3.4.4. Phương pháp nghiên cứu đặc điểm sinh học NBM
Nghiên cứu đặc điểm sinh học nhện bắt mồi được thực hiện với phương pháp nuôi cá thể trong lông mica Munger cải tiến theo mô tả của Nguyen & cs. 2013. Lồng Munger (cải tiến) gồm 6 lớp có kích thước 4cm × 4cm.
- Lớp trên cùng là màng phim trong, dày 0,15 cm, ở giữa được khoét lỗ với đường kính 2,2cm.
- Lớp thứ 2 là tấm bóng kính ở giữa dùng kim côn trùng loại 00 châm 15 lỗ để cho khơng khí lưu thơng.
- Lớp thứ 3 là tấm mica đen với kích thước dày 0,3cm, ở giữa được khoét lỗ tạo nên khoang ni với đường kính 2,0cm.
- Lớp thứ 4 là miếng lá đậu cô ve để làm thức ăn cho nhện đỏ hai chấm, miếng lá thường lấy phía cuối lá, tránh lấy phần gân lá to.
- Lớp thứ 5 gồm 2-3 lớp giấy thấm ẩm. - Lớp cuối cùng là tấm mica đen dày 0,2m.
Các lớp được cố định hai bên bằng kẹp đen 25cm.
Trước khi thí nghiệm 8 giờ đặt một đoạn chỉ màu đen vào đảo nuôi NBM. Sau 8 giờ nhấc chỉ để thu trứng NBM dính vào sợi chỉ, rồi chuyển từng trứng vào trong lồng Munger có sẵn từ 5 trưởng thành cái của 1 loài nhện hại cây trồng. Đặt các lồng như vậy thành từng hàng lên khay thí nghiệm, đặt các khay thí nghiệm trong 1 hộp kín (kích thước 40 × 30 × 15cm) phía dưới có dung dịch muối bão hòa để cố định ẩm độ tương đối. Hàng ngày theo dõi dưới kính lúp 1 lần để xác định trứng nở, sự chuyển tuổi nhờ xác lột, tỷ lệ sống sót, đồng thời bổ sung nhện hại làm thức ăn. Sau 3 ngày thay lồng nuôi mới. Khi NBM chuyển sang tuổi 3 thì đưa một nhện đực và một nhện cái cùng ngày tuổi vào cho ghép đơi. Hàng ngày chuyển hết tồn bộ trứng được đẻ trong ngày ra ngoài lồng để tránh ảnh hưởng của mật độ trứng đến sức sinh sản của NBM và từng trứng sẽ được nuôi riêng rẽ mỗi trứng trong 1 lồng nuôi cho đến khi con cái thế hệ sau đã được ghép cặp đẻ quả trứng đầu tiên.Chỉ tiêu theo dõi là ngày trứng nở, ngày lột xác, ngày đẻ quả trứng đầu tiên, số trứng đẻ trong từng ngày, ngày chết sinh lý…
Hình 3.4. Lồng mika, tủ định ơn, khay dùng để nuôi sinh học NBM
3.4.5. Phương pháp đo kích thước nhện bắt mồi
Các pha nhện bắt mồi được chụp bằng kính hiển vi soi nổi và được xác định kích thước bằng phần mềm Axio Vision Rel 4.8.
3.4.6. Phương pháp đánh giá sức ăn của NBM
NBM trưởng thành cái được thả trên đĩa lá đậu sau khi cách ly cho nhịn đói 24h. Những lá đậu được cắt thành hình vng có kích thước 2,5 × 2,5cm, đặt ngửa trên tấm mút ẩm xung quanh có viền bơng ẩm. Trong đĩa lá đã có sẵn 40
trứng nhện đỏ (được đẻ trong 24h) hoặc 20 nhện non tuổi 1, tuổi 2, tuổi 3 hoặc trưởng thành cái nhện đỏ có kích thước đồng đều làm thức ăn cho nhện bắt mồi. Sau 24 giờ xác định số lượng trứng hoặc nhện non, nhện trưởng thành nhện đỏ hai chấm bị ăn, sau đó chuyển nhện bắt mồi sang đía lá mới có số lượng vật mơi tương tự ngày thứ nhất để tiếp tục theo dõi sức ăn. Thí nghiệm được tiến hành với cả 3 loài nhện bắt mồi với số lần lặp ở mỗi công thức là 10.
