mjk吋p"xk"z穎"n#<"hk吋p"vj鵜"vt‒p"o p"j·pj"e違o"泳pi"ejq"vj医{ eƒe"vj»pi"u嘘" pjk羽v"8瓜"x "ƒr"uw医v"x壱p"j pj0"J·pj"3032e"vj吋"jk羽p"o p"j·pj"8k隠w"mjk吋p"e栄c"vjk院v"d鵜"EQ2 uk‒w"v噂k"j衣p0"Mj "EQ2 8逢嬰e"n o"n衣pj"d茨pi"vjk院v"d鵜"n o"n衣pj0"Pjk羽v"8瓜"n o"xk羽e trong mjq違piv瑛"-32"8院p"-40̇E0"N逢w"n逢嬰pi<":"N1rj¿v0"E»pi"uw医v"n o"n衣pj<"8:2"DVW1ik運0"J羽" vj嘘pi"n o"n衣pj"8逢嬰e"vj吋"jk羽p"荏"j·pj"3032d.
15
Hình 1.10: *c+"Vjk院v"d鵜"ej pj."*d+"d挨o"8欝pi"fwpi"o»k."*e+"d瓜"8k隠w"mjk吋p"x " *f+"j羽"vj嘘pi"n o"n衣pj
Tình hình nghiên c泳u
Vtqpi"p⇔ずc
P<o"4237."vjgq"pijk‒p"e泳u c栄c"A衣i h丑c C亥p"Vj挨"x隠 t嘘k"逢w"j„c"swƒ"vt·pj"vt ej"n{" polysaccharide (PS) và tannin t瑛 n医m linh chi 8臼, k院t lu壱n khi nhi羽v"8瓜 trích ly th医r"j挨p" 100oC yêu c亥u th運k"ikcp"vt ej"n{"f k"j挨p"8吋 có th吋 8衣v"8逢嬰c giá tr鵜 j o"n逢嬰ng PS và tannin t嘘k"逢w0"Vw{"pjk‒p."mjk"v<pi"pjk羽v"8瓜 ecq"j挨p"322oC và th運i gian trích ly ng逸n pj逢pi"x磯p"8違m b違q"8逢嬰c hi羽u su医t trích t嘘k"逢w."e映 th吋 荏 nhi羽v"8瓜 130oC và th運i gian vt ej"n{"52"rj¿v"ejq"j o"n逢嬰ng PS cao nh医t (684,10 ± 14,50 mg/L) [29].
P<o"4237."pijk‒p"e泳u c栄a Vt逢運ng A衣i h丑c Công nghi羽p Thành ph嘘 H欝 Chí Minh 8«"vk院n hành trích ly PS t瑛 n医m linh chi b茨pi"rj逢挨pi pháp có h厩 tr嬰 gp¦{og"8吋 t嘘i 逢w hóa quy trình. Thí nghi羽m 8逢嬰c ti院n hành theo thi院t k院 t鰻ng h嬰p trung tâm. K院t qu違 nghiên c泳u 8« ch雨 ra r茨ng rj逢挨pi pháp enzyme mang l衣i hi羽u su医t trích ly cao nh医t 4,37% so v噂i các rj逢挨pi pháp khác. Bên c衣nh 8„. nhóm nghiên c泳u e pi8« kh違o sát hi羽u qu違 trích ly khi k院t h嬰p c栄a c違 ba rj逢挨pi pháp h厩 tr嬰 là siêu âm, vi sóng và enzyme, cho th医y r茨ng hi羽u qu違 trích ly t嘘t nh医t 5,24% [30].
Piq k"p⇔ずc
P<o"422;."pj„o"pijk‒p"e泳u c栄a Trung Qu嘘e"x "A泳e"8«"vt ej"ny polysaccharide t瑛 bào t穎 n医m linh chi b茨ng k悦 thu壱t CO2 siêu t噂i h衣n. Hi羽u qu違 thu nh壱n polysaccharide là 2,98 % t衣k"8i隠u ki羽n t嘘k"逢w"áp su医t 35 MPa, nhi羽v"8瓜 25oC, th運i gian 4 gi運x "n逢w"n逢嬰ng CO2 là 10 kg/h [31].
