Mật độ tinh trùng (TT/mL) Số lượng DFI (%) P-values
< 15.106 45 (29,8%) 26,66 ± 18,77
0,008
≥ 15. 106 106 (70,2%) 19,43 ± 13,46
Giữa hai nhóm mật độ và mức độ tổn thương DNA của tinh trùng, một mối liên hệ có ý nghĩa thống kê được xác định với giá trị p = 0,008 và có mối tương quan nghịch với hệ số tương quan r = - 0,26, p = 0,02 được tìm thấy (Hình 3.5). Cụ thể, nhóm bệnh nhân xuất tinh có mật độ tinh trùng < 15.106 (TT/mL) (mật độ tinh trùng thấp dưới ngưỡng cho phép) có 45 bệnh nhân và giá trị DFI trung bình khá cao là 26,66 ± 18,77%. Nhóm bệnh nhân xuất tinh có mật độ tinh trùng ≥ 15. 106 (TT/mL) có 106 bệnh nhân (chiếm 70,2%) trong tổng số 151 bệnh nhân được nghiên cứu có giá trị phân mảnh DNA tinh trùng trung bình là 19,43 ± 13,46%.
Hình 3.5. Mối liên hệ giữa mức độ phân mảnh DNA với mật độ tinh trùng
Mặt khác, mật độ và tổng số tinh trùng trong một lần xuất tinh sẽ đánh giá đươc khả năng sản sinh tinh trùng của tinh hoàn cũng như sự thông suốt của ống dẫn tinh và mật độ tinh trùng có liên quan quan nhiều đến kết quả có thai của bệnh nhân hay cơ sở để tiên lượng khả năng có thai [75]. Điều này thể hiện rằng, khi quá trình sinh tinh hoặc ống dẫn tinh có vấn đề, đã dẫn đến việc sản xuất tinh trùng không được diễn ra bình thường và mật độ thấp thì tinh trùng sẽ có mức độ phân mảnh cao như trong nghiên cứu của chúng tôi. Sự phân mảnh DNA tinh trùng cũng có thể bị gây ra trong quá trình sinh tinh, chính vì vậy, đã có nhiều nghiên cứu đánh giá về mối liên hệ giữa hai yếu tố này.
Trong một nghiên cứu của Zhonghua và cộng sự (2008) đã sử dụng phương pháp SCD để phân tích mức độ phân mảnh của tinh trùng và chỉ ra chúng có mối liên hệ với mật độ của tinh trùng với p < 0,01 [116]. Tuy nhiên, kết quả nghiên cứu của chúng tôi phù hợp với một nghiên cứu gần đây của Salah Elbashir (2018) trên 182 trường hợp đã chỉ ra rằng không có mối liên hệ nào giữa mức độ phân mảnh với mật độ của tinh trùng (T test, p = 0,181) [95], Sivanarayana và cộng sự (2014) [103], Lê Minh Tâm và cộng sự (2019) [2].
3.3.3.5. Mối liên hệ giữa mức độ phân mảnh DNA với độ di động của tinh trùng
Để đánh giá mối liên hệ giữa độ di động của tinh trùng với mức độ phân mảnh DNA, độ di động của tinh trùng được chia thành 2 nhóm, thể hiện ở bảng 3.12.
Bảng 3.12. Mối liên hệ giữa mức độ phân mảnh DNA với độ di động của
tinh trùng
Di động Số lượng DFI (%) P-values
PR + NP ≥ 40% 138 (91,39%) 20,30 ± 13,66
0,001 PR + NP < 40% 13 (8,61%) 35,24 ± 25,73
Dựa theo số lượng được thống kê ở trên, nhóm có tinh trùng di động tiến tới PR + NP ≥ 40% có 138 bệnh nhân, chiếm 91,39%, gần như toàn bộ số lượng bệnh nhân trong tổng số đối tượng được nghiên cứu. Cũng trong nhóm này, chỉ số phân mảnh DNA trung bình là 20,30 ± 13,66%. Nhóm còn lại có 13 bệnh nhân và có giá trị DFI trung bình là 35,24 ± 25,73%. Mối liên hệ giữa hai nhóm về độ di động tinh trùng với mức độ phân mảnh DNA tinh trùng có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê với giá trị p = 0,001.
