5. Những đóng góp mới của đề tài
3.3.1. Kết quả tách chiết ADN tổng số mẫu giống Rắn cạp nia Bungarus
Bungarus ở Việt Nam
Tách chiết ADN tổng số nhằm mục đích thu nhận ADN ra khỏi cấu trúc tế bàọ Điều quan trọng nhất là thu nhận được ADN ở trạng thái còn nguyên vẹn không bị phân hủy và không lẫn nhiều tạp chất để có nguồn nguyên liệu chất lượng tốt cho các thí nghiệm tiếp theo. Trong nghiên cứu này chúng tôi sử dụng bộ Kit GeneJet PCR Purification (Thermo Fisher Scientific) đểtách chiết ADN tổng số từ 09 mẫu cơ và gan củagiống Rắn cạp nia Bungarus ở Việt Nam (Bảng 3.2). Kết quả điện di kiểm tra ADN trên gel agarose 1% (Hình 3.8) cho
thấy mỗi giếng chỉ cho một vạch băng duy nhất, các băng đậm, sắc nét thể hiện ADN đã tách chiết được.Kiểm tra hàm lượng và độ sạch của ADN tách được bằng phương pháp quang phổ trên máy NanoDrop 2000thì các mẫu ADN được đo quang phổ hấp thụ ở dải bước sóng 260nm và 280nm. Tỉ lệ OD260nm/OD280nm của các mẫu dao động trong phạm vi cho phép từ 1,8 đến 2,0 (Bảng 3.2), điều này chứng tỏ các mẫu ADN tổng số tách chiết được đảm bảo độ tinh sạch để làm khuôn thực hiện phản ứng PCR với mồi đặc hiệụ Các mẫu ADN tổng số được pha loãng bằng H2O deion về hàm lượng 20 ng/µl để bảo quản và thực hiện phản ứng PCR
Hình 3.9. Kết quả điện di DNA tổng số 09 mẫu giống Rắn cạp nia Bungarusở Việt Nam trên gel agarose 1% (các giếng từ 1-9 là thứ tự các mẫu tương ứng với số thứ tự trong bảng 3.2).
Bảng 3.3. Độ sạch và hàm lượng ADN của 09 mẫu giống Rắn cạp nia
Bungarus ở Việt Nam
STT Mẫu
nghiên cứu Tên loài OD260nm OD280nm
Độ sạch ADN (OD260nm/280nm) Hàm lượng ADN (ng/µl) 1 IEBR 4057 B. candidus 0,092 0,048 1,917 920 2 IEBR.KH 201695 B. candidus 0,083 0,044 1,886 830 3 IEBR.NT 201694 B. candidus 0,075 0,039 1,923 750 4 VNMN 011010 B. candidus 0,087 0,051 1,706 870 5 VNMN 011012 B. candidus 0,069 0,036 1,917 690 6 VNMN 011013 B. candidus 0,088 0,047 1,872 880 7 VNMN 011014 B. candidus 0,070 0,041 1,707 700 8 VNMN 011015 B. candidus 0,069 0,041 1,683 690 9 IEBR 3906 B. slowinskii 0,081 0,048 1,688 810
Bảng 3.4. Thông tin các trình tự gen sử dụng trong nghiên cứu
STT Tên loài Số hiệu
Genbank
Số hiệu bảo tàng
Địa điểm
thu mẫu Tài liệu
1 Bungarus candidus KY769757 MVZ 258148 Virachey NP, Ratanakiri, Cambodia Nguyễn và cs. 2017
2 B. candidus KY769758 KIZ 100 Bu Gia Map NP, Binh Phuoc, Vietnam Nguyễn và cs. 2017
3 B. candidus ‒ IEBR 4057 Bình Định Nghiên cứu này
4 B. candidus ‒ KH 201695 Cam Lâm, Khánh Hòa Nghiên cứu này
5 B. candidus ‒ NT 201694 VQG Núi Chúa, Ninh Thuận Nghiên cứu này
6 B. candidus ‒ VNMN 011010 Vĩnh Sơn, Vĩnh Tường, Vĩnh Phúc Nghiên cứu này
7 B. candidus ‒ VNMN 011012 Vĩnh Sơn, Vĩnh Tường, Vĩnh Phúc Nghiên cứu này