16
P<o"4237."pj„o"pijk‒p"e泳u thu瓜e"vt逢運pi"A衣i h丑c Nagoya, Nh壱v"8« ti院n hành thu nh壱n d-glucan t瑛 n医m linh chi b茨pi"rj逢挨pi"rjƒr"p逢噂c nóng s穎 d映ng áp su医t cao. 謂nh j逢荏ng c栄a các y院u t嘘 nhi羽v"8瓜, t嘘e"8瓜 dòng CO2 và t益 l羽 dung môi: nguyên li羽w"8院n hàm n逢嬰ng d-D-inwecp"8逢嬰c kh違o sát theo mô hình Box-Dgjpmgp0"Ai隠u ki羽n trích ly cho hàm n逢嬰ng d-glucan cao nh医t (64,9 ± 0,8 %) là t衣i nhi羽v"8瓜 trích ly 37:üE."n逢w"n逢嬰ng CO2 là 1,3 mL/phút và t益 l羽 dung môi: nguyên li羽u là 60 mL/g.
Qua các nghiên c泳w"vtqpi"x "piq k"p逢噂e"8«"e„"pjk隠u công trình nghiên c泳u v隠 n医m nkpj"ejk"e pi"pj逢"eƒe"j嬰p ch医t có trong n医m. Tuy nhiên, nghiên c泳u v隠8k隠u ki羽n trích ly b茨ng k悦 thu壱t CO2 siêu t噂i h衣n, t嘘k"逢w"jqƒ"8k隠u ki羽p"vt ej"n{"x "8ƒpj"ikƒ"jq衣t tính sinh h丑c c栄a polysaccharide v磯p"ej逢c"e„ nhi隠u công b嘘0"Fq"8„."8隠 tài này nghiên c泳u trích ly ho衣t ch医v"x "8逢c"tc"sw{"vt·pj"vt ej"n{"d茨ng k悦 thu壱t CO2 siêu t噂i h衣n v噂i hi羽u su医t trích ly cao.
M映c tiêu, n瓜k"fwpi."rj逢挨pi"rjƒr"pijk‒p"e泳u, tính m噂k"x "8„pi"i„r"e栄a lu壱n x<p
Mつc tiêu nghiên cとu
1.4.1.1. Mつc tiêu tごng quát
Trích ly thành công ho衣t ch医t polysaccharide t瑛 n医m linh chi b茨ng k悦 thu壱v"n逢w"ej医t siêu t噂i h衣n và kh鰯pi"8鵜nh ho衣t tính sinh h丑c c栄a cao trích.
1.4.1.2. Mつc tiêu cつ thあ
- A逢c"tc"8k隠u ki羽n trích ly phù h嬰r"8吋 8衣v"8逢嬰e"j o"n逢嬰ng polysaccharide cao nh医t. - Kh鰯pi"8鵜nh ho衣t tính sinh h丑c c栄a s違n ph育m ly trích vj»pi"swc"8ƒpj"ikƒ"jq衣t tính:
kháng oxy hoá, 泳c ch院 t院d q"wpi"vj逢."mjƒpi"mjw育n và 泳c ch院 enzyme c- glucosidase.
Nじi dung
- N瓜i dung 1: A鵜nh danh n医m linh chi.
- N瓜i dung 2: Trích ly polysaccharide t瑛 n医m linh chi b茨ng k悦 thu壱t CO2 siêu t噂i h衣n; 8欝ng th運i kh違o sát 違pj"j逢荏ng c栄a các thông s嘘 v壱n hành h羽 th嘘ng 8院p"j o"n逢嬰ng polysaccharide vjw"8逢嬰c. Ti院p"j pj"8鵜pj"n逢嬰ng polysaccharide t鰻ng b茨ng UV-vis. - N瓜i dung 3: Phân tích c医u trúc nguyên li羽w"vt逢噂c và sau khi trích ly
- N瓜i dung 4: Th穎 nghi羽m ho衣t tính sinh h丑c c栄a ecq"vt ej"vj»pi"swc"8ƒpj"ikƒ"mj違 p<pi"mjƒpi"qz{"jqƒ, kháng khu育n và 泳c ch院 enzyme c- glucosidase.
