4. Nội dung nghiên cứu:
3.3. Kết quả khảo sát hoạt tính bảo vệ gan của cao chiết etanol từ cây An xoa
Để khảo sát hoạt tính bảo vệ gan của cao chiết etanol từ cây An xoa chúng tôi sử dụng mô hình gây tổn thương gan bằng Paracetamol với liều 400mg/kgP, paracetamol được pha trong dung dịch sinh lý với nồng độ 50mg/ml. Kết quả thu được trong mô hình nghiên cứu này cho phép đánh giá sơ bộ hoạt tính bảo vệ gan của cao chiết etanol từ cây An xoa.
3.3.1. Kết quả quan sát trực quan gan chuột ở các nhóm thực nghiệm
Kết quả quan sát trực quan gan chuột các nhóm thực nghiệm được trình bày ở bảng 3.3 và các hình 3.1
Bảng 3.3. Quan sát mô bệnh học đại thể của gan chuột
Nhóm Quan sát hình thái trực quan gan
Chứng sinh lý Gan bình thường như mô gan đồng nhất, màu hồng Chứng bệnh lý Gan nhạt màu, nhu mô gan to nổi rõ
Chứng tham khảo Gan hơi nhạt màu, nhu mô gan hơi to Cao chiết
125mg/kgP
Gan hơi nhạt màu, nhu mô gan hơi to Cao chiết
250mg/kgP
Gan hơi nhạt màu, nhu mô gan hơi to Cao chiết
500mg/kgP
Gan hơi nhạt màu, nhu mô gan hơi to
20
b. Nhóm chứng bệnh lý
c. Nhóm chứng tham khảo (uống Silymarin)
21
e. Nhóm uống Cao chiết ethanol từ cây An xoa (250mg/kgP)
f. Nhóm uống Cao chiết ethanol từ cây An xoa (500mg/kgP)
Hình 3.1. Đại thể và nhu mô chuột
Kết quả quan sát mô bệnh học đại thể gan chuột ở bảng 3.2 và các hình 3.1 cho thấy ở nhóm chứng bệnh lý gan có màu nhạt, nhu mô gan nổi rõ. Thuốc Paracetamol được xem là an toàn ở liều điều trị nhưng khi dùng quá liều sẽ dẫn đến tổn thương gan. Khi thuốc theo máu đến gan, tại đây xảy ra quá trình chuyển hóa thuốc. Các enzym có ở trong gan sẽ tham gia chuyển hóa Paracetamol thành những chất chuyển hóa phân cực. Một trong những sản phẩm của quá trình chuyển hóa này là chất hóa học trung gian như N- acetyl -p- benzoquiononimin (NAPQI), đây là chất có thể tấn công các đại phân tử dẫn đến tổn thương tế bào gan. Khi bị tổn thương, tế bào gan và ống mật sẽ dẫn đến tình trạng tích tụ axit mật ở trong gan, đây là nguyên nhân làm cho ti thể và mạng lưới nội sinh chất của tế bào bị stress dẫn đến gia tăng quá trình tổn thương gan cũng như tăng nguy cơ gan bị tổn thương bởi các cơ chế khác[6].
Ở các nhóm uống cao chiết với các nồng độ khác nhau và nhóm uống sylimarin thì gan hơi nhạt màu hơn so với nhóm sinh lý nhưng lại sáng màu hơn so với nhóm chứng bệnh lý và nhu mô gan hơi to. Điều này chứng tỏ mức độ tổn thương gan ở các nhóm này giảm .
Như vậy, qua việc quan sát mô bệnh học, các nhóm uống cao chiết cây An xoa đã có tác dụng bảo vệ gan, giảm tổn thương gan dưới tác động của Paracetamol liều cao.
3.3.2. Kết quả ảnh hưởng của cao chiết đến các chỉ số GOT, GPT
Để tiếp tục chứng minh hoạt tính bảo vệ của cao chiết ethanol từ cây An xoa, sự thay nồng độ 2 enzym trao đổi amin (transaminase) là GOT (Serum glutamic oxaloacetic
22
transamina) và GPT (Serum glutamic pyruvic transamina) trong huyết thanh của các nhóm chuột nghiên cứu được khảo sát. Kết quả được trình bày quá bảng 3.4.
Kết quả ảnh hưởng của cao chiết đến các chỉ số GOT, GPT được trình bày qua bảng 3.4 và biểu đồ 3.1
Bảng 3.4. Nồng độ enzyme GOT, GPT trong huyết thanh của chuột gây tổn thương gan bằng Paracetamol
Nhóm GOT (U/L) GPT (U/L)
Chứng sinh lý 2,08±0,18 2±0,12 Chứng bệnh lý 7,66±0,95 13,92±2,42 Chứng tham khảo 2,17±0,35 (98,38) 3,17±0,35 (90,18) Cao chiết 125mg/kgP 3,08±0,18 (82,08) 5,08±0,64 (74,16) Cao chiết 250mg/kgP 3,67±0,24 (71,51) 5,33±0,83 (72,06) Cao chiết 500mg/kgP 4,67±0,47 (53,58) 7,17±0,71 (56,63)
* Hiệu quả bảo vệ được tính bằng 100 x (giá trị kiểm soát parcetamol –giá trị mẫu nghiên cứu)/ giá trị kiểm soát paracetamol – giá trị bình thường)
0 2 4 6 8 10 12 14 16
Sinh lý Bệnh lý Tham khảo Cao 125mg/kgP Cao 250mg/kgP Cao 500mg/kgP GOT GPT
23
Biểu đồ 3.1. Nồng độ enzyme GOT, GPT trong huyết thanh của chuột gây tổn thương gan bằng Paracetamol
Qua bảng 3.4 và biểu đồ 3.1 cho thấy:
Nhóm uống cao chiết etanol từ cây An xoa với ba mức liều 125mg/kgP, 250mg/kgP và 500mg/kgP có nồng độ GOT, GPT giảm so với nhóm đối chứng bệnh lý và nhóm uống cao chiết liều 125mg/kgP có nồng độ GOT, GPT giảm thấp nhất so với nhóm đối chứng bệnh lý. Cụ thể
- Nhóm chuột uống cao chiết etanol từ cây An xoa ở mức liều 125mg/kgP có nồng độ GOT giảm 2,49 lần và GPT giảm 2,74 lần so với nhóm đối chứng bệnh lý.
