4. Nội dung nghiên cứu:
2.2.6. Phương pháp khảo sát hoạt tính chống oxi hóa thông qua khả năng ức chế
peroxy hóa lipid (thử nghiệm MDA).
Hoạt tính chống oxi hóa thông qua khả năng ức chế peroxy hóa lipid được thực hiện theo phương pháp của Stroev và Makarova và viện Dược liệu – Bộ Y tế, có sự thay đổi cho phù hợp với điều kiện phòng thí nghiệm. Xác định khả năng ức chế peroxy hóa lipid của mẫu nghiên cứu thông qua việc xác định hàm lượng malonyl dialdehyl (MDA), là sản phẩm của quá trình peroxy hóa màng tế bào. MDA phản ứng với acid thiobarbituric để tạo phức trimethine có màu hồng và đỉnh hấp thụ cực đại ở bước sóng 530 – 532nm.
Tách não chuột và nghiền đồng thể trong dung dịch đệm phosphat (pH=7.4) theo tỉ lệ 1:10 ở nhiệt độ 0 – 4°C. Lấy 1ml dịch đồng thể thêm vào 0,1ml mẫu thử ở các nồng độ và 0,8ml đệm phosphat thêm 0,1ml hệ Penton (FeSO4 0,1mM: H2O2 15mM theo tỉ lệ 1:1). Ủ hỗn hợp ở 37°C trong 15 phút. Dừng phản ứng bằng 1ml acide tricloacetic 10%. Li tâm 12000 vòng trong 5 phút. Lấy dịch trong cho phản ứng với 1ml acid thiobarbituric 0,8% ( theo tỉ lệ 2:1). Ủ ở nhiệt độ 100°C trong 15 phút. Làm lạnh và tiến hành đo ở bước sóng =532nm. Trolox được sử dụng làm chất đối chiếu tham khảo.
Hàm lượng MDA được tính theo công thức: MDA = 28,4 x OD.
Hoạt tính chống oxy hóa (HTCO) thông qua khả năng ức chế peroxy hóa lipid (MDA) được tính như sau:
HTCO (%) = [(ODC – ODT)/ODC] x 100 Trong đó:
ODC: Mật độ quang của đối chứng ODT: Mật độ quang của lô thực nghiệm
Giá trị IC50 (Inhibition Concentration at 50% - nồng độ ức chế được 50% peroxy hóa lipid) sẽ được xác định nhờ vào phần mềm TableCurve 2Dv4.