17
Rj⇔￢pi"rjƒr"pijk‒p"eとu
1.4.3.1. Aおnh danh nＸm linh chi bｊng rj⇔￢pi"rjƒr"ikＶi trình tば Sanger
Nguyên t逸c: Rj逢挨pi pháp gi違i trình t詠 Sanger d詠a trên k悦 thu壱t ph鰻 bi院n là k院t thúc chu厩i (chain-termination) b茨ng vi羽c s穎 d映ng các deoxypwengqvkfg"8«"d鵜 ch雨nh s穎a làm m医t nhóm hydroxyl 荏 8亥w"5Ó"e栄a phân t穎8逢運pi0"Pj„o"5Ó-QJ"8„pi"xck"vt”"ejq"rjfir" g逸n thêm m瓜t nucleotide m噂i vào chu厩i. Enzymepolymerase xúc tác ph違n 泳ng g逸n các nucleotide (dNTP) vào m衣ej"8挨p"e栄c"FPC"8吋 kéo dài m衣ch 荏 v鵜 vt "5Ó- OH và d瑛ng l衣i n院u g逸n các dideoxyribonucleotide (ddNTP) vào chu厩i. Trong m瓜t ph違n 泳ng ch泳a c違 dNTP và ddNTP nên sau ph違n 泳ng t鰻ng h嬰r."j·pj"vj pj"eƒe"8q衣p"FPC"e„"8瓜 dài khác nhau do ddNTP g逸n ng磯u nhiên làm d瑛ng ph違n 泳ng. D詠a vào s詠 sai khác v隠8瓜 dài các 8q衣n DNA hi吋n th鵜 trên b違p"ign"ucw"8k羽p"fk"8吋zƒe"8鵜nh trình t詠 trong gene.
永ng d映ng: Phân tích trình t詠 gen.
1.4.3.2. Rj⇔￢pi pháp khＶo sát sばＶpj"j⇔ぞng cてa các yｘu tぐ trích ly a) KhＶo sát sばＶpj"j⇔ぞng cてa tなng yｘu tぐ
Nghiên c泳u này s胤 ti院n hành kh違o sát 4 y院u t嘘 có kh違p<pi"違pj"8院n quá trình trích n{."8„"n "v益 l羽 ethanol: nguyên li羽u, nhi羽t 8瓜, th運i gian và áp su医t. Kh違q"uƒv"8逢嬰c th詠c hi羽p"vjgq"rj逢挨pi"rjƒr"nw¤p"rjk‒p"v瑛ng bi院n và m厩i y院u t嘘 8逢嬰c kh違o sát theo 5 m泳c v噂i hàm m映e"vk‒w"n "j o"n逢嬰ng polysaccharide, m厩i m泳e"8逢嬰c th詠c hi羽n ba l亥n l医y giá tr鵜 trung bình.
Sau quá trình kh違o sát, các y院u t嘘違pj"j逢荏ng nhi隠w"8院n j o"n逢嬰ng polysaccharide 8逢嬰c ch丑n l丑e"x "zƒe"8鵜nh kho違ng bi院n thiên c栄a các y院u t嘘 8吋 th詠c hi羽n kh違o sát 違nh j逢荏pi"8欝ng th運i.