8 B. candidus ‒ VNMN 011013 Vĩnh Sơn, Vĩnh Tường, Vĩnh Phúc Nghiên cứu này
9 B. candidus ‒ VNMN 011014 Vĩnh Sơn, Vĩnh Tường, Vĩnh Phúc Nghiên cứu này
10 B. candidus ‒ VNMN 011015 Vĩnh Sơn, Vĩnh Tường, Vĩnh Phúc Nghiên cứu này
11 B. “wanghaotingi” MN165152 CIB104228 Nanning Zoo, Guangxi, China (locality
uncertain) Chen và cs. 2021
12 B. multicinctus MN165153 CIB DL18090209 Wuyi Moutain, Fujian, China Chen và cs. 2021
13 B. multicinctus MN165154 CIB DL18090210 Wuyi Moutain, Fujian, China Chen và cs. 2021
14 B. multicinctus MN165151 CIB93923 Guangxi, China Chen và cs. 2021
15 B. multicinctus MN165150 SYNU R180305 Haikou, Hainan, China Chen và cs. 2021
16 B. multicinctus KP749805 RN0296 Taiwan, China Chen & Lin, 2015
17 B. multicinctus KP749806 RN0304 Taiwan, China Chen & Lin, 2015
19 B. multicinctus KP749815 RN0893 Taiwan, China Chen & Lin, 2015
20 B. multicinctus KP749818 RN1073 Taiwan, China Chen & Lin, 2015
21 B. multicinctus KP749820 RN1198 Taiwan, China Chen & Lin, 2015
22 B. multicinctus KP749821 RN1231 Taiwan, China Chen & Lin, 2015
23 B. “wanghaotingi” MN165149 CIB104227 Beiliu, Guangxi, China Chen và cs. 2021
24 B. “wanghaotingi” MN165147 SYNU R170408 Bang Lang National Park, Yala, Thailand Chen và cs. 2021
25 B. “wanghaotingi” MN165158 CIB ML20170801 Menglun, Yunnan, China Chen và cs. 2021
26 B. “wanghaotingi”
MN165157 CIB
MLMY20170801 Mengla, Yunnan, China Chen và cs. 2021
27 B. “wanghaotingi” MN165159 JK20181101 Jinghong, Yunnan, China Chen và cs. 2021
28 B. candidus KY769759 KIZ 1326 Ta Kou NR, Binh Thuan, Vietnam Nguyễn và cs. 2017
29 B. candidus KY769760 ITBCZ 900 Nui Chua NP, Ninh Thuan, Vietnam Nguyễn và cs. 2017
30 B. candidus KY769761 ITBCZ 1040 Nui Chua NP, Ninh Thuan, Vietnam Nguyễn và cs. 2017
31 B. candidus KY769762 HUS 300 Bach Ma NP, Thua Thien–Hue, Vietnam Nguyễn và cs. 2017
32 B. fasciatus KY769766 MVZ226610 Tam Dao NP, Vinh Phuc, Vietnam Nguyễn và cs. 2017
33 B. magnimaculatus KY769768 CAS 210526 Alaungdaw Kathapa, Sagaing, Myanmar Nguyễn và cs. 2017
34 B. magnimaculatus KY769769 CAS 210696 Sin Ma Taung, Magway, Myanmar Nguyễn và cs. 2017
35 B. magnimaculatus KY769770 CAS 215445 Alaungdaw Kathapa, Sagaing, Myanmar Nguyễn và cs. 2017
36 B. magnimaculatus KY769771 CAS 215958 Min Sone Taung, Mandalay, Myanmar Nguyễn và cs. 2017
37 B. magnimaculatus KY769772 CAS 215998 Min Sone Taung, Mandalay, Myanmar Nguyễn và cs. 2017
38 B. magnimaculatus KY769773 CAS 215999 Min Sone Taung, Mandalay, Myanmar Nguyễn và cs. 2017
40 B. suzhenae MN165156 CIB116089 Yingjiang, Yunnan, China Chen và cs. 2021
41 B. slowinskii ‒ IEBR 3906 Xuân Liên, Thanh Hóa Nghiên cứu này