não tủy bằng kỹ thuật điện di đối lưu [6]
2.3.1. Nguyên lý:
Kháng nguyên tích điện âm từ giếng ở phía cực âm và kháng thể tích điện dương từ giếng ở phía cực dương (các Ig ở pH 8,4 di chuyển về cực âm của hệ mao dẫn theo lực điện thẩm thấu nội) sẽ di chuyển ngược chiều nhau, khi gặp nhau sẽ hình thành đường tủa đặc hiệu trong gel (thạch điện di).
2.3.2. Thực hiện kỹ thuật:
2.3.2.1. Dụng cụ, hóa chất:
- Dụng cụ: Phiến kính 7ì7cm, bàn mức phẳng ngang, bộ đục lỗ thạch, máy điện di, nguồn cung cấp điện, lò vi sóng.
- Hóa chất
+ Kháng huyết thanh thỏ kháng Hib. (+)
+ Kháng nguyên chuẩn polysaccharide của Hib (NIH – Mỹ).
+ Thạch điện di (Sigma); hóa chất pha thạch và đệm điện di (đệm Bacbital – Sigma).
/ Thạch nền: agarose thường được pha 3% trong nước cất. / Thạch điện I (type I - Sigma): 1% trong đệm bacbital pH 8,4.
2.3.2.2. Tiến hành kỹ thuật
- Phủ một lớp mỏng thạch nền lên phiến kính, phơi khô.
- Đặt phiến kớnh lờn bàn mức ngang và đổ thạch 1% lên (6ml cho phiến kớnh 7ì7cm). Để khô, đục giếng trên thạch với kích thước như sau: đường kính đĩa khoảng 2-3mm; khoảng cách từ giếng kháng thể đến giếng bệnh phẩm là 5mm.
- Nhỏ hàng trên là kháng thể (kháng huyết thanh) 5àl/ giếng; hàng dưới nhỏ 5àl bệnh phẩm (dịch não tủy); chứng dương là 5àl polysaccharide typ b của Hib + 1àl thuốc nhuộm Bromophenol.
- Đặt vào bể điện di, chạy với tốc độ 8mA/30 phút.
- Đọc kết quả sau 1-3 giờ dừng chạy điện di, nếu dương tính sẽ thấy vạch tủa trắng gần phía giếng kháng thể (cực dương).