M Ở ĐẦU
3.2.2. Ảnh hƣởng cấu trúc vi thể của da
3.2.2.1. Độ dày biểu bì
Hình 3.8. Ảnh hƣởng của UV lên độ dày biểu bì chuột sau 8 tuần thí nghiệm (X40)
(a - đối chứng; b - 3 giờ; c - 6 giờ; d - 9 giờ)
Ảnh hƣởng của UV lên độ dày biểu bì chuột sau 8 tuần thí nghiệm ở mức vi thể
Hình 3.9. Biểu đồ thể hiện độ dày biểu bì dƣới tác động của UV sau 8 tuần chiếu
Từ biểu đồ hình 3.9 nhận thấy, độ dày biểu bì của chuột bị ảnh hƣởng rõ rệt
dƣới tác dụng của các mốc thời gian chiếu UV. Cụ thể:
Ở nghiệm thức đối chứng (không chiếu UV), độ dày trung bình của biểu bì là 14,50 µm, độ dày biểu bì ở các nghiệm thức còn lại (1, 2 và 3) đều tăng lên và có sự
cách biệt với độ tin cậy rất cao (p < 0,001) (xem phụ lục 3.1). Khi chiếu UV liên tục 3 giờ/ngày, độ dày biểu bì trung bình khoảng 18,17 µm (tăng 3,66 µm so với nghiệm thức đối chứng); chiếu liên tục 6 giờ/ngày, độ dày biểu bì khoảng 24,06 µm
(tăng gấp gần 1,7 lần so với nghiệm thức đối chứng) và ở mốc chiếu 9 giờ/ngày biểu bì có độ dày lớn nhất, trung bình khoảng 25,87 µm (tăng gấp gần 1,8 lần so với nghiệm thức đối chứng). Tóm lại, độ dày biểu bì tăng dần theo ngƣỡng thời gian chiếu UV. Điều này có thểdo cơ chế tự bảo vệ của da để chống lại sức nóng của tia UV. Tốc độ tăng không theo tuyến tính, nguyên nhân có thể do sự kích thích tác
động từ mức UV càng cao có thể làm cho độ dày càng tăng để chống lại sức nóng từ
tia UV, nhƣng khi đến ngƣỡng thì sựgia tăng này sẽ chậm lại và đƣợc duy trì.
3.2.2.2. Cấu trúc collagen
Sau khi nhuộm HE, mẫu da đƣợc quan sát dƣới kính hiển vi nhận thấy cấu trúc collagen với 4 mức độ khác nhau một cách rõ rệt (hình 3.10).
Hình 3.10. Cấu trúc collagen ở các mức độ lão hoá dƣới tác động của UV (X40)
Số lƣợng mẫu bị lão hoá da dựa theo cấu trúc collagen dƣới ảnh hƣởng của thời gian chiếu tia UV đƣợc thể hiện qua biểu đồ hình 3.11.
Hình 3.11. Biểu đồ thể hiện sốlƣợng mẫu bị lão hoá da dựa theo cấu trúc collagen
dƣới tác động của UV
Từ kết quả số lƣợng mẫu ở từng mức độ lão hoá (xem phụ lục 3.2), quy đổi thành tỉ lệ (%) mức độ lão hoá dƣới ảnh hƣởng của cƣờng độ chiếu ở mỗi nghiệm thức theo phƣơng pháp ở mục 2.4.4, kết quảđƣợc thể hiện qua bảng 3.3.
Bảng 3.3. Tỉ lệ (%) mức độ lão hoá da dƣới ảnh hƣởng của mốc thời gian chiếu Nghiệm thức Lão hoá
mức 0 Lão hoá mức 1 Lão hoá mức 2 Lão hoá mức 3 Đối chứng 60,00% 40,00% 0,00% 0,00% Nghiệm thức 1 33,00% 47,00% 20,00% 0,00% Nghiệm thức 2 6,70% 33,30% 33,30% 26,70% Nghiệm thức 3 3,30% 20,00% 50,00% 26,70%
Từ kết quả biểu đồ hình 3.11 và bảng 3.3, kết quảđánh giá mức độ lão hoá ở
Ở nghiệm thức đối chứng (không chiếu UV): trong điều kiện ánh sáng trắng của phòng thí nghiệm (12 giờ sáng :12 giờ tối), sau 8 tuần chỉ có 60% không bị lão hoá da (mức 0), và vẫn có tới 40% chuột có dấu hiệu lão hoá da (mức 1). Nhƣ vậy,
trong điều kiện nuôi bình thƣờng, quá trình lão hoá nội tại vẫn diễn ra theo chu trình sống tự nhiên của chuột (chiếm 40%). Kết quả nhuộm HE cho thấy xuất hiện một số đứt gãy trong cấu trúc collagen và mật độ collagen bắt đầu không liên tục. Tuy nhiên, ở nghiệm thức này không có lão hoá da mức 2 và 3; lão hoá mức 1 vẫn dƣới 50%. Kết quả này cho thấy chuột đƣợc nuôi trong điều kiện bình thƣờng, khi đạt 14 tuần tuổi, sự lão hoá do thay đổi cấu trúc collagen là không đáng kể. Điều này giúp cho sựđánh giá ảnh hƣởng của tia UV lên tốc độ lão hoá có tính tin cậy cao.
