CHƢƠNG 2 NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM
2.2. THIẾT BỊ, DỤNG CỤ VÀ HÓA CHẤT
2.2.1. Thiết bị, dụng cụ
- Máy quang phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) 800 hãng Perkin Elmer của Trung tâm khí tượng thủy văn thành phố Đà Nẵng .
- Thiết bị đo sắc ký khí gh p phổ khối (GS–MS) Agilent 7890A/5975C. Cột sắc kí HP5MS (dài 30m; đường kính trong 0.25mm; lớp phim dày 0.25µm) của Trung tâm Đo Lường khu vực 2, TP.Đà Nẵng.
- Máy đo hoạt tính sinh học của trung tâm Hà Nội. - Tủ sấy Memmert VM 400 khoảng nhiệt độ 30-280oC.
- Lò nung Nabertherm L3/6C khoảng nhiệt độ nung 30- 1100oC. - Cân phân tích satorius CP224S.
- Máy quay cất chân không Buchi- Vacuum Controller V-800.
- Các dụng cụ thí nghiệm khác như: cốc thủy tinh, bình tam giác, bếp cách thuỷ, cốc sứ, pipet, bình định mức, bình hút ẩm, nhiệt kế, cối chày sứ, giấy lọc...
2.2.2. Hóa chất
Một số hóa chất thuốc thử chính được sử dụng chính được nêu trong Bảng 2.1. Ngoài ra còn có một số hóa chất khác.
Bản 2.1. Dan m c óa c ất sử d n
STT TÊN HÓA CHẤT NƢỚC SẢN XUẤT
1 n-hexane Trung Quốc
2 Dichloromethane Trung Quốc 3 Ethyl acetate Trung Quốc
4 Methanol Trung Quốc
5 HNO3 đậm đặc Trung Quốc 6 HCl đậm đặc Trung Quốc
2.3. NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM
2.3.1. Phƣơng ph p x c định các thông số hóa lý
a. Phương pháp trọng lượng
Độ ẩm của thân lá mỗi loại bòng bong và hàm lượng tro của nguyên liệu được xác định bằng phư ng pháp trọng lượng.
b. Phương pháp vật lý
Hàm lượng một số kim loại nặng có trong mẫu nguyên liệu nghiên cứu được xác định phư ng pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử (AAS).
2.3.2. Phƣơng ph p chiết mẫu thực vật
a. Chiết bằng dung môi hữu cơ với thân lá cây bòng bòng dẻo (L. Flexuosum)
Mẫu thực vật đã sấy khô là thân lá của mỗi loại đã được nghiền nhỏ tiến hành chiết lần lượt với từng loại dung môi có độ phân cực khác nhau như n– hexane, dichloromethane, ethyl acetate, methanol.
b. Chiết bằng dung môi hữu cơ với thân lá cây bòng bong nhật (L.Japonicum)
Mẫu thực vật đã sấy khô là thân lá của mỗi loại đã được nghiền nhỏ tiến hành chiết lần lượt với từng loại dung môi có độ phân cực khác nhau như n– hexane, dichloromethane, ethyl acetate, methanol
2.3.3. Phƣơng ph p phân tích và định danh thành phần hóa học của các dịch chiết
Trong luận văn này chúng tôi phân tích và định danh thành phần hóa học các dịch chiết n-hexane, dicloromethane và ethyl acetate, methanol của mẫu thân lá cây bòng bòng nhật và mẫu thân lá cây bòng bong dẻo bằng phư ng pháp đo sắc kí khí gh p phổ khối (GC-MS).
Phư ng pháp GC - MS dựa trên c sở “nối gh p” máy sắc kí khí (GC) với máy khối phổ (MS). Các chất sau khi đi qua cột GC có thể bị ion hóa và có khả năng đầy đủ để phân tích bởi máy khối phổ MS. Kĩ thuật sắc kí cho ph p tách các cấu tử của hỗn hợp, có được các chất “nguyên chất” để đưa vào máy khối phổ với khả năng nhận diện rất ưu việt, đặc biệt là những chất có đặc trưng lưu giữ giống nhau hoặc tư ng tự nhau nhưng có phổ khối khác nhau nhờ đó có thể nhận diện được chúng. Phư ng pháp này chỉ được giới hạn với chất có thể bốc h i mà không bị phân huỷ hay là trong khi phân huỷ cho sản phẩm phân huỷ xác định dưới thể h i.
Hìn 2.4. Hệ t ốn sắc kí k ố p ổ
2.3.4. Phƣơng ph p thử hoạt tính kháng khuẩn
Tiến hành thăm dò hoạt tính kháng sinh và hoạt tính chống oxi hóa từ dịch chiết thân lá cây bòng bong nhật tại phòng Hóa sinh ứng dụng, Viện Hóa học – Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam.
Các chủng vi sinh vật và nấm sau dùng để thử nghiệm:
Gram (+) - Staphylococcus aureus - Bacillus subtilis - Lactobacillus fermentum Gram (-) - Salmonella enterica - Escherichia coli - Pseudomonas aeruginosa Nấm Candida albicans