Khi đánh giá mối tương quan giữa DFI và độ di động của tinh trùng trong nghiên cứu này, một mối tương quan nghịch được chỉ ra với hệ số tương quan r = - 0,29 và p < 0,001(Hình 3.6). Điều này cũng có nghĩa rằng, tinh trùng có độ di động càng thấp (PR + NP < 40%) có chỉ số phân mảnh DNA càng cao.
Hình 3.6. Mối liên hệ giữa mức độ phân mảnh DNA với độ di động của
tinh trùng
Kết quả này cũng phù hợp với một số nghiên cứu của các tác giả trước đây như Sivanarayana và cộng sự (2014) chỉ ra rằng tinh trùng có phân mảnh DNA cao tương quan nghịch với các thông số tinh dịch: mật độ, khả năng vận động [103]. Muriel và cộng sự (2006) chỉ ra mối tương quan nghịch giữa tổn thương DNA của tinh trùng với độ di động của tinh trùng [85]. Mối tương quan nghịch giữa độ di động và DFI của tinh trùng cũng được tìm thấy trong nghiên cứu của Lê Minh Tâm và cộng sự (2019) [2].
Ngược lại, một số nghiên cứu khác lại không tìm thấy mối liên hệ có ý nghĩa thống kê giữa các thông số tinh dịch thông thường và mức độ phân mảnh DNA của tinh trùng. Ngay cả ở những người đàn ông mắc bệnh Oligozoospermia (mật độ tinh trùng ít < 15.106 TT/ mL), không có mối tương quan đáng kể giữa sự phân mảnh DNA của tinh trùng và độ di động, mật độ hoặc hình dạng bình thường [68], [98]. Mặt khác, tỷ lệ tinh trùng di động tiến tới có liên quan tới tỷ lệ có thai của một cặp vợ chồng [75].
3.3.2.6. Mối liên hệ giữa mức độ phân mảnh DNA với tỷ lệ sống của tinh trùng
Dựa theo tiêu chuẩn của WHO, 2010, để đánh giá mối liên hệ giữa mức độ phân mảnh DNA và tỷ lệ sống của tinh trùng, tỷ lệ sống của tinh trùng được chia thành hai nhóm: nhóm tinh trùng có tỷ lệ sống (TLS) < 58% và nhóm tinh trùng có TLS > 58%. Dữ liệu được thống kê trong bảng 3.13.
Bảng 3.13. Mối liên hệ giữa mức độ phân mảnh DNA với tỷ lệ sống của
tinh trùng
Tỉ lệ sống – TLS Số lượng DFI (%) P-values
TLS < 58% 24 (15,89%) 34,85 ± 20,14
< 0,001
TLS > 58% 127 (84,11%) 19,08 ± 13,16
Trong bảng 3.13 ở trên, nhóm tinh trùng có tỷ lệ sống < 58% có 24 bệnh nhân, chiếm số lượng ít trong tổng số 151 bệnh nhân được nghiên cứu nhưng mức độ phân mảnh DNA tinh trùng thuộc nhóm cao với giá trị DFI trung bình là
34,85 ± 20,14%. Nhóm tinh trùng có tỷ lệ sống > 58% có 127 bệnh nhân và có giá trị DFI trung bình thuộc mức trung bình thấp là 19,08 ± 13,16%. Bên cạnh đó, giữa hai nhóm này với mức độ phân mảnh DNA tinh trùng có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê với p < 0,001.
Khi đánh giá tỷ lệ sống của tinh trùng, kết quả này sẽ cho phép người làm xét nghiệm kiểm tra chéo kết quả của tỷ lệ di động. Bởi vì, tỷ lệ sống của tinh trùng có ý nghĩa rất quan trọng trong các trường hợp tinh trùng bất động hoàn toàn trong mẫu tinh dịch sau khi được xuất tinh. Tỷ lệ tinh trùng bất động lớn, có khả năng do bất thường trong cấu trúc đuôi của tinh trùng [29]. Tỷ lệ tinh trùng chết và bất động cao, có thể là do bệnh lý ở mào tinh hoàn [33]. Bên cạnh đó, một mối tương quan nghịch cũng được chỉ ra giữa DFI và tỷ lệ sống của tinh trùng với hệ số tương quan r = - 0,32 và p < 0,001 (Hình 3.7). Hay những mẫu tinh trùng có tỷ lệ sống thấp (TLS < 58%) có mức độ phân mảnh cao hơn so với mức mẫu tinh trùng có tỷ lệ sống > 58%.