Ở nghiệm thức 1 (chiếu UV 3 giờ/ngày), kết quả thực nghiệm cho thấy có 33% chuột không bị lão hoá da, trong khi đó có tới 47% chuột bắt đầu có dấu hiệu lão hoá da (mức 1) và 20% chuột bị lão hoá da (mức 2), chƣa thấy mẫu nào có hiện
tƣợng lão hoá da nhiều (mức 3). Sự xuất hiện lão hoá mức 2 ở thời gian chiếu UV 3 giờ/ngày có thể khẳng định rằng, việc chiếu tia UV có ảnh hƣởng đến cấu trúc collagen và làm biến đổi cấu trúc này, gây ra hiện tƣợng đứt gãy và mất sự liên kết giữa các sợi collagen với nhau.
Ở nghiệm thức 2 (chiếu UV 6 giờ/ngày), mức độ lão hoá thay đổi rõ rệt so với
ở nghiệm thức chiếu 3 giờ/ngày: sốlƣợng mẫu không bị lão hoá da (mức 0) chỉ có 6,7%; sốlƣợng mẫu có dấu hiệu lão hoá da (mức 1 và mức 2) bằng nhau, đều chiếm 33,33% và đặc biệt, có tới 26,7% mẫu da bị lão hoá nặng (mức 3). Nhƣ vậy, với thời gian chiếu 6 giờ/ngày, chuột bị lão hoá da tăng so với khi chiếu 3 giờ/ngày (33,33% so 20%, tƣơng ứng); sự xuất hiện lão hoá da nặng với tỉ lệ 26,7% chứng tỏ
thời gian tiếp xúc với tia UV lâu hơn đã gây ra hiện tƣợng đứt gãy hầu hết cấu trúc collagen ở nhiều mức độ khác nhau. Trong khi đó, với thời gian chiếu 3 giờ/ngày
chƣa ghi nhận đƣợc hiện tƣợng lão hoá da nặng (mức 3).
Ở nghiệm thức 3 (chiếu 9 UV giờ/ngày), sốlƣợng mẫu không lão hoá da chỉ
chiếm một tỉ lệ rất nhỏ (3,30%), trong khi các mức độ lão hoá da (mức 1 và 2) có những biến đổi so với khi chiếu UV 6 giờ/ngày, cụ thể: số lƣợng mẫu có dấu hiệu lão hoá da giảm (20% so với 33,3%), số lƣợng mẫu bị lão hoá da tăng gấp 1,5 lần (50% so với 33,3%). Riêng hiện tƣợng lão hoá da mức độ nặng ở nghiệm thức này
không thay đổi so với nghiệm thức chiếu UV 6 giờ/ngày (đều 26,7%). Qua đó có
thể thấy, mặc dù với lƣợng thời gian chiếu UV dài hơn (9 giờ/ngày) nhƣng vẫn chƣa
tạo sự cách biệt về mức độ lão hoá da nặng so với thời gian chiếu 6 giờ/ngày. Trong
khác nhau tƣơng đối hợp lí. Vì vậy, xét về hiệu quả thí nghiệm và phƣơng diện kinh tế, môi trƣờng, tính hợp lí về khung thời gian thực tế, đề tài chọn thời gian chiếu UV 6 giờ/ngày để tiếp tục khảo sát hiệu quả ngăn ngừa lão hoá da chuột của dịch chiết nhau thai heo ở thí nghiệm 3..
Tóm lại, từ kết quả phân tích trên có thể nhận định: cùng một cƣờng độ (24 mJ/cm2), sự tổn thƣơng lên da chuột có xu hƣớng tăng dần theo sự tăng dần thời gian chiếu (3 giờ, 6 giờ, và 9 giờ chiếu): tăng mức độ lão hoá da bên ngoài (da khô, nếp nhăn nhiều, sự đàn hồi của da giảm dần); độ dày biểu bì sau 6 và 9 giờ chiếu
tƣơng đƣơng nhau nhƣng tăng cách biệt so với 3 giờ và 0 giờ chiếu; cấu trúc collagen bị đứt gãy tăng dần; mức độ lão hoá da cũng tăng dần.