3.4.7. Phương pháp xử lí và tính tốn số liệu • Cơng thức tính tỷ lệ trứng nở, tỷ lệ cái: • Cơng thức tính tỷ lệ trứng nở, tỷ lệ cái: - Cơng thức tính tỷ lệ trứng nở : Tỉ lệ trứng nở(%) = Tổng số trứng nở Tổng số trứng theo dõi × 100 - Cơng thức tính tỉ lệ cái:
Tỉ lệ cái(%)= Tng s con cỏi
Tng s con theo dừiì100
ã Cơng thức xác định thời gian phát dục của một cá thể:
X =∑ Xini
N i=1
N
Trong đó: X: thời gian phát dục trung bình Xi: thời gian phát dục ở ngày thứ i ni : số cá thể phát dục ở ngày thứ i N: tổng số cá thể theo dõi
- Độ lệch chuẩn: ∆= S×tα √n
Trong đó n: dung lượng mẫu; S: phương sai mẫu; tα: giá trị t-student với α = n − 1.
• Phương pháp tính sức tăng quần thể:
Tỷ lệ tăng tự nhiên (rm) được tính dựa trên cơng thức của Birch (1948):
∑ 𝑙𝑥𝑚𝑥𝑒−𝑟𝑚∗𝑥 = 1
Trong đó: x là ngày tuổi của nhện cái (ngày), lx là tỷ lệ sống sót của nhện cái tại ngày tuổi x và mx là số lượng cá thể cái được nhện cái sinh ra tại ngày tuổi x. Giá trị mx được tính bằng cách nhân số lượng trứng đẻ trung bình của nhện cái với tỷ
lệ cái ở thế hệ sau tại ngày tuổi x của nhện cái. Phương pháp Jackknife của Meyer et al. (1986) và Hulting et al. (1990) được sử dụng để tính sai số chuẩn của giá trị rm. Các chỉ tiêu khác của sức tăng quần thể được tính theo Maia et al. (2000) như tỷ lệ sinh sản thuần (R0) chỉ số lượng cá thể cái được sinh ra bởi một nhện cái (con cái/nhện cái):
R0 = ∑ lxmx
hay thời gian 1 thế hệ (T) là khoảng thời gian cần thiết để số lượng quần thể tăng Ro lần (ngày):
T = lnRo
rm
3.5. XỬ LÝ SỐ LIỆU
Tất cả số liệu được xử lý thống kê bởi phần mềm SPSS phiên bản 20. Số liệu được kiểm tra phân bố chuẩn dựa trên kiểm định Kolmogorov–Smirnov. Khi số liệu không phải phân bố chuẩn kiểm định Kruskal Wallis được dùng để xác định sự sai khác giữa các loài nhện bắt mồi, khi có sự sai khác kiểm định Mann- Whitney U được tiến hành để xác định sự sai khác giữa từng cặp nhện bắt mồi. Trong trường hợp phân bố chuẩn, kiểm định One way ANOVA được sử dụng, sự sai khác được xác định dựa trên Tukey và Tamhane. Với so sánh tỷ lệ cái ở thế hệ thứ 2, Generalized linear model được sử dụng với số liệu được nhập theo dạng nhị phân, 1 ứng với cá thể cái và 0 ứng với cá thể đực. Trong tất cả các kiểm định giá trị P nhỏ hơn hoặc bằng 0,05 chứng tỏ sai khác có ý nghĩa.
PHẦN 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1. ĐIỀU TRA THÀNH PHẦN, DIỄN BIẾN NHỆN HẠI VÀ NHỆN BẮT MỒI TRÊN ĐẬU RAU TẠI VĂN ĐỨC - GIA LÂM VÀ VĂN GİANG - MỒI TRÊN ĐẬU RAU TẠI VĂN ĐỨC - GIA LÂM VÀ VĂN GİANG - HƯNG YÊN
Điều tra được tiến hành trên các ruộng tại Văn Đức, Gia Lâm và Văn Giang, Hưng Yên từ khi cây được 2-3 lá cho đến khi cây già và chết đi với các giống đậu cove và đậu đũa được canh tác bởi các phương pháp khác nhau : phương pháp truyền thống và theo tiêu chuẩn VietGap (được mô tả trong phụ lục). Trong thời gian điều tra thời tiết tháng 4 và tháng 5 nắng nóng, mưa xuất hiện vào giữa tháng tư khi cây leo giàn và bắt đầu ra hoa. Theo phỏng vấn thì có 3 loại thuốc bảo vệ thực vật được sử dụng trong phòng chống nhện đỏ là Ortus 5SC, Pegasus 500SC, Comite 73EC; các loại thuốc này kết hợp một số loại thuốc bảo vệ thực vật khác được sử dụng chủ yếu vào giai đoạn cây con 2-3 lá và trước khi ra hoa.