Hình 3.7. Mối tương quan giữa mức độ phân mảnh DNA với tỷ lệ sống của
tinh trùng
Như vậy, kết quả nghiên cứu của đề tài luận văn này đã chỉ ra có mối tương quan nghịch giữa tỷ lệ sống với sự phân mảnh DNA của tinh trùng và cũng hoàn toàn phù hợp với một số nghiên cứu của Denny Sakkas và cộng sự (2010) [38], Salah Elbashira và cộng sự (2018) [95], Zhonghua Yi và cộng sự (2008) [116]. Tuy nhiên, trong một số nghiên cứu của Sepaniak S. và cộng sự (2006) [98], Khalili MA. và cộng sự [68], Lê Minh Tâm và cộng sự (2019) [2] lại không chỉ ra mối tương quan đáng kể nào.
3.3.2.7. Mối liên hệ giữa mức độ phân mảnh DNA với hình dạng của tinh trùng
Mối liên hệ giữa mức độ phân mảnh DNA với hình dạng của tinh trùng được thể hiện trong bảng 3.14 và được chia thành hai nhóm: nhóm tinh trùng có hình dạng bất thường (HD < 4) và nhóm tinh trùng có hình dạng bình thường (HD ≥ 4).
Bảng 3.14. Mối liên hệ giữa mức độ phân mảnh DNA với hình dạng của
tinh trùng
Hình dạng tinh trùng – HD Số lượng DFI (%) P-values
Bất thường (HD < 4) 115 (76,16%) 20,52 ± 15,63
0,134 Bình thường (HD ≥ 4) 36 (23,84%) 24,98 ± 14,89
Hình dạng bình thường của tinh trùng được xác định dựa vào kết quả khảo sát các tinh trùng vượt qua chất nhày cổ tử cung hay tinh trùng đã gắn kết được lên bề mặt lớp màng trong suốt zona pellucida của noãn [82]. Vì vậy, tinh trùng bình thường sẽ có phần đầu, cổ, phần giữa và đuôi bình thường. Theo khuyến cáo mới nhất của Tổ chức Y tế Thế giới, hình dạng bình thường của tinh trùng được đánh giá một cách nghiêm ngặt theo Kruger [73].
Theo dữ liệu thống kê trong bảng trên, tỷ lệ bệnh nhân có mẫu tinh dịch chứa tinh trùng có hình dạng bình thường < 4% (bất thường) là 115 bệnh nhân (76,16%). Nhóm bệnh nhân này chiếm phần lớn trong tổng số bệnh nhân được nghiên cứu và có giá trị DFI trung bình 20,52 ± 15,63%. Nhóm bệnh nhân còn lại có 36 bệnh nhân có tinh trùng có hình dạng bình thường ≥ 4% và có chỉ số phân mảnh DNA tinh trùng là 24,98 ± 14,89%. Tuy nhiên, giữa hai nhóm hình thái với mức độ phân mảnh DNA tinh trùng không có mối liên hệ có ý nghĩa thống kê hay giữa tinh trùng có hình dạng bình thường hay bất thường và chỉ số phân mảnh DNA là độc lập với nhau.
Theo nghiên cứu của Daris B. và cộng sự (2010), những tinh trùng có bất thường ở đầu, đặc biệt là đầu có hình dạng bất định, được báo cáo là có liên quan đến khả năng DNA bị phân mảnh cao [36]. Ngoài ra, khi đánh giá hình dạng tinh trùng bằng phân tích Fourier hình elip và phát hiện sự phân mảnh
DNA tinh trùng bằng phương pháp TUNEL, người ta đã đưa ra nhận định rằng những tinh trùng có hình elip bất thường, góc cạnh và có không bào lớn ở hạt nhân tinh trùng có liên quan tới sự phân mảnh DNA [109]. Bên cạnh đó, tỷ lệ tinh trùng có hình dạng bình thường được đánh giá theo tiêu chuẩn nghiêm ngặt, có mối tương quan thuận với tỷ lệ có thai tự nhiên hoặc có thai khi thực hiện các kỹ thuật hỗ trợ sinh sản [22].