b) Ｕpj"j⇔ぞng 8げng thぜi cてa các yｘu tぐ
Sau khi l詠a ch丑n t雨 l羽 ethanol: nguyên li羽u và kho違ng bi院n thiên phù h嬰p, ti院n hành kh違o sát 違pj"j逢荏pi"8欝ng th運i các y院u t嘘 áp su医t, nhi羽v"8瓜 và th運i gian b茨pi"rj逢挨pi" pháp b隠 m員v"8ƒr"泳ng (Response Surface Methodology Î RSM). Rj逢挨pi"rjƒr"TUO"dcq" g欝o"eƒe"m "vjw壱t toán h丑c và th嘘pi"m‒"f́pi"8吋 kh違o sát m嘘i quan h羽 gi英a hàm m映c tiêu và các y院u t嘘 違pj"j逢荏ng d詠a trên s詠 phù h嬰p c栄a mô hình thi院t k院 và d英 li羽u th詠c nghi羽m0"Rj逢挨pi"rjƒr"p {"8逢嬰c áp d映pi"ucw"mjk"8«"zƒe"8鵜nh các y院u t嘘 quan tr丑ng có th吋 ki吋o"uqƒv"8逢嬰c và zƒe"8鵜nh giá tr鵜 các y院u t嘘8吋 có k院t qu違 t嘘k"逢w0"Rj逢挨pi"rjƒr"TUO" v噂k"逢w"8k吋m kh嘘k"n逢嬰ng thí nghi羽m ít, m丑i h羽 s嘘 h欝k"sw{"8逢嬰e"zƒe"8鵜pj"8瓜c l壱p v噂i nhau, v·o"eƒe"8k隠u ki羽n ti院n hành th臼c"o«p"eƒe"8員e"8k吋m c栄a quá trình và zƒe"8鵜pj"8逢嬰e"8k吋m
18
c詠c tr鵜. Pj逢挨pi"rjƒr"v·o"e詠c tr鵜8逢嬰c phát tri吋n t瑛 th詠c nghi羽m mô ph臼ng, nhi羽m v映 là xây d詠ng mô hình tính toán th詠c nghi羽o."vjgq"8„"zƒe"8鵜nh b瓜 k院t h嬰p giá tr鵜 eƒe"8k隠u ki羽n mà t衣k"8„"j o"o映e"vk‒w"8衣t giá tr鵜 l噂n nh医t.
Pj逢挨pi"vt·pj"j欝i quy c栄a RSM có d衣ng t鰻pi"swƒv"pj逢"vj吋 hi羽n 荏rj逢挨pi"vt·pj"*304).
" 噺 布 ̈辿®辿 樽 辿 髪 布 ̈辿棚®辿®棚 津 沈猪珍 髪 布 ̈辿棚谷®辿®棚®谷 津 沈猪珍猪賃 髪" 髪 布 ̈辿辿®辿態髪 橋" 樽 辿 (1.2) vtqpi"8„: y là hàm m映c tiêu c栄a quá trình nghiên c泳u; bi là h羽 s嘘 h欝i quy b壱c m瓜t mô t違 違pj"j逢荏ng c栄a các nhân t嘘 xi lên hàm m映c tiêu; xi là y院u t嘘 違pj"j逢荏ng lên hàm m映c tiêu; bij là h羽 s嘘 h欝i quy b壱c m瓜t mô t違違pj"j逢荏pi"8欝ng th運i c栄a hai nhân t嘘 xi, xj; bijk là h羽 s嘘 h欝i quy b壱c m瓜t mô t違 違pj"j逢荏pi"8欝ng th運i c栄a ba nhân t嘘 xi, xj, xk; bii là h羽 s嘘 h欝i quy b壱c hai, mô t違違pj"j逢荏ng b壱c hai c栄a nhân t嘘 xi lên k院t qu違 th詠c nghi羽m.
Trong lu壱p"x<p"này, tác gi違 s穎 d映ng rj逢挨pi"rjƒr"RSM theo mô hình Box Î Behnken. V·"8„"n "o瓜t thi院t k院e„" v"8k吋m m磯u và ch雨 8”k"j臼i ba c医r"8瓜 cho m厩i y院u t嘘."vtqpi"8„." các thi院t l壱r"n "&"3."2."-3"pj逢"vt·pj"d {"荏 hình 1.11.