4.1.1. Điều tra thành phần nhện hại và nhện bắt mồi trên đậu cove và đậu đũa tại Văn Đức- Gia Lâm đũa tại Văn Đức- Gia Lâm
Bảng 4.1. Thành phần nhện bắt mồi và nhện hại trên đậu cove tại Văn Đức- Gia Lâm vụ Xuân hè 2019
STT Tên tiếng
việt Tên latinh Họ
Mức độ phổ biến (%) Tháng 4 Tháng 5 I Nhện hại 1 Nhện đỏ son Tetranychus
cinnabarinus Boisduval Tetranychidae + +
2 Nhện đỏ 2 chấm Tetranychus urticae Koch Tetranychidae +++ ++++ II Nhện bắt mồi 3 Nhện bắt mồi Amblyseius largoensis (Muma) Phytoseiidae + ++ 4 Nhện bắt mồi Neoseiulus
longispinosus (Evans) Phytoseiidae ++ ++
5 Nhện bắt mồi
Amblyseius
tamatavensis Blommers Phytoseiidae + +
Ghi chú: >75%: rất phổ biến (++++); 50 – 75%: phổ biến (+++); 25 – 50%: ít phổ biến (++); < 25: rất ít (+); khơng xuất hiện (-)
Qua bảng 4.1, về thành phần : có 2 lồi nhện hại xuất hiện trên đồng ruộng đó là nhện đỏ 2 chấm và đỏ son, nhện đỏ 2 chấm xuất hiện phổ biến (tháng 4) và rất phổ biến (tháng 5), trong khi nhện đỏ son xuất hiện rất ít điều này cho thấy nhện đỏ 2 chấm là nhện hại chính trên ruộng đậu cove. Có 3 lồi NBM được tìm thấy đều xuất hiện rất ít đến ít phổ biến, trong đó NBM Neoseiulus longispinosus (Evans) xuất hiện nhiều hơn so với 2 lồi nhện cịn lại, NBM N. longispinosus
được coi là nhện bản địa tại Việt Nam.
Kết quả này cũng tương đồng với kết quả nghiên cứu của Lu & cs. (2017) cho rằng nhện đỏ hai chấm Tetranychus urticae Koch là loại rất nguy hiểm và gây hại phổ biến cho cây rau như đậu cove, cà chua, dưa chuột, dâu tây,…
Theo nghiên cứu của Lương Thị Huyền (2016) NBM N. longispinosus xuất hiện rất phổ biến trên cây bưởi Diễn tại Chương Mỹ, Hà Nội năm 2015 điều này cho thấy NBM N. longispinosus có thể phát triển tốt trên nhiều loại cây trồng khác nhau.
Bảng 4.2. Diễn biến mật độ nhện hại và nhện bắt mồi trên đậu cove tại Văn Đức- Gia Lâm vụ Xuân hè năm 2019
Ngày
điều tra Giai đoạn sinh trưởng
Mật độ (con/lá) Tetranychus urticae Neoseiulus longispinosus Amblyseius largoensis 17/03 Cây con 2-3 lá 6,89 1,56 1,13 24/03 Cây con 5-6 lá 8,10 2,34 1,19 31/03 Leo giàn 10,06 2,52 1,34 07/04 Leo giàn 9,26 2,22 1,48 14/04 Ra hoa 9,76 2,27 1,69 21/04 Ra hoa 10,97 2,77 2,09 28/04 Thu quả 11,36 3,07 2,53 05/05 Thu quả 11,66 3,12 2,38 12/05 Thu quả 11,09 3,23 2,39 19/05 Thu quả 12,69 3,50 2,65 26/05 Cây già và chết dần 10,42 2,60 1,91
Theo bảng 4.2, nhện hại và NBM có mật độ thấp nhất trong giai đoạn cây con 2-3 lá. T. urticae (6,89 con/lá), N. longispinosus (1,56 con/lá), A. largoensis
(1,13 con/lá) và cao nhất khi cây thu quả lần cuối Tetranychus urticae (12,69
con/lá), N. longispinosus (3,50 con/lá), A. largoensis (2,65 con/lá). Mật độ nhện hại và NBM tăng dần trong giai đoạn từ khi cây con 2-3 lá cho đến khi leo giàn, giảm trong thời kì ra hoa và biến động trong thời kì thu quả đến khi cây già và chết dần. Điều này được lý giải bởi khi cây leo giàn người nông dân bắt đầu sử dụng các loại thuốc BVTV dẫn đến mật độ của NBM giảm trong giai đoạn từ khi leo giàn đến ra hoa, thời gian cho thu quả vào tháng 5 thời tiết nắng nóng nhưng khơng xuất hiện mưa, người nông dân vẫn sử dụng thuốc BVTV dẫn đến quần thể nhện hại và NBM khơng có sự biến động nhiều.