- Nhóm chuột uống cao chiết entanol từ cây An xoa ở mức liều 250mg/kgP có nồng độ GOT giảm 2,09 lần và GPT giảm 2,61 lần so với nhóm đối chứng bệnh lý.
- Nhóm chuột uống cao chiết etanol từ cây An xoa ở mức liều 500mg/kgP có nồng độ GOT giảm 1,64 lần và GPT giảm 1,94 lần so với nhóm đối chứng bệnh lý.
Đánh giá hiệu quả bảo vệ gan của cao chiết entanol từ cây An xoa ở các mức liều 125mg/kgP, 250mg/kgP và 500mg/kgP cho thấy: Cao chiết etanol từ cây An xoa ở mức liều 125mg/kgP có hiệu quả bảo vệ gan cao nhất (GOT giảm 82,08% và GPT giảm 74,16% so với nhóm bệnh lý), tiếp sau là cao chiết etanol ở mức liều 250mg/kgP ( GOT giảm 71,51% và GPT giảm 72,06% so với nhóm bệnh lý) và thấp nhất là cao chiết etanol từ cây An xoa ở mức liều 500mg/kgP (GOT giảm 53,58% và GPT giảm 56,63% so với nhóm bệnh lý).
Hiệu quả bảo vệ gan của cao chiết etanol từ cây An xoa ở cả ba mức liều 125mg/kgP, 250mg/kgP và 500mg/kgP đều thấp hơn so với hiệu quả bảo vệ gan của silymarin ( GOT giảm 98,38% và GPT giảm 90,18% so với nhóm bệnh lý).
GOT, GPT là các enzyme xúc tác các phản ứng hóa học trong cơ thể. GOT là enzyme ở trong bào tương và ty thể, thường tìm thấy trong các mô gan, tim, thận và não, GPT có mặt chủ yếu ở tế bào gan, vì vậy sự tăng GPT đặc hiệu cho tổn thương gan hơn GOT.
Ở nhóm bệnh lý, nồng độ enzyme GOT tăng 3,68 lần và GPT tăng 6,96 lần so với chứng sinh lí. Điều này chứng tỏ khi chuột được uống Paracetamol, số lượng tế bào gan bị phá hủy tăng lên dẫn đến việc giải phóng enzyme GOT vào trong máu.
Như vậy, cao chiết cây An xoa Việt Nam có tác dụng làm giảm hàm lượng enzyme GOT, GPT trong máu chuột nhắt trắng. Điều này chứng tỏ cao chiết cây An xoa có hoạt tính bảo vệ gan, chống lại sự phá hủy tế bào do Paracetamol.
Theo các công trình nghiên cứu đã công bố của một số tác giả về thành phần và hoạt tính của cây An xoa, trong thành phần của cây An xoa có chứa các hợp chất thuộc các lớp chất như flavonoid, lignans, pinoresinol, stigmasterol,..có hoạt tính bảo vệ gan với vai trò giảm quá trình oxy hóa và chống lại sự hoại tử tế bào. Trong đó, hợp chất thuộc lớp chất flavonoid được đánh giá cao về tác dụng chống độc, làm giảm tổn thương gan, bảo vệ chức năng gan khi chất độc được đưa vào cơ thể như: apigenin là một hợp chất có nhiều hoạt tính dược lý khác nhau trong đó có hoạt tính bảo vệ nhưng ít gây độc tính cho động vật thực nghiệm [1]. Tiliroside có khả năng ức chế quá trình sản xuất TNF- α, giảm độ nhạy của tế bài gan với tác động của TNF-α do đó ngăn cản quá trình tăng lên của GOT và GPT[8]. Stigmasterol có tác dụng làm giảm quá trình peroxi hóa lipid ở gan
24
và tăng hoạt động của catalase, superoxide dismutase và glutathione do đó có hoạt tính bảo vệ gan[12].
Với vai trò bảo vệ gan của các hợp chất thuộc các lớp chất như flavonoid, lignans, pinoresinol, stigmasterol, ... những hoạt chất này có khả năng làm giảm số lượng tế bào gan bị phá hủy dẫn đến hàm lượng GPT trong máu cũng sẽ giảm. Dưới tác dụng của flavonoid ngưỡng ascobic được ổn định, đồng thời lượng glycogen trong gan tăng, sự tích lũy glycogen đóng vai trò quan trọng trong việc nâng cao chức năng giải độc gan.