Thẩm định phương pháp phân tích được thực hiện theo tài liệu hướng dẫn chuyên khảo kết quả được so với tiêu chuẩn quy định bởi. Hội đồng châu Âu (SANTE/ 2019/12682) [36]. Các thông số thẩm định gồm ảnh hưởng nền, giới hạn định lượng, giới hạn phát hiện, đường chuẩn, độ thu hồi, độ lặp lại.
SANTE/12682/2019 được ban hành vào ngày 01/01/2020, là văn bản kiểm soát chất lượng phân tích và quy trình phê duyệt giá trị sử dụng của
phương pháp cho các phương pháp phân tích dư lượng hoá chất bảo vệ thực vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi của tổ chức EU.
2.2.3.1. Giới hạn định lượng (LOQ)
LOQ là nồng độ thấp nhất có thể định lượng chính xác, được thêm vào mẫu trắng để xác định các thông số độ lặp lại, độ tái lặp và hiệu suất thu hồi. Nồng độ LOQ phải nhỏ hơn hoặc bằng giá trị MRL, kết hợp với độ nhạy của thiết bị. Để tạo sự thuận tiện trong việc chuẩn bị các dung dịch chuẩn, những hợp chất mặc dù có MRL khác nhau nhưng độ nhạy của thiết bị vẫn đáp ứng tốt sẽ được nhóm chung một giá trị LOQ, vẫn đảm bảo yếu tố nhỏhơn MRL.
Với các chất không có quy định về MRL, nồng độ khảo sát sẽ được chọn ở
mức LOQ là 10 μg/kg.
2.2.3.2. Xây dựng đường chuẩn
Đường chuẩn là đường biểu diễn sự phụ thuộc tuyến tính giữa đại
lượng đo được và nồng độ chất phân tích. Đường chuẩn có dạng: y = ax + b; trong đó: a là hệ số góc và b là giá trị hệ số chặn; hệ sốtương quan R:
Nếu 0,995 < R ≤ 1: có tương quan tuyến tính rõ rệt
Xây dựng đường chuẩn trên nền dịch chiết mẫu trắng và trong dung môi: Các dung dịch để lập đường chuẩn có nồng độ trong khoảng từ 5-100 µg/L.
2.2.3.3. Độ thu hồi và độ lặp lại của phương pháp
- Hiệu suất thu hồi (H%) của phương pháp xử lý mẫu là một trong những đại lượng quan trọng để đánh giá hiệu quả của phương pháp. Nó cho
biết lượng chất bị mất đi trong quá trình xử lý mẫu. Đánh giá hiệu suất thu hồi
là đánh giá độ tin cậy của phương pháp xử lý mẫu đã chọn, được tính toán bằng cách so sánh hàm lượng mỗi HCBVTV cơ clo có trong các mẫu thêm chuẩn/xử lý và mẫu xử lý/thêm chuẩn. Tiêu chuẩn đạt yêu cầu: 70-120%.
- Độlặp lại (RSDr) của phương pháp được xác định qua độ lệch chuẩn (SD) và độ lệch chuẩn tương đối (RSD %). Tiêu chuẩn đạt yêu cầu RSD ≤
20%
Trong đó:
SD: Độ lệch chuẩn n: số thí nghiệm
xi: Giá trịtính được của lần thử nghiệm thứ “i”
x: Giá trị trung bình của các lần thử nghiệm RSD (%): Độ lệch chuẩn tương đối
Thực nghiệm: Các giá trị hiệu suất thu hồi, độ lặp lại được thực hiện bằng cách thực hiện 2 lần, mỗi lần thực hiện 6 lần lặp mẫu thêm chuẩn tại giá trị LOQ và một mức nồng độ khác, theo kiến nghị, gấp từ 2 – 10 lần LOQ.