L ời cảm ơn
3.6.9. Phương pháp hóa mô miễn dịch
Bước 1: Làm sạch tiêu bản
- Khử parafin bằng cách ngâm tiêu bản trong 3 bình xylen mỗi bình ngâm
10 phút.
+ Cồn 1000 : 30 giây + Cồn 950 1: 30 giây + Cồn 950 2: 30 giây + Cồn 950 3: 30 giây + Cồn 90: 30 giây + Cồn 80: 30 giây
- Rửa nước tiêu bản 10 phút
Bước 2: Hoạt hoá enzym
- Ngâm ngập tiêu bản và hấp trong Citrat buffer pH=6 ở 1210C trong 15
phút. Để nguội tự nhiên.
- Rửa PBS 1X 3 lần (5 phút/lần).
Bước 3: Khử peroxydase nội sinh
- Dùng H2O2 30% trong dung môi Methanol theo tỉ lệ 1: 9, ngâm tiêu bản trong 30 phút.
- Rửa PBS 1X 3 lần (5 phút/lần).
Bước 4: Gắn kháng thể
- Nhỏ kháng thể kháng DTLCP lên tiêu bản. - Để tủấm 370C/1giờ hoặc 40C/qua đêm.
- Rửa tiêu bản bằng dung dịch PBS 3 lần (5 phút/lần)
Bước 5: Gắn kháng kháng thể
- Nhỏ kháng kháng thể lên tiêu bản. - Để tủấm 370C/1 giờ.
- Rửa PBS 3 lần (5 phút/lần).
Bước 6: Cho cơ chất
- Ngâm tiêu bản trong dung dịch DAB khoảng 5 phút.
- Kiểm tra dưới kính hiển vi thường. Nếu thấy xuất hiện màu vàng nâu nhạt trên lát cắt có thể ngâm thêm 1-2 phút, dừng phản ứng bằng nước sạch.
Bước 7: Đọc kết quả
- Nhuộm nhân tế bào bằng Hematoxilin, làm sạch, gắn Baume canada và
quan sát bằng kính hiển vi quang học. Nếu tiêu bản xuất hiện màu vàng nâu là