Đối lập với kết quả nghiên cứu của chúng tôi, sự khác biệt có ý nghĩa thống kê đã được quan sát giữa những người đàn ông có hình thái tinh trùng bất thường và những người đàn ông có hình thái tinh trùng bình thường (p = 0,0002) trong nghiên cứu của Joanna Jakubik-Uljasz và cộng sự (2020) cũng đã chỉ ra có mối tương quan thuận giữa DFI và hình thái tinh trùng bất thường ở đàn ông vô sinh khi đánh giá mức độ phân mảnh DNA tinh trùng bằng phương pháp SCD [65]. Có một mối tương quan thuận giữa bất thường hình thái đầu tinh trùng và sự phân mảnh DNA tinh trùng trong nghiên cứu của Lê Minh Tâm và cộng sự (2019) khi phân tích 390 bệnh nhân nam vô sinh (r = 0,113, p = 0,027) [2].
Như vậy, trong nghiên cứu của các tác giả khác, có một mối quan hệ rõ ràng giữa hình thái tinh trùng và tính toàn vẹn DNA của tinh trùng. Các tác giả kết luận rằng kiểm tra hình thái rất quan trọng trong quá trình đánh giá tinh dịch thông thường, kết hợp với các dấu hiệu toàn vẹn DNA, là một yếu tố dự báo hoàn hảo về chất lượng tinh dịch trong đánh giá chất lượng tinh trùng của nam giới vô sinh. Đổi lại, một số tác giả khác Cissen. M và cộng sự (2016) [31], Evenson D.P và cộng sự (2017) [50], Tang S.S và cộng sự (2010) [107], đã tìm thấy trong nghiên cứu của họ rằng mức độ phân mảnh DNA tinh trùng ở những đối tượng mắc chứng teratozoospermia cao hơn đáng kể so với đối tượng khác.
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 1. Kết luận
- Đã đánh giá được các đặc điểm lâm sàng của 151 bệnh nhân đến khám và điều trị tại khoa Hỗ trợ Sinh sản - Bệnh viện A Thái Nguyên và xác định được độ tuổi trung bình của bệnh nhân là 32,04 ± 5,97 tuổi, có 79 bệnh nhân sử dụng thuốc lá, có 134 bệnh nhân sử dụng rượu bia và 33 bệnh nhân có tiền sử bị quai bị.
- Đã xác định được các đặc điểm tinh dịch đồ của các đối tượng nghiên cứu gồm: thời gian kiêng xuất tinh trung bình là 4,18 ngày; thể tích xuất tinh trung bình là 3,05mL; giá trị pH trung bình của các mẫu tinh dịch là 7,45; mật độ tinh trùng trung bình trong một lần xuất tinh là 22,63.106 TT/mL; tỷ lệ tinh trùng di động tiến tới là 25,36%; tinh trùng có tỷ lệ sống trung bình là 65,15%; tỷ lệ tinh trùng có hình dạng bình thường trung bình là 1,16%.
- Giá trị phân mảnh DNA tinh trùng trung bình bằng phương pháp khảo sát cấu trúc nhiễm sắc chất tinh trùng (SCSA) là 21,58 ± 15,53%.
- Không có mối liên hệ giữa mức độ phân mảnh DNA tinh trùng với các đặc điểm về độ tuổi, sử dụng thuốc lá, rượu bia, các yếu tố nội tiết cũng như các chỉ số tinh dịch đồ - thời gian kiêng xuất tinh, thể tích xuất tinh, hình dạng tinh trùng.
- Đã xác định được mối tương quan thuận giữa mức độ phân mảnh DNA tinh trùng với bệnh nhân từng mắc quai bị, hệ số tương quan r = 0,17 và p = 0,35.
- Có mối tương quan nghịch giữa mức độ phân mảnh DNA tinh trùng với pH tinh dịch (r = - 0,02 và p = 0,012), mật độ tinh trùng (r = - 0,26, p = 0,02), tỷ lệ sống của tinh trùng (r = - 0,32 và p < 0,001).