Mật độ NBM N. longispinosus cao hơn so với NBM A. largoensis ở tất cả
các thời kì. Tỷ lệ nhện đỏ 2 chấm /NBM N. longispinosus đạt trung bình 3,84
(nhện đỏ 2 chấm/NBM), nhện đỏ 2 chấm/A. largoensis đạt trung bình 5,40 (nhện đỏ 2 chấm/ NBM).
Bảng 4.3. Thành phần nhện bắt mồi và nhện hại trên đậu đũa tại Văn Đức- Gia Lâm vụ Xuân hè 2019
STT Tên tiếng
việt Tên latinh Họ
Mức độ phổ biến (%) Tháng 4 Tháng 5 I Nhện hại 1 Nhện đỏ son Tetranychus
cinnabarinus Boisduval Tetranychidae + ++
2 Nhện đỏ 2 chấm Tetranychus urticae Koch Tetranychidae +++ ++++ II Nhện bắt mồi 3 Nhện bắt mồi Amblyseius largoensis (Muma) Phytoseiidae + ++ 4 Nhện bắt mồi Neoseiulus
longispinosus (Evans) Phytoseiidae ++ +++
5 Nhện bắt mồi
Amblyseius
tamatavensis Blommers Phytoseiidae + +
Ghi chú: >75%: rất phổ biến (++++); 50 – 75%: phổ biến (+++); 25 – 50%: ít phổ biến (++); < 25: rất ít (+); không xuất hiện (-)
Qua bảng 4.3 thấy được trên ruộng đậu đũa cũng xuất hiện hai loài nhện hại
và 3 loài NBM tuy nhiên khác với đậu cove, ngoại trừ nhện bắt mồi
A. tamatavensis xuất hiện rất ít trong cả 2 tháng, các loài nhện cịn lại đều có mức độ phổ biến tháng 5 cao hơn tháng 4. Nhện đỏ 2 chấm vẫn cho thấy là lồi nhện hại chính trên cây đậu đũa với mức độ phổ biến (tháng 4) và rất phổ biến (tháng 5). NBM N. longispinosus là lồi nhện bắt mồi xuất hiện nhiều nhất ít phổ biến (tháng 4) và phổ biến (tháng 5).
Nhện đỏ son và NBM N. longispinosus trên cây đậu đũa có mức độ phổ biến ở tháng 5 cao hơn trên cây đậu cove.
Qua kết quả điều tra thấy rằng nhện bắt mồi và nhện hại xuất hiện nhiều hơn trên ruộng đậu đũa và có sự gia tăng về mức độ phổ biến, điều này có thể lý giải bởi cây đậu đũa là cây có khả năng chịu nóng,; trong thời điểm điều tra thời tiết nắng nóng nhưng cây vẫn sinh trưởng phát triển ổn định tạo môi trường phát triển tốt cho các loài nhện bắt mồi.
Bảng 4.4. Diễn biến mật độ nhện hại và nhện bắt mồi trên đậu đũa tại Văn Đức - Gia Lâm vụ Xuân hè năm 2019
Ngày
điều tra Giai đoạn sinh trưởng Mật độ (con/lá) Tetranychus urticae Neoseiulus longispinosus Amblyseius largoensis 17/03 Cây con 2-3 lá 4,91 1,32 1,18 24/03 Cây con 5-6 lá 6,84 1,59 1,26 31/03 Leo giàn 8,50 1,82 1,49 07/04 Leo giàn 9,55 2,02 1,70 14/04 Ra hoa 10,30 2,00 2,05 21/04 Ra hoa 11,22 2,65 2,19 28/04 Thu quả 11,04 2,93 2,23 05/05 Thu quả 11,30 2,95 2,62 12/05 Thu quả 11,76 3,09 2,76 19/05 Thu quả 12,02 3,33 2,85 26/05 Cây già và chết dần 10,13 2,32 2,11
Theo bảng 4.4, nhện hại và NBM có mật độ thấp nhất trong giai đoạn cây con 2-3 lá. T. urticae (4,91 con/lá), N. longispinosus (1,32 con/lá), A. largoensis
(1,18 con/lá) và cao nhất khi cây thu quả lần cuối T. urticae (12,03 con/lá), N. longispinosus (3,33 con/lá), A. largoensis (2,85 con/lá). Mật độ Nhện hại và
NBM tăng dần trong giai đoạn từ khi cây con 2-3 lá cho đến khi thu quả tuần đầu và biến động trong thời kì thu quả đến khi cây già và chết dần. Mật độ NBM
N. longispinosus luôn cao hơn so với A. largoensis ở tất cả các giai đoạn sinh trường. Tỷ lệ nhện đỏ 2 chấm/NBM N. longispinosus đạt trung bình 4,13 (nhện đỏ 2 chấm/NBM) tỷ lệ này cao hơn khá nhiều khi điều tra trên đậu cove, Tỷ lệ nhện đỏ 2 chấm/A. largoensis đạt trung bình 4,79 (nhện đỏ 2 chấm/ NBM) thấp hơn khá nhiều khi điều tra trên đậu cove 5,40 (nhện đỏ 2 chấm/ NBM).
4.1.2. Điều tra thành phần nhện hại và nhện bắt mồi trên đậu cove được canh tác bằng hai phương pháp khác nhau tại xã Thắng Lợi, huyện Văn canh tác bằng hai phương pháp khác nhau tại xã Thắng Lợi, huyện Văn Giang, Tỉnh Hưng Yên
Phương thức canh tác truyền thống với thói quen sử dụng thuốc BVTV có độ độc cao, phổ rộng ảnh hưởng rất lớn đến sự phát sinh phát triển của nhện bắt mồi. Khi canh tác theo tiêu chuẩn VietGap các nông hộ thường quan tâm đúng thuốc đúng liều lượng và đúng thời gian cách ly, tuy nhiên rất ít phun thuốc đúng thời điểm tại ngưỡng gây hại. Việc kết hợp các biện pháp IPM, sử dụng thiên địch tự nhiên để khống chế các loài nhện hại chưa được quan tâm đúng mức.
Hình 4.2. Ruộng đậu cove tại Văn Giang - Hưng Yên
Bảng 4.5. Thành phần NBM và nhện hại trên cây đậu cove trồng bằng phương thức canh truyền thống tại xã Thắng Lợi, Văn Giang,
Hưng Yên vụ Xuân Hè 2019
STT Tên tiếng
việt Tên latinh Họ
Mức độ phổ biến (%) Tháng 4 Tháng 5 I Nhện hại 1 Nhện đỏ son Tetranychus cinnabarinus Boisduval Tetranychidae + + 2 Nhện đỏ 2 chấm Tetranychus urticae Koch Tetranychidae +++ +++ II Nhện bắt mồi 3 Nhện bắt mồi Amblyseius largoensis (Muma) Phytoseiidae ++ ++ 4 Nhện bắt mồi Neoseiulus longispinosus (Evans) Phytoseiidae ++ ++ 5 Nhện bắt mồi Amblyseius tamatavensis Blommers Phytoseiidae + +
Ghi chú: >75%: rất phổ biến (++++); 50 – 75%: phổ biến (+++); 25 – 50%: ít phổ biến (++); < 25: rất ít (+); khơng xuất hiện (-)
Qua bảng 4.5, về thành phần: có 2 lồi nhện hại xuất hiện trên đồng ruộng đó là nhện đỏ 2 chấm và đỏ son. Nhện đỏ 2 chấm xuất hiện phổ biến, trong khi nhện đỏ son xuất hiện rất ít điều này cho thấy nhện đỏ 2 chấm là nhện hại chính trên ruộng đậu cove canh tác theo phương pháp truyền thống. Có 3 lồi NBM
được tìm thấy đều xuất hiện rất ít đến ít phổ biến, trong đó NBM
N. longispinosus và A. largoensis ít phổ biến, NBM A. tamatavensis xuất hiện rất ít.
Mức độ phổ biến của nhện hại và NBM trên ruộng canh tác truyền thông là như nhau ở hai tháng điều tra, điều này cho thấy nhện chỉ duy trì chứ khơng phát triển được.
Bảng 4.6. Diễn biến mật độ nhện bắt mồi và nhện đỏ hai chấm trên đậu cove trồng bằng phương pháp truyền thống tại xã Thắng Lợi - Văn Giang - Hưng Yên vụ