2. Kiến nghị
- Cần phân tích trên số lượng mẫu lớn hơn để đưa ra các đánh giá chính xác cho mối liên hệ giữa sự phân mảnh DNA tinh trùng với các trường hợp bệnh nhân có tiền sử bị quai bị đến khám và điều trị vô sinh tại khoa Hỗ trợ Sinh sản - Bệnh viện A Thái Nguyên.
- Nghiên cứu ảnh hưởng của sự phân mảnh DNA tinh trùng lên kết quả có thai của những trường hợp thực hiện các kỹ thuật hỗ trợ sinh sản như IUI và IVF/ICSI tại khoa Hỗ trợ Sinh sản - Bệnh viện A Thái Nguyên.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tài liệu tiếng Việt
1.Hồ Mạnh Tường, Đặng Quang Vinh, Vương Thị Ngọc Lan (2011), “Thụ tinh trong ống nghiệm”, NXB Giáo dục Việt Nam, 44-45.
2.Lê Minh Tâm, Trần Thị Như Quỳnh, Lê Đình Dương, Cao Ngọc Thành Bệnh viện Đại học Y Dược Huế (2019), “Một số yếu tố liên quan phân mảnh DNA tinh trùng”, Journal of obstetrics and gynecology – Tạp chí Phụ sản - Tập 17 (01), 09 – 2019. 54-61.
3.Nguyễn Khắc Liêu (2002), “Vô sinh chẩn đoán và điều trị”, Nhà xuất bản Y học, 35-38.
4.Vũ Đào Minh Thông, Nguyễn Thị Trà My (2018), “Đánh giá kết quả kỹ thuật thụ tinh trong ống nghiệm tại khoa hỗ trợ sinh sản bệnh viện A Thái Nguyên từ 2016 đến 2018”, Đề tài nghiên cứu khoa học cấp cơ sở năm 2018 – Bệnh viện A Thái Nguyên. 40-43.
Tài liệu tiếng Anh
5.Agarwal A., Saleh R.A., Bedaiwy M.A. (2003), “Role of reactive oxygen species in the pathophysiology of human reproduction”, Fertility and sterility, 79(4), 829-843.
6.Agarwal, A., Majzoub Ahmad C., Esteves Sandro, Ko Edmund, Ramasamy, Zini Armand (2016), “Clinical utility of sperm DNA fragmentation testing: practice recommendations based on clinical scenarios”, Transl Androl Urol; 5(6):935-950.
7.Agarwal Ashok, Shubhadeep Roychoudhury, Kimberly B., Bjugstad, and Chak-Lam Cho (2016), “Oxidation-reduction potential of semen: what is its role in the treatment of male infertility?”, Fertility and sterility, pg 302-318.
8.Aguilar C., Meseguer M., Garcıa-Herrero S., Gil-Salom M., O’Connor J.E. & Garrido N. (2010), “Relevance of testicular sperm DNA oxidation for the outcome of ovum donation cycles”, Fertil Steril 94, 979–988.
9.Aitken R.J., de Iuliis G.N. (2007), “Origins and consequences of DNA damage in male germ cells”, Reprod Biomed Online, 14, 727-733.
10.Ajduk A., Yamauchi Y., Ward M.A. (2006), “Sperm chromatin remodeling after intracytoplasmic sperm injection differs from that of in vitro fertilization”,
Biol Reprod, 75, 442-51.
11.Akira Komiya, Tomonori Kato, Yoko Kawauchi, Akihiko Watanabe, and Hideki Fuse (2014), “Clinical Factors Associated with Sperm DNA Fragmentation in Male Patients with Infertility”, Published online 2014 Aug 4. doi: 10.1155/2014/868303.
12.Alrabeeah K., Yafi F., Flageole C., Phillips S., Wachter A., Bissonnette F., Kadoch I.J. & Zini A. ( 2014), “Testicular sperm aspiration for nonazoospermic men: sperm retrieval and intracytoplasmic sperm injection outcomes”, Urology 84, 1342– 1346.
13.Alvarez J.G. (2003), “DNA fragmentation in human spermatozoa: significance in the diagnosis and treatment of infertility”, Minerva Ginecol, 55, 233-239.
14.Anatomy & Physiology, “Chapter 7: The reproductive system”, OpenStax CollegeRice University, p. 1